載脂蛋白E基因多態(tài)性與Alzheimer病和血管性癡呆的關(guān)系研究

邢麗菲，王 敏，檀素娟，王艷紅*

（內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第三臨床醫(yī)學(xué)院（內(nèi)蒙古北方重工業(yè)集團(tuán)有限公司醫(yī)院），內(nèi)蒙古 包頭 014030）

在老年期癡呆疾病中，發(fā)病率最高的是血管性癡呆疾病和Alzheimer病，載脂蛋白E基因是散發(fā)性、遲發(fā)性Alzheimer病最主要的遺傳易感因素，也是作為影響人體老化的重要因素，還是腦血管疾病、動脈粥樣硬化的易患病因素，還與人體認(rèn)知功能存在緊密的相關(guān)性，本文主要對Alzheimer病、血管性癡呆疾病的載脂蛋白E基因多態(tài)性進(jìn)行分析和檢測，并與健康人群進(jìn)行對比，從而探討兩者之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年2月～2018年2月我院住院以及門診收治的血管性癡呆患者80例（VD組）與Alzheimer病患者75例（AD組）作為研究對象，均符合語言機(jī)能障礙、美國神經(jīng)病學(xué)、AD以及VD疾病的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，另選取健康人群120例作為正常組。其中，VD組女32例，男48例，年齡58～84歲，平均年齡（72.4±1.41）歲，病程1.4～6.5年，平均病程（4.29±1.25）年，排除缺血缺氧性腦病史、遺傳性血管病者，所有患者均合并動脈粥樣硬化性腦血管疾病；AD組男42例，女33例，年齡64～80歲，平均年齡（73.5±4.96）歲，病程2.2～8.3年，平均病程（4.96±1.42）年；正常組女69例，男51例，年齡61～85歲，平均年齡（71.6±8.22）歲，排除糖尿病、腦血管病、認(rèn)知功能障礙者。三組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

1.2 方法

①提取DNA：取全部參研樣本5 mL靜脈血，抗凝處理后，提取血液中外周血白細(xì)胞基因組DNA[1]；②載脂蛋白E基因多態(tài)性檢測：應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性方法進(jìn)行檢測，采用ABIPE公司生產(chǎn)的9700型PCR儀器，在25 μL PCR反應(yīng)體系中主要包含了25 μL 10×PCR反應(yīng)緩沖液，0.5 μL DMSO，0.5 μL下游引物和上游引物（50 μmol/L），0.5～1 μg DNA模板，25 μL MgCl2（25 mmol/L），Phamacia公司生產(chǎn)的1.5 μL dNTPs（2 mmol/L），欣經(jīng)科生物技術(shù)公司生產(chǎn)的1UTaq DNA聚合酶。載脂蛋白E基因進(jìn)行酶解、PCR擴(kuò)增以及電泳檢測（使用北京六一儀器廠生產(chǎn)的垂直電泳儀，配合Bio-Rad公司生產(chǎn)的凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行檢測），根據(jù)載脂蛋白E基因擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行多態(tài)分析[2]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料以“±s”表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 載脂蛋白E基因頻率

AD組、VD組攜帶ε4基因型的頻率高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但VD組和AD組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 3組載脂蛋白E基因頻率對比 [n（%）]

2.2 載脂蛋白E等位基因頻率

VD組ε2、ε3、ε4等位基因頻率分別為5.1%、74.2%、20.6%，AD組ε2、ε3、ε4等位基因頻率依次為6.2%、76.1%、17.8%，正常組依次為10.4%、84.2%、5.8%，正常組ε4等位基因頻率低于VD組、AD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），AD組與VD組ε4等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2 討 論

散發(fā)性或家族性Alzheimer病中一個(gè)至關(guān)重要的危險(xiǎn)因素是載脂蛋白Eε4等位基因，β淀粉樣蛋白能夠與載脂蛋白E進(jìn)行結(jié)合，呈現(xiàn)出特異性，且ε4的特異性小于ε3、ε2的特異性[3]。人體神經(jīng)元在攝取載脂蛋白E受體的同時(shí)，還將攝入Aβ，從而減少了細(xì)胞的外毒性。從超微結(jié)構(gòu)以及細(xì)胞免疫研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，軸突中載脂蛋白Eε4和神經(jīng)元細(xì)胞體能夠抑制軸突生長，引起微管解聚，細(xì)胞微管蛋白在經(jīng)過載脂蛋白Eε4處理后會變少[4]。載脂蛋白Eε4能夠阻止重建正常神經(jīng)元，同時(shí)還能夠加快聚集成神經(jīng)原纖維纏結(jié)的速度和雙螺旋絲的形成，同樣的載脂蛋白E與膽堿能神經(jīng)元損害和腦淀粉樣血管病變的關(guān)系較為密切。非癡呆性認(rèn)知功能障礙會受到載脂蛋白Eε4的影響，同樣載脂蛋白Eε4也是認(rèn)知功能障礙的重要危險(xiǎn)因素[5]。

綜上，載脂蛋白E基因多態(tài)性可能是血管性疾病以及腦病變疾病中的相關(guān)因素之一，與癡呆疾病的關(guān)系需要更多的研究進(jìn)行證實(shí)。