臨床生化檢驗(yàn)中改良終點(diǎn)法的研究應(yīng)用

李國強(qiáng),屈學(xué)斌

(廣東省廣州市番禺區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn)科 511400)

臨床生化檢驗(yàn)作為臨床檢驗(yàn)中最常見的檢查項(xiàng)目之一，其結(jié)果能為許多疾病的臨床診斷及治療提供具有較高價(jià)值的參考依據(jù)[1]。臨床生化檢驗(yàn)的方法中，終點(diǎn)法的應(yīng)用非常普遍，原始終點(diǎn)法主要通過手工完成操作，不僅操作麻煩、耗時(shí)，且會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[2]。為了獲得更好的檢驗(yàn)結(jié)果，現(xiàn)對(duì)原始終點(diǎn)法進(jìn)行改良，并將其應(yīng)用于臨床生化檢驗(yàn)中，臨床實(shí)踐表明，改良終點(diǎn)法的檢測(cè)效果顯著。本研究對(duì)比分析改良終點(diǎn)法與原始終點(diǎn)法在臨床生化檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值，評(píng)估改良終點(diǎn)法的臨床優(yōu)勢(shì)。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 100例血清標(biāo)本均為該院患者檢驗(yàn)標(biāo)本，符合質(zhì)量要求，無溶血、脂血等不良情況。試劑盒選用液體單試劑型葡萄糖，規(guī)格為111 mmol/L，由北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供。檢測(cè)儀器為日立7180全自動(dòng)生化分析儀。

1.2方法

1.2.1線性濃度評(píng)價(jià) 參照美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)制定的評(píng)價(jià)方案，將液體單試劑型葡萄糖加入血清基質(zhì)中，配制濃度為29.96 mmol/L的5號(hào)高值標(biāo)本與濃度為2.59 mmol/L的1號(hào)低值標(biāo)本，將其混勻，配制2～4號(hào)標(biāo)本，5號(hào)高值標(biāo)本與1號(hào)低值標(biāo)本的比例依次為3∶1、2∶2、1∶3，其濃度為5號(hào)高值標(biāo)本與1號(hào)低值標(biāo)本總和與其體積的比值[3]。

1.2.2相關(guān)性檢驗(yàn) 血清標(biāo)本進(jìn)行定標(biāo)，室內(nèi)質(zhì)量控制在控。原始終點(diǎn)法的測(cè)光點(diǎn)是33，線性范圍是0～16 mmol/L，樣品量4 μL，反應(yīng)方向?yàn)樯仙?，波長505 nm，試劑量R1是300 μL，單點(diǎn)定標(biāo)是1-point。改良終點(diǎn)法的測(cè)光點(diǎn)是33，線性范圍是0～20 mmol/L，樣品量2 μL，反應(yīng)方向?yàn)樯仙ㄩL505 nm，試劑量R1是150 μL，單點(diǎn)定標(biāo)是1-point。根據(jù)NCCLS方法，將100例血清標(biāo)本中的葡萄糖濃度分為高、中、低3個(gè)級(jí)別，按照葡萄糖濃度從小至大的序列進(jìn)行終點(diǎn)法檢測(cè)，再從大至小進(jìn)行第2次終點(diǎn)法檢測(cè)，最終結(jié)果取2次檢測(cè)結(jié)果的平均值。選取100例標(biāo)本，連續(xù)監(jiān)測(cè)10 d，運(yùn)用配對(duì)χ2檢驗(yàn)與直線回歸分析其檢測(cè)結(jié)果。

1.2.3精密度檢測(cè) 參照NCCLS方法進(jìn)行精密度計(jì)算，取出正常濃度與異常濃度2例質(zhì)控血清，參照說明書進(jìn)行復(fù)溶，分裝于塑料管中，每支250 μL，封閉管口并置于―20 ℃冷凍封存，使用前后將其融化至室溫，所有質(zhì)控血清使用期間均行2例檢測(cè)，并定時(shí)、定點(diǎn)測(cè)試，1 d 2批，上、下午各1次，連續(xù)監(jiān)測(cè)10 d。監(jiān)測(cè)期間室內(nèi)質(zhì)控在控，計(jì)算其批內(nèi)的不精密度，并計(jì)算總不精密度。

2 結(jié) 果

2.12種方法線性濃度結(jié)果比較 原始終點(diǎn)法的線性回歸方程：Y=1.440 4X―2.939 7，r=0.979 1，改良終點(diǎn)法的線性回歸方程：Y=1.070 5X―0.218 3，r=0.998 2；低、中濃度下2種檢驗(yàn)方法的線性濃度均良好，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；高濃度下改良終點(diǎn)法的線性濃度檢測(cè)范圍明顯大于原始終點(diǎn)法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2種方法線性濃度檢測(cè)結(jié)果比較(mmol/L)

2.2相關(guān)性分析 回歸方程：Y=1.011 2X―0.038 2，r=0.999 2(n=100)，2種方法檢測(cè)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3精密度結(jié)果比較 正常濃度下，改良終點(diǎn)法的批內(nèi)CV、總CV均明顯高于原始終點(diǎn)法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；異常濃度下，改良終點(diǎn)法的批內(nèi)CV、總CV均明顯低于原始終點(diǎn)法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 2種方法的精密度結(jié)果比較

注：與原始終點(diǎn)法正常濃度比較，*P<0.05；與原始終點(diǎn)法異常濃度比較，#P<0.05

3 討 論

終點(diǎn)法檢驗(yàn)期間，通過把標(biāo)本和試劑進(jìn)行混勻，一定時(shí)間后，當(dāng)反應(yīng)獲得平衡則為終點(diǎn)，此時(shí)可獲得相應(yīng)的呈色反應(yīng)[4]。反應(yīng)平穩(wěn)后，先進(jìn)行吸光度檢測(cè)，再根據(jù)其數(shù)值進(jìn)行計(jì)算，能獲得較準(zhǔn)確的標(biāo)本濃度。從理論上分析，檢測(cè)期間標(biāo)本會(huì)通過反應(yīng)出現(xiàn)變化，慢慢達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)，但從本質(zhì)上分析，標(biāo)本并未出現(xiàn)變化，而是和產(chǎn)物之間維持平穩(wěn)的化學(xué)狀態(tài)[5]。從吸光度方面進(jìn)行分析，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)會(huì)獲得平穩(wěn)的反應(yīng)時(shí)，吸光度則達(dá)到平穩(wěn)狀態(tài)，因此不會(huì)再出現(xiàn)變化。

臨床生化檢驗(yàn)過程中，葡萄糖氧化酶和總蛋白的檢測(cè)最常見，且具有一定的代表性。原始終點(diǎn)法一般通過手工操作完成檢測(cè)，改良終點(diǎn)法參照原始終點(diǎn)法的檢測(cè)原理，在保證標(biāo)本與試劑配比保持平衡的前提下，通過減半混合標(biāo)本與試劑量，于終點(diǎn)前將等量的水加入其中并進(jìn)行混勻稀釋，進(jìn)而檢測(cè)吸光度；當(dāng)加入第2、3試劑時(shí)，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)可使單試劑終點(diǎn)法與雙試劑終點(diǎn)法之間進(jìn)行轉(zhuǎn)換[6]。隨著全自動(dòng)生化分析儀在臨床生化檢驗(yàn)中的普遍運(yùn)用，生化分析的準(zhǔn)確率逐漸提高，智能化、微量化越來越明顯，不僅縮短檢測(cè)時(shí)間，也極大地減少了試劑成本[7]。

本研究運(yùn)用改良終點(diǎn)法進(jìn)行臨床生化檢驗(yàn)時(shí)，室內(nèi)質(zhì)控在控，也對(duì)室間質(zhì)量進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，結(jié)果均較為理想，檢驗(yàn)過程中無需稀釋高濃度標(biāo)本，便可獲得較寬的線性濃度范圍[8]。本研究比較2種方法在臨床生化檢驗(yàn)的應(yīng)用效果，線性濃度結(jié)果顯示，低、中濃度下2種檢驗(yàn)方法的線性濃度均良好，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而高濃度下改良終點(diǎn)法的線性濃度檢測(cè)范圍明顯大于原始終點(diǎn)法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示低、中濃度下2種方法檢測(cè)均可獲得良好效果，而高濃度下改良終點(diǎn)法的檢測(cè)效果明顯優(yōu)于原始終點(diǎn)法。相關(guān)性分析結(jié)果表明，2種方法的檢測(cè)結(jié)果相近。精密度分析說明，正常濃度下，改良終點(diǎn)法的批內(nèi)CV、總CV均明顯高于原始終點(diǎn)法(P<0.05)，異常濃度下，改良終點(diǎn)法的批內(nèi)CV、總CV均明顯低于原始終點(diǎn)法(P<0.05)，提示改良終點(diǎn)法在臨床生化檢驗(yàn)中的精密度高于原始終點(diǎn)法。

綜上所述，低、中濃度標(biāo)本的臨床生化檢驗(yàn)，改良終點(diǎn)法與原始終點(diǎn)法均可獲得良好的效果，而高濃度標(biāo)本的臨床生化檢驗(yàn)，改良終點(diǎn)法的線性濃度檢測(cè)范圍明顯加大，精密度顯著提高，所以改良終點(diǎn)法值得在臨床生化檢驗(yàn)中推廣運(yùn)用。