三七的指紋圖譜研究概述

柯昌虎 黃慧敏 趙陽(yáng) 李志浩

中圖分類號(hào) R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）13-1864-09

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.13.32

摘 要 目的：為全面控制中藥三七的質(zhì)量提供參考。方法：以“三七”“指紋圖譜”“Panax notoginseng”“Fingerpint”等為關(guān)鍵詞，組合查詢2003年1月-2017年12月在中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方、維普、PubMed等數(shù)據(jù)庫(kù)中的相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)三七指紋圖譜的相關(guān)研究進(jìn)行綜述。結(jié)果與結(jié)論：共檢索到相關(guān)文獻(xiàn)209篇，其中有效文獻(xiàn)80篇。目前三七指紋圖譜分析方法主要有色譜法（包括高效液相色譜法、薄層色譜法、毛細(xì)管電泳色譜法、氣相色譜法等）、光譜法（包括紅外光譜法、紫外光譜法、熒光光譜法、核磁共振等）、非線性化學(xué)法、生物學(xué)方法等。三七化學(xué)指紋圖譜的研究報(bào)道較多，特別是色譜指紋圖譜廣泛應(yīng)用于三七及其制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)，而基于其指紋圖譜與藥效作用結(jié)果的譜-效關(guān)系研究有待進(jìn)一步深入。

關(guān)鍵詞 三七；指紋圖譜；檢測(cè)技術(shù)；質(zhì)量控制

中藥三七[Panax notoginseng（Burk.）F. H. Chen]為五加科人參家族植物，盛產(chǎn)于云南、廣西、貴州等地區(qū)，藥用歷史已達(dá)數(shù)百年，是我國(guó)治療血證的傳統(tǒng)中藥，被認(rèn)定為“外傷科之圣藥、止血之神藥、理血之妙品”[1]。三七的根莖（剪口）、支根（筋條）、葉、花等部位均可用于治療疾病，且常以主根入藥[2]，是三七化瘀口服液、三七配方顆粒、三七通舒膠囊、血塞通注射液等中藥制劑的有效成分之一，以其為配方的許多制劑大多納入了《國(guó)家基本藥物目錄》。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，三七藥材在止血活血、保護(hù)心血管、保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)、抗炎、抗腫瘤等方面藥效顯著，主要依賴其天然皂苷類活性成分。目前已從三七不同部位中分離出80余種達(dá)瑪烷型皂苷，人參皂苷Rb1（G-Rb1）、人參皂苷Rd（G-Rd）、人參皂苷Re（G-Re）、人參皂苷Rg1（G-Rg1）和三七皂苷R1（N-R1）這5種皂苷成分常用于三七藥材含量分析及內(nèi)在質(zhì)量控制的考察指標(biāo)[3-5]。其中，G-Rb1、G-Rg1、N-R1在三七總皂苷中含量分別高達(dá)30%、20%、2.5%[6]，在2015年版《中國(guó)藥典》（一部）中，上述3種成分被列為三七的藥材和相關(guān)制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)[7]。

由于受到產(chǎn)地、生長(zhǎng)環(huán)境、年限、采收時(shí)間等因素的影響，三七藥材質(zhì)量不一，從而直接造成臨床用藥療效的不穩(wěn)定，加之市場(chǎng)上三七藥材質(zhì)量差異大，商品質(zhì)量更是真?zhèn)坞y辨，給臨床用藥安全帶來(lái)危害[8-9]。目前在相關(guān)研究中，由于缺乏皂苷參照或色譜分離能力差，半數(shù)以上的總皂苷還不能被定量檢測(cè)，而可供應(yīng)的參照物遠(yuǎn)遠(yuǎn)不符合分析要求[5，10]。因此，借助現(xiàn)代技術(shù)，全面、系統(tǒng)地控制三七藥材內(nèi)在質(zhì)量，對(duì)確保產(chǎn)品的安全與穩(wěn)定尤為重要。指紋圖譜分析是基于現(xiàn)代光譜、色譜、分子生物學(xué)技術(shù)等方法而建立起來(lái)的質(zhì)量控制模式，并逐步應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制領(lǐng)域，成為確定其身份、真實(shí)性和一致性的有力工具。與經(jīng)驗(yàn)鑒別“辨狀論質(zhì)”、初期的理化鑒別等傳統(tǒng)質(zhì)量控制方法比較，指紋圖譜可以更全面地反映出中藥復(fù)雜體系的內(nèi)部狀況，獲得準(zhǔn)確而完整的指紋，實(shí)現(xiàn)中藥的穩(wěn)定與可控，現(xiàn)已成為諸多中藥及其制劑質(zhì)量控制的重要手段[11-12]。另外，將指紋圖譜特征與藥物作用效應(yīng)進(jìn)行有機(jī)結(jié)合而建立起譜-效關(guān)系，可以更好地闡明藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。筆者以“三七”“指紋圖譜”“Panax notoginseng”“Fingerpint”等為關(guān)鍵詞，組合查詢2003年1月-2017年12月在中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方、維普、PubMed等數(shù)據(jù)庫(kù)中的相關(guān)文獻(xiàn)。結(jié)果，共檢索到相關(guān)文獻(xiàn)209篇，其中有效文獻(xiàn)80篇?，F(xiàn)對(duì)三七指紋圖譜的相關(guān)研究進(jìn)行綜述，以期為全面控制中藥三七的質(zhì)量提供參考。

1 色譜指紋圖譜

色譜能反映中藥的“化學(xué)成分”，以中藥色譜指紋圖譜來(lái)鑒別中藥的真?zhèn)魏侠砜尚校驯粡V泛應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制中，包括高效液相色譜（HPLC）、毛細(xì)管電泳色譜（CE）、薄層色譜（TLC）、氣相色譜（GC）等方法。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）明確要求[10]，所有的中草藥注射劑及相關(guān)原料在標(biāo)準(zhǔn)化中使用色譜指紋圖譜。色譜指紋圖譜通過(guò)建立共有模式，指認(rèn)特征共有峰及數(shù)目，借助相似性估計(jì)、主成分分析（PCA）和聚類分析等化學(xué)計(jì)量學(xué)方法來(lái)實(shí)現(xiàn)不同來(lái)源中藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)[13-14]。

1.1 液相色譜

1.1.1 HPLC （1）三七藥材的HPLC指紋圖譜分析。HPLC具有分離效能高、分析速度快、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，是中藥指紋圖譜研究最廣泛的檢測(cè)方法之一。建立不同產(chǎn)地及不同批次三七藥材的HPLC指紋圖譜共有模式，可為其全面質(zhì)量控制提供參考。白長(zhǎng)財(cái)?shù)萚15]收集20批不同產(chǎn)地的三七藥材，以甲醇提取，乙腈-水梯度洗脫。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，建立的HPLC圖譜相似度在0.931～0.995之間，19個(gè)共有峰中7個(gè)主要的指紋峰（3、4、5、14、15、16、17）得到確認(rèn)，分別為N-R1、G-Rg1、G-Re、G-Rb1、G-Rg2、G-Rh1、G-Rd，所建立的方法適用于三七等含有弱或無(wú)紫外吸收成分中藥材的分析。張迅杰等[16]收集10批三七藥材，以70%乙醇進(jìn)行超聲提取，乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脫，203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，建立的HPLC圖譜相似度均在0.755～0.963之間，39個(gè)共有峰中指認(rèn)了6個(gè)主要色譜峰（7、8、9、19、22、31），分別為N-R1、G-Rg1、G-Re、G-Rf、G-Rb1、G-Rd，該分析方法為三七藥材的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。劉小紅等[17]對(duì)三七藥材用70%乙醇回流提取，以分離總皂苷為主線軸，采用正向剔除分離法制備得到4種不同伴生物組成的三七總皂苷（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ），各6批，以乙腈-水梯度洗脫，203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，建立的HPLC圖譜相似度均>0.99，4種醇提三七總皂苷各有10個(gè)共有峰，N-R1、G-Rg1、G-Rb1均可在指紋圖譜中得以追溯。閆炳雄等[18]采集10批三七藥材，將其發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行指紋圖譜研究，以甲醇超聲提取，乙腈-水梯度洗脫。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，建立的HPLC圖譜相似度均>0.98，14個(gè)共有峰中8個(gè)色譜峰（2、3、4、5、6、8、12、14）得到確認(rèn)，分別為G-Rg1、G-Re、G-Rb1、G-Rg2、G-Rh1、G-Rd、G-Rg3、G-CK，并可作為鑒別三七發(fā)酵產(chǎn)物物質(zhì)基礎(chǔ)的重要指標(biāo)，從而為全面控制三七發(fā)酵產(chǎn)物總皂苷的質(zhì)量提供理論依據(jù)。劉曉麗等[19]以三七藥材制備10批三七總皂苷，乙腈-水梯度洗脫，203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，建立的HPLC圖譜共確定了22個(gè)共有峰，并應(yīng)用色譜指紋圖譜指數(shù)F等參數(shù)、雙定性雙定量相似度法和系統(tǒng)指紋定量法對(duì)三七總皂苷質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，為三七總皂苷的質(zhì)量控制提供方法。

（2）三七不同藥用部位的HPLC指紋圖譜分析。對(duì)三七不同藥用部位HPLC分析并建立其指紋圖譜，不僅能發(fā)映出藥用部位和生產(chǎn)工藝不同造成的含量差異，還可以準(zhǔn)確分辨三七不同藥用部位的質(zhì)量。崔翰明等[20]采用甲醇對(duì)三七多個(gè)部位（主根、筋條、剪口、葉、花）進(jìn)行超聲提取，以乙腈-水進(jìn)行線性梯度洗脫，203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同規(guī)格三七根（20～100頭）和剪口、筋條的HPLC指紋圖譜接近，相似度>0.971，三七主根與花和葉相似度分別為0.596和0.564，17個(gè)特征峰中8個(gè)色譜峰（4、5、6、7、8、9、10、11）得到確認(rèn)，分別為N-R1、G-Rg1或G-Re、G-Rf、G-Rb1、G-Rc、G-Rb2、G-Rb3、G-Rd；又在相同色譜條件下對(duì)不同來(lái)源的三七總皂苷提取物進(jìn)行指紋圖譜分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，三七主根、剪口和筋條3個(gè)不同部位之間以及不同生產(chǎn)工藝條件下，其主要特征峰峰面積及比例差異明顯，在同一生產(chǎn)工藝下，三者總皂苷提取物差異不大，14個(gè)特征峰中8個(gè)色譜峰（1、2、3、4、5、6、7、8）得到確認(rèn)，并與前期研究結(jié)果保持一致[21]。陳彤等[22]采用70%甲醇分別對(duì)10批三七總皂苷和10批三七剪口藥材進(jìn)行超聲提取，以乙腈-水進(jìn)行梯度洗脫，203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，建立的HPLC圖譜相似度均≥0.995，10個(gè)共有峰中指認(rèn)了5個(gè)色譜峰（1、2、3、5、9），分別為N-R1、G-Rg1或G-Re、G-Rf、G-Rb1、G-Rd，5種皂苷含量之和達(dá)84.7%，含量測(cè)定結(jié)果平均值的RSD不超過(guò)3.23%，表明三七剪口提取三七總皂苷的生產(chǎn)工藝穩(wěn)定。

（3）三七飲片的HPLC指紋圖譜分析。建立三七飲片HPLC指紋圖譜，對(duì)生、熟三七進(jìn)行對(duì)比研究，不僅可為其鑒別提供依據(jù)，也可為解決生、熟三七品質(zhì)評(píng)價(jià)提供科學(xué)的方法。李琳等[23]采集活性三七飲片和傳統(tǒng)干燥三七藥材各10批，以甲醇提取，乙腈-水梯度洗脫，203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，建立的HPLC圖譜相似度均在0.90～1.00之間，8個(gè)共有峰中指認(rèn)的5個(gè)色譜峰（1、2、3、7、8）分別為N-R1、G-Rg1、G-Rb1、G-Re、G-Rd，且活性三七中上述5個(gè)指標(biāo)成分的含量均高于傳統(tǒng)干燥三七藥材，表明活性三七飲片的指紋圖譜適用于活性三七飲片的質(zhì)量控制。陳煒璇等[24]分別采集三七藥材飲片11批、破壁粉體和破壁飲片各12批，以70%甲醇超聲提取，乙腈-水梯度洗脫，203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，建立的HPLC圖譜相似度>0.9，8個(gè)共有峰中3個(gè)共有峰（1、2、4）得到確認(rèn)，分別為N-R1、G-Rg1、G-Rb1，建立的HPLC指紋圖譜方法具有良好的精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性，適用于三七破壁飲片的質(zhì)量控制。陳榮潔等[25]采用70%甲醇對(duì)10批熟三七進(jìn)行超聲提取，乙腈-水梯度洗脫，203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在18個(gè)共有峰中指認(rèn)出14個(gè)色譜峰（1、2、3、4、5、6、7、8、12、13、14、15、17、18），分別為N-R1、G-Rg1、G-Re、G-Rb1、G-Rc、20S-G-Rh1、20R-G-Rh1、G-Rd、G-Rk3、G-Rh4、20S-G-Rg3、20R-G-Rg3、G-Rk1、G-Rg5，其中G-Rg1、G-Rb1和G-Rh4為熟三七的特征峰，且G-Rh4是區(qū)別熟三七和生三七的重要成分。連艷等[26]對(duì)10批熟三七飲片進(jìn)行指紋圖譜研究，以甲醇提取，乙腈-水梯度洗脫，203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，建立的HPLC圖譜相似度>0.9，在16個(gè)共有峰中指認(rèn)了6個(gè)色譜峰（1、2、5、12、13、14），分別為N-R1、G-Rg1、G-Rb1、G-Rc、20S-G-Rg3、20R-G-Rg3，可為熟三七飲片的鑒別及質(zhì)量控制提供依據(jù)。

（4）三七相關(guān)制劑的HPLC指紋圖譜分析。應(yīng)用HPLC指紋圖譜對(duì)三七相關(guān)制劑進(jìn)行評(píng)價(jià)分析，可為解決中藥配方在不具備飲片外形后的品種真?zhèn)舞b別和質(zhì)量?jī)?yōu)劣的評(píng)價(jià)上提供科學(xué)的方法，也為保證臨床用藥的安全、有效提供依據(jù)。周絢[27]分別取三七藥材、三七總皂苷和三七緩釋片各10批，以70%甲醇提取，乙腈-水梯度洗脫，203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三者共有峰數(shù)目分別為 17、15、14個(gè)，三七藥材的相似度>0.82，三七總皂苷提取物、三七緩釋片的相似度均>0.95，三者指紋圖譜整體特征相關(guān)性良好，三七皂苷類成分分布及比例穩(wěn)定，中間體、成品與原料藥材的相關(guān)性良好、質(zhì)量穩(wěn)定。江國(guó)華等[28]收集10個(gè)批次三七化瘀口服液，以甲醇超聲提取，乙腈-0.05%磷酸水溶液梯度洗脫。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，圖譜相似度均在0.9～1.0之間，共有峰12個(gè)。畢曉黎等[29]采用甲醇對(duì)10批三七配方顆粒進(jìn)行超聲提取，以乙腈-水梯度洗脫，203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，圖譜相似度>0.9，18個(gè)共有峰中3個(gè)色譜峰（3、4、7）得到確認(rèn)，分別為N-R1、G-Rg1、G-Rb1，可用于三七配方顆粒的定性鑒別。馬再鴻等[30]對(duì)10批三七通舒膠囊進(jìn)行指紋圖譜研究，以乙腈進(jìn)行提取，乙腈-水梯度洗脫，203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，圖譜相似度>0.96，樣品標(biāo)定4個(gè)共有指紋峰（1、2、3、4），分別為N-R1、G-Rg1、G-Re、G-Rb1，且上述4種主要有效成分的相對(duì)比例較穩(wěn)定，所建立的方法可用于三七通舒膠囊的質(zhì)量控制。

1.1.2 超高效液相色譜 超高效液相色譜（UPLC）在HPLC的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)，憑借其優(yōu)良的分離性能和高通量的檢測(cè)水平，使成分復(fù)雜的中藥體系的定性和定量檢測(cè)、代謝組學(xué)方面的研究更為準(zhǔn)確和高效，可用于中藥的成分鑒別、含量測(cè)定、指紋圖譜、代謝標(biāo)記物等方面的研究[31]。三七中的皂苷類成分紫外吸收較弱，尤其在中藥復(fù)方中皂苷含量很低，從而對(duì)檢測(cè)方法提出了更高的要求[32]。胥愛(ài)麗等[33]對(duì)10批三七配方顆粒進(jìn)行UPLC指紋圖譜研究，以甲醇超聲提取，乙腈-水梯度洗脫，203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，圖譜相似度均>0.9，11個(gè)共有指紋峰中指認(rèn)出3個(gè)色譜峰（1、2、3），分別為N-R1、G-Rg1和G-Rb1，所建立的UPLC指紋圖譜可用于三七配方顆粒的快速定性鑒別，并為三七配方顆粒的快速質(zhì)量評(píng)價(jià)提供方法。董宏然等[34]采用80%甲醇超聲提取10批丹七軟膠囊（丹參、三七），以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈梯度洗脫，208 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，圖譜相似度>0.980，32個(gè)共有峰中18個(gè)成分來(lái)自三七，所建立的指紋圖譜穩(wěn)定可靠，靈敏度高，可以作為丹七軟膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。李學(xué)林等[35]對(duì)20批注射用血栓通（凍干）進(jìn)行UPLC指紋圖譜研究，以70%甲醇提取，乙腈-水梯度洗脫，203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，圖譜相似度均>0.98，13個(gè)共有峰中指認(rèn)出5個(gè)色譜峰（5、7、8、11、13），分別為N-R1、G-Rg1、G-Re、G-Rb1、G-Rd。與HPLC比較，UPLC更加快速高效，可以作為注射用血栓通（凍干）的質(zhì)量控制的重要參考方法之一。

1.1.3 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC- MS）技術(shù)將色譜高分離能力和質(zhì)譜的靈敏性有機(jī)結(jié)合起來(lái)，可以更好地了解中藥的藥理基礎(chǔ)，并成為連接中醫(yī)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的橋梁[36]。中藥大多是從動(dòng)植物中得到，化學(xué)成分豐富多樣、藥理活性顯著有效且毒性較低，但由于缺乏科學(xué)的分析評(píng)價(jià)方法，中藥的價(jià)值一直未被充分認(rèn)識(shí)。在中草藥處方及中藥制劑中，大量的藥物成分混合在一起，給中藥的分離和檢測(cè)分析工作帶來(lái)巨大的挑戰(zhàn)。MS是一種無(wú)標(biāo)記技術(shù)，特異性強(qiáng)，可以通過(guò)離子的質(zhì)荷比可靠地檢測(cè)出分子，而串聯(lián)質(zhì)譜掃描模式則可以進(jìn)一步提高檢測(cè)的靈敏度和特異性，特別適用于復(fù)雜樣品的分析，已廣泛應(yīng)用于皂苷、黃酮類、生物堿類等許多中藥活性成分的分析[37-38]。冷靜等[39]采用HPLC-MS法對(duì)三七三醇皂苷（15批）及三七通舒腸溶微丸膠囊（10批）進(jìn)行指紋圖譜研究，以20%乙腈水溶液提取，乙腈-水梯度洗脫，采用電噴霧離子源（ESI），負(fù)離子化模式下進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，譜圖相似度>0.94，指認(rèn)共有峰14個(gè)，離子碎片圖譜中確定第2、3、4、5、9號(hào)峰分別為N-R1、G-Rg1、G-Re、G-Rf、G-Rb1。曹怡等[40]采用100倍量水飽和正丁醇超聲提取三七樣品，選用ESI離子源，正負(fù)離子模式下的全掃描，掃描范圍m/z 300～2 000（MS1），m/z 50～2 000（MS2和MS3），建立了三七質(zhì)量評(píng)價(jià)半微量方法，液相色譜-離子阱-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用（LC- MS-IT-TOF）技術(shù)指認(rèn)出指紋圖譜中的16個(gè)皂苷類成分（1～16），分別為N-R1、G-Rg1、G-Re、Ace-G-Rg1、N-R4、N-Ra、G-Rf、G-Rb1、N-R2、Mal-G-Rb1、G-Rg2、G-Rh2、Iso-G-Rb1、G-Rd、Mal-G-Rd、N-K，包括8個(gè)人參三醇型皂苷（1、2、3、4、7、9、11、12）和8個(gè)人參二醇型皂苷（5、6、8、10、13、14、15、16）。結(jié)果表明，利用指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)及對(duì)特征峰峰面積提取可進(jìn)行三七的質(zhì)量分析，避免了測(cè)定過(guò)程的煩瑣及費(fèi)用昂貴問(wèn)題，為三七樣品的質(zhì)量分析提供了簡(jiǎn)便、快速和準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)方法，且可應(yīng)用于三七不同年限等樣品的質(zhì)量評(píng)價(jià)。趙靜等[41]以乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脫，ESI負(fù)離子模式，采用超高效液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用（UPLC-Q- TOF-MS）法對(duì)三七中化合物進(jìn)行快速分析，結(jié)果可將17種皂苷類成分劃分為5種類型，即Ⅰ型皂苷[原人參二醇型（PDS）]、Ⅱ型皂苷[原人參三醇型（PTS）]、Ⅲ型皂苷（擬人參皂苷F11）、Ⅳ型皂苷[齊墩果烷型（G-R0）]和Ⅴ型皂苷（G-Rk1）；同時(shí)，對(duì)多種難以區(qū)分的同分異構(gòu)體（如G-Rc、G-Rb2、G-Rg3、擬人參皂苷F11等）也能進(jìn)行有效區(qū)分。該方法可為快速鑒定和分析含有三七皂苷和人參皂苷類成分的化合物提供參考，并為全面表征三七指紋圖譜提供依據(jù)。

1.1.4 譜-效關(guān)系 指紋圖譜使中草藥的質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)得到提升，譜圖中的主要成分被認(rèn)為是中草藥質(zhì)量評(píng)價(jià)的標(biāo)志物，但無(wú)法反映出藥物的治療作用。借助譜-效關(guān)系可以將中藥指紋圖譜中化學(xué)成分的變化與藥效結(jié)果之間的聯(lián)系反映出來(lái)，并找出與藥效活性相關(guān)的藥效成分群，從而建立中藥產(chǎn)品與其療效基本一致的反映產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量的評(píng)價(jià)體系。在中藥液相指紋圖譜分析的基礎(chǔ)上，通過(guò)譜-效關(guān)系建立中草藥綜合評(píng)價(jià)體系，可以闡明特征圖譜與藥效的相互關(guān)系，反映中藥的內(nèi)在質(zhì)量，同時(shí)確定藥效物質(zhì)基礎(chǔ)[42-43]。通過(guò)對(duì)三七的譜-效關(guān)系研究，確定用于三七全面質(zhì)量控制的主要活性成分，以期為建立三七全面質(zhì)量評(píng)價(jià)體系提供參考和依據(jù)。劉旭等[44]采用甲醇超聲提取，乙腈-水梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm，建立了三七藥材的HPLC指紋圖譜，以大鼠心肌缺血模型為對(duì)象，研究中藥三七對(duì)大鼠心肌缺血保護(hù)作用譜-效關(guān)系及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，N-R1（峰1）、G-Rg1（峰2）、G-Rb1（峰3）、G-Re（峰5）均與治療心肌缺血作用呈正相關(guān)，是中藥三七治療心肌缺血的主要有效成分，所建立的評(píng)價(jià)三七藥材譜-效關(guān)系的新方法為該類中藥的進(jìn)一步研究提供了新的思路；劉旭課題組又以心肌缺血模型為對(duì)象進(jìn)行譜-效關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)，N-R1（峰1）、G-Rg1（峰2）、G-Rb1（峰3）均與藥效呈顯著正相關(guān)，其中G-Rb1可顯著降低血清中乳酸等物質(zhì)水平的升高，G-Rg1可顯著降低血清游離脂肪酸（FFA）水平升高，是中藥三七治療心肌缺血的主要有效成分。通過(guò)譜-效關(guān)系研究獲得了藥效活性物質(zhì)，建立了三七藥材譜-效關(guān)系評(píng)價(jià)的方法，客觀反映了藥物內(nèi)在質(zhì)量，為該類中藥的創(chuàng)新研究提供了借鑒[45]。趙玉瓏[46]將三七復(fù)雜化學(xué)成分UPLC指紋圖譜與其抗凝藥效相結(jié)合，研究了三七二醇苷（PDS）、三七三醇苷（PTS）和三七總皂苷（PNS）抗凝作用的“量-效”關(guān)系，并與三七花和葉中皂苷成分的抗凝作用進(jìn)行了比較。將樣品色譜峰峰面積與其凝血酶原時(shí)間（PT）值聯(lián)系，建立了線性方程模型，發(fā)現(xiàn)N-R1、G-Rb1、G-Rd和一個(gè)未知成分為其質(zhì)量控制的主要活性物質(zhì)；量-效關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果顯示，三七根和三七葉中PDS的抗凝活性顯著高于其他樣品，且三七葉中的PDS可能是潛在的新型抗凝藥物。

1.2 CE

CE已成為藥物質(zhì)量控制的有效工具，廣泛應(yīng)用于藥用植物成分的分離鑒定，如茶多酚、糖類、脂類、生物堿、萜類化合物等。在天然復(fù)雜成分的分離和定量上，與其他分析方法比較，CE具有峰容量高、樣品和試劑用量少、分離效率高、靈敏度高、成本-效益高等優(yōu)點(diǎn)，為中藥及其復(fù)方制劑的分析、鑒定及指紋圖譜建立提供了一種高效、準(zhǔn)確的方法[47-48]。劉金丹[49]采用CE法對(duì)12批市售三七藥材進(jìn)行分析，考察了不同提取條件、背景電解質(zhì)和分離電壓3個(gè)因素對(duì)電泳圖譜的影響，以背景電解質(zhì)50 mmol/L硼砂-200 mmol/L硼酸（1 ∶ 1，V/V），運(yùn)行電壓12 kV，檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm，建立云南產(chǎn)三七的指紋圖譜。結(jié)果，共確定18個(gè)共有峰，建立的CE指紋圖譜成為三七質(zhì)量控制的一種新工具。李霞等[50]以10批次復(fù)方丹參滴丸為對(duì)象，50 mmol/L硼砂-硼酸緩沖鹽（內(nèi)含30 mmol/L十二烷基硫酸鈉）為電泳緩沖鹽，分離電壓25 kV，檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm，建立了復(fù)方丹參滴丸的CE指紋圖譜。結(jié)果，在14個(gè)共有峰中，指認(rèn)出4個(gè)色譜峰（2、3、4、6），分別為原兒茶醛、N-R1、G-Rg1、丹參素，建立的CE指紋圖譜測(cè)定方法快速、高效，為復(fù)方丹參滴丸的全面質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)。

1.3 TLC

TLC是一種成熟的可視化分析方法，操作簡(jiǎn)便、成本低、通用性強(qiáng)、特異性強(qiáng)，可以直觀而形象地反映出中藥的特征，在中草藥評(píng)價(jià)中有著廣泛的應(yīng)用[51]。TLC指紋圖譜可以在可見(jiàn)光或紫外光下，對(duì)衍生化前后的分離帶的數(shù)目、序列、位置和顏色進(jìn)行比較。隨著儀器的進(jìn)步與發(fā)展，高效薄層色譜（HPTLC）成為中草藥指紋圖譜分析強(qiáng)大的一種工具，適用于低或中等極性化合物的分析，且苯胺-二苯胺比色法的檢測(cè)靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于HPLC常用的示差折光檢測(cè)器（RI）和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）的靈敏度[52]。同時(shí)，HPTLC具有高通量、可重復(fù)、穩(wěn)定好等特點(diǎn)，與CE一樣，具有方法簡(jiǎn)單、快速的優(yōu)勢(shì)[53]。顏玉貞等[54]采用預(yù)制硅膠高效薄層板（20 cm×10 cm），二氯甲烷-無(wú)水乙醇-水（70 ∶ 45 ∶ 6.5，V/V/V）為展開(kāi)劑，硫酸乙醇溶液（10%）為顯色劑，于366 nm紫外燈下檢視三七樣品的熒光色譜。結(jié)果，建立了24個(gè)不同商品規(guī)格三七藥材皂苷類成分的HPTLC指紋圖譜，其中G-Rb1、G-Rd、G-Re、G-Rg1、N-R1等10個(gè)特征斑點(diǎn)的峰及其峰比值相對(duì)穩(wěn)定，提供的皂苷類成分分布信息可以快速考察商品三七的質(zhì)量。馬妮等[55]采用硅膠60預(yù)制板，氯仿-甲醇-水（65 ∶ 35 ∶ 10，V/V/V，取下層）為一次展開(kāi)劑，氯仿-正丁醇-甲醇-水（4 ∶ 8 ∶ 3 ∶ 4，V/V/V/V，取下層）為二次展開(kāi)劑，使三七中主要成分N-R1、G-Rg1、G-Re、G-Rb1和G-Rd得到良好分離；以硫酸乙醇溶液（10%）為顯色劑，于366 nm波長(zhǎng)處檢視，發(fā)現(xiàn)不同規(guī)格和不同產(chǎn)地的三七根部和根莖的TLC指紋圖譜特征斑點(diǎn)一一對(duì)應(yīng)，而根部與花、莖葉比較則明顯不同。結(jié)果表明，TLC能有效直觀地對(duì)三七藥材中皂苷成分進(jìn)行快速鑒定，建立的TLC指紋圖譜可為完善三七質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制體系提供依據(jù)。王明科等[56]采用硅膠G薄層板，正丁醇-醋酸乙酯-水（4 ∶ 1 ∶ 5，V/V/V，取上層）為展開(kāi)劑，硫酸乙醇溶液（10%）為顯色劑，G-Rg1、G-Rb1、N-R1作為對(duì)照品，于365 nm波長(zhǎng)處檢視，建立了三七丹參顆粒的TLC定性指紋圖譜，該方法準(zhǔn)確、快速，可有效控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量。

1.4 GC

與LC比較，GC具有一些顯著的優(yōu)點(diǎn)，如流動(dòng)相的黏度低，擴(kuò)散系數(shù)大，使得流動(dòng)阻力降低且傳質(zhì)速率加快，適用于低分子量化合物的分析[47]。中藥中含有許多活性揮發(fā)性物質(zhì)和低沸點(diǎn)成分，GC可在中藥的分析中發(fā)揮出重要作用。目前，GC及GC-MS聯(lián)用技術(shù)廣泛應(yīng)用于中藥的揮發(fā)性成分分析，靈敏度高、穩(wěn)定性好、分析效率高，特別是GC與MS聯(lián)用，對(duì)復(fù)雜成分的定性分析提供了可靠的信息[51]。李麗明等[57]利用頂空固相微萃取-GC-MS法研究三七揮發(fā)性成分的化學(xué)成分組成，分離得到離子峰93個(gè)，鑒定得到83個(gè)化合物，占揮發(fā)性物質(zhì)總量的95.83%，該方法簡(jiǎn)便、環(huán)保、快速、靈敏，適用于三七揮發(fā)性成分的研究。梁賀升等[58]利用GC-MS儀對(duì)中藥三七蒸汽溶液進(jìn)行分析研究，建立了三七藥材揮發(fā)性物質(zhì)的GC-MS圖譜。結(jié)果，總共辨析出46個(gè)色譜峰，通過(guò)檢索美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)局（NIST）的質(zhì)譜圖庫(kù)，測(cè)得了19種可能化合物，其中2-甲氧基-4-（1-丙烯基）-苯酚、十四烷酸、十八碳二烯酸、二十五烷的可信度達(dá)95%以上，且從結(jié)構(gòu)上看，三七藥材中揮發(fā)性物質(zhì)大部分為苷類化合物。通過(guò)GC指紋圖譜分析三七所含組分，為其質(zhì)量鑒別提供借鑒作用。

2 光譜指紋圖譜

不同藥材所含物質(zhì)基礎(chǔ)不同，根據(jù)其相對(duì)應(yīng)的光譜性質(zhì)的差異可以判斷藥材的品質(zhì)與質(zhì)量，包括紅外光譜（IR）、紫外光譜（UV）、熒光光譜（FS）、核磁共振（NMR）等方法。將中藥材及其制劑進(jìn)行適當(dāng)處理，經(jīng)光譜測(cè)定即可得到能夠標(biāo)識(shí)該中藥材及其制劑共有模式的指紋圖譜。光譜指紋圖譜與色譜指紋圖譜一樣，應(yīng)用于中藥及其制劑的研究中，成為中藥質(zhì)量控制的重要手段。

2.1 IR

IR可以提供分層的指紋圖譜（整體、部分和單一成分），其像“GPS”一樣，從系統(tǒng)到分子水平循環(huán)，可以“導(dǎo)航”中草藥綜合化學(xué)特征[59]。中草藥是一個(gè)復(fù)雜的體系，整個(gè)系統(tǒng)尚缺乏表征指標(biāo)來(lái)呈現(xiàn)完整的分子信息。李建蕊[60]運(yùn)用傅里葉變換紅外光譜（FTIR）技術(shù)，對(duì)三七的剪口（根莖）、主根、筋條、絨根等不同部位以及表皮、韌皮部、形成層、木部等不同組織的一維IR和二階導(dǎo)數(shù)光譜進(jìn)行了探討。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：（1）絨根在1 741 cm-1和 1 384 cm-1處的特征吸收峰與剪口、主根、筋條峰形差異較大；剪口在1 077 cm-1峰的強(qiáng)度顯著高于主根、支根、絨根在1 080 cm-1附近特征峰的強(qiáng)度；主根與筋條整體峰形相似，兩者所含化學(xué)成分的種類基本相同。（2）在不同組織中，韌皮部、形成層和木部的主體成分均為淀粉。（3）三七剪口與其表皮的一維紅外光譜和二階導(dǎo)數(shù)光譜均在1 317 cm-1和781 cm-1處有草酸鈣的特征峰，且表皮中草酸鈣的含量更高。IR既能對(duì)三七不同部位、組織以及不同加工方法的樣品進(jìn)行鑒別，又能揭示三七的主體成分、有機(jī)大分子和無(wú)機(jī)小分子成分等化學(xué)信息，IR指紋圖譜為三七藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)及其控制提供了一種準(zhǔn)確、快速、無(wú)損的檢測(cè)方法，也為中藥材的微量研究提供了方法參考。李運(yùn)[61]采用FTIR對(duì)云南道地藥材三七進(jìn)行研究，建立了三七紅外指紋圖譜，結(jié)合偏最小二乘判別分析（PLS-DA）、支持向量機(jī)（SVM）等化學(xué)計(jì)量學(xué)方法挖掘不同產(chǎn)地與地下部位三七圖譜化學(xué)信息，并進(jìn)行鑒別。結(jié)果顯示，5個(gè)不同區(qū)域的三七IR相似度很高，3 400、2 930、1 731、1 643、1 152、1 079、 1 023、927 cm-1附近有8個(gè)明顯共有峰；區(qū)域鑒別正確率為94.29%，道地產(chǎn)地與非道地產(chǎn)地鑒別正確率為97.14%；對(duì)三七主根、剪口和須根粉末進(jìn)行鑒別，鑒別正確率為100%。表明FTIR結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法能夠?qū)θ哌M(jìn)行快速準(zhǔn)確鑒別，建立的方法可為三七科學(xué)、合理、規(guī)范使用及質(zhì)量評(píng)價(jià)提供研究基礎(chǔ)。

2.2 UV

UV指紋可以表征樣品的化學(xué)性質(zhì)，借助PCA、PLS等評(píng)價(jià)工具，建立藥理學(xué)與光譜數(shù)據(jù)之間的關(guān)系，可用于評(píng)價(jià)中藥制劑的藥效強(qiáng)度，有助于篩選不同草藥或不同技術(shù)制備的中草藥制劑[62]。基于指紋圖譜分析的中藥材或中藥材質(zhì)量分析與控制越來(lái)越受到人們重視，將多組分分析方法和指紋圖譜相結(jié)合被認(rèn)為是在中草藥中篩選候選藥物的有效工具。三七中主要藥效成分為皂苷類，有較強(qiáng)的UV末端吸收。丁永麗[63]采用UV指紋圖譜共有峰率和變異峰率雙指標(biāo)序列分析、聚類分析、PCA和 PLS-MD 分析等多種指紋圖譜評(píng)價(jià)方法系統(tǒng)地研究了三七UV指紋圖譜，并探討了不同顯色劑對(duì)三七UV指紋圖譜的峰數(shù)目和吸收范圍產(chǎn)生的影響。丁永麗等[64]采用氯仿、乙醇、水分別提取三七樣品，同時(shí)在各溶劑提取液中加入一定量5%硫酸香草醛溶液，建立了三七UV指紋圖譜和三七-硫酸香草醛UV指紋圖譜。采用SIMCA軟件及共有峰率和變異峰率雙指標(biāo)序列法進(jìn)行分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，加入硫酸香草醛的三七指紋圖譜的共有峰率數(shù)據(jù)較為集中（50%～70%），其變異峰率的范圍也較?。?0%～50%）。三七-硫酸香草醛UV指紋圖譜的相似性大于三七UV指紋圖譜，雙指標(biāo)序列分析的結(jié)果與圖譜結(jié)果一致，表明兩種方法所得UV圖譜的差異性與三七產(chǎn)地和生長(zhǎng)年限均相關(guān)。王元忠等[65]采集云南10個(gè)不同地區(qū)共50個(gè)三七樣品的紫外光譜時(shí)發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地三七樣品的紫外光譜峰形相似，主要共有峰為194、200、204、210、218 nm，吸光度分布在0～4.00之間，表明三七的主要成分組成與產(chǎn)地相關(guān)性低，含量與產(chǎn)地存在相關(guān)性。PLS-DA得分圖顯示10個(gè)產(chǎn)地樣品被分為4類，且圖譜有差異的樣品區(qū)分較為明顯。表明該方法能快速準(zhǔn)確地對(duì)不同產(chǎn)地三七樣品進(jìn)行定性分析，闡明樣品UV指紋圖譜與產(chǎn)地的關(guān)系，為中藥的資源鑒別提供理論參考。鐘貴等[66]采集越南產(chǎn)野三七的根部、葉部及云南產(chǎn)野三七的根部，提取其有效成分，利用紫外-可見(jiàn)吸收光譜（UV-Vis）指紋圖譜結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)方法對(duì)其進(jìn)行鑒別分析，PCA及PLS-DA得分圖均顯示所有樣品聚為3類。越南產(chǎn)野三七根部、葉部及云南產(chǎn)野三七根部的UV-Vis指紋圖譜征共有吸收峰分別分布在206～310、206～800、206～400 nm，表明不同產(chǎn)地、部位和個(gè)體的野三七樣品存在明顯的差異。UV-Vis指紋圖譜結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)方法能有效地鑒別不同產(chǎn)地和部位的野三七樣品，從而為中藥材的質(zhì)量控制、安全使用提供參考。

2.3 FS

FS是一種操作簡(jiǎn)便、分析可靠、高效的分析方法，可以快速、準(zhǔn)確地鑒定植物材料、油包水、非法毒品和酒中的多酚等[67]。中草藥中存在的某些化學(xué)成分（特別是有效成分）在紫外燈或可見(jiàn)光下可以產(chǎn)生一定的熒光，據(jù)此性質(zhì)可以實(shí)現(xiàn)FS檢測(cè)，F(xiàn)S現(xiàn)象可以反映出中藥材的內(nèi)在質(zhì)量。三七中含有共軛基團(tuán)的成分在紫外光照射下會(huì)發(fā)射出FS。劉智等[68]采用FS對(duì)三七皮和芯的溶出物成分進(jìn)行研究，發(fā)射波長(zhǎng)為680 nm，激發(fā)波長(zhǎng)為280 nm，發(fā)現(xiàn)三七皮醇提液的FS圖中比三七芯的FS圖多1個(gè)熒光峰，據(jù)此表明三七皮與芯在成分上的差異。張舉成等[69]以血塞通凍干粉作為對(duì)照，采用固體三維熒光技術(shù)建立三七及其支根的固體三維FS指紋圖譜。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三七粉末熒光峰出現(xiàn)在230/340、290/340、370/480、430/540 nm，最強(qiáng)熒光峰為290/340 nm；三七支根的熒光峰出現(xiàn)在280/450、290/350、350 /440 nm，最強(qiáng)熒光峰為350/440 nm；血塞通凍干粉熒光峰出現(xiàn)在230/330、280/660、300/340、370/590、440/550、490/610 nm，最強(qiáng)熒光峰為300/340 nm。三者的熒光峰均出現(xiàn)在290～300/340～350 nm，且在血塞通凍干粉和三七粉末中該峰最強(qiáng)。另外，在血塞通凍干粉和三七粉末中有230/330～340 nm的熒光峰，三七支根沒(méi)有。因此，選取以上2個(gè)熒光峰作為特征熒光峰進(jìn)行檢測(cè)，可以有效地鑒別三七粉末與三七支根，實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品質(zhì)量的快速評(píng)價(jià)。

2.4 NMR

NMR已成為鑒別中藥中有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)的有力手段，其指紋圖譜具有高度的特征性和重現(xiàn)性，且與植物品種間存在十分準(zhǔn)確的對(duì)應(yīng)關(guān)系，譜圖所提供的中藥特征性化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)和組成信息對(duì)于中藥生產(chǎn)中的質(zhì)量控制具有重要的實(shí)用價(jià)值。袁衛(wèi)梅等[70]采用購(gòu)自北京、昆明、貴陽(yáng)、鄭州、新鄉(xiāng)等地的商品三七藥材，規(guī)格包括20、30、40、60頭，建立了三七特征總提物B的1H-NMR指紋圖譜。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各種規(guī)格的三七的1H-NMR指紋圖譜具有很好的一致性，表明其在特征性化學(xué)成分的組成方面是一致的。三七的藥用化學(xué)成分受到產(chǎn)地的影響，不同產(chǎn)地的三七樣品各區(qū)積分面積所占比重有一定差異。趙羽等[71]對(duì)三七主根樣品進(jìn)行超聲提取，并用noesypr1d脈沖序列預(yù)飽和水峰壓制試驗(yàn)，獲取了8種不同產(chǎn)地三七的1H-NMR指紋圖譜，峰形十分相似，表明化學(xué)成分近似；某些特征信號(hào)強(qiáng)度比例明顯不同，說(shuō)明不同產(chǎn)地三七主根中的三萜皂苷的含量和組成比例不同。

3 非線性化學(xué)指紋圖譜

非線性化學(xué)指紋圖譜技術(shù)是一種基于化學(xué)振蕩和化學(xué)湍流等非線性化學(xué)反應(yīng)的全新技術(shù)，其通過(guò)對(duì)樣品整體檢測(cè)化學(xué)或活性成分來(lái)反映樣品的整體信息。該技術(shù)無(wú)需分離和提純等預(yù)處理技術(shù)，是一種簡(jiǎn)單、快速、經(jīng)濟(jì)的中藥鑒別和質(zhì)量控制技術(shù)。以非線性化學(xué)反應(yīng)來(lái)表征中藥復(fù)雜體系成分群集特征的指紋圖譜，可以達(dá)到中藥材的混偽品及來(lái)源鑒別的目的[72-73]。羅志平等[74]采用非線性化學(xué)方法對(duì)超微三七粉進(jìn)行研究，以0、4.2、9.2 kGy 3種劑量的60Co-γ射線對(duì)其進(jìn)行輻照處理，建立了輻照前后三七粉非線性化學(xué)指紋圖譜。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，輻照劑量與振蕩壽命及停振時(shí)間之間存在良好的線性負(fù)相關(guān)關(guān)系；三七粉輻照前后的非線性化學(xué)指紋圖譜存在一定的差異，且重復(fù)性較好；而隨著輻照劑量的增大，輻照過(guò)的三七粉與未輻照處理的三七粉指紋圖譜中的系統(tǒng)相似度越來(lái)越小。表明非線性化學(xué)指紋圖譜技術(shù)可用于鑒別不同劑量輻照處理的超微三七粉。王東艷等[75]采用H+-Mn2+-CH3COCH3-BrO3為振蕩體系，加入中藥粉末在封閉體系中發(fā)生的非線性化學(xué)反應(yīng)，通過(guò)記錄體系中電位隨時(shí)間的變化，獲得中草藥的電化學(xué)指紋圖譜。實(shí)驗(yàn)測(cè)定了三七及其偽品（白術(shù)、莪術(shù)）的電化學(xué)指紋圖譜，中藥材（三七等）作為有機(jī)底物，與溶劑發(fā)生氧化還原反應(yīng)，固定其他反應(yīng)條件不變，加入不同反應(yīng)底物，所得到的電化學(xué)指紋圖譜特色鮮明，三七及其偽品的電化學(xué)指紋圖譜具有明顯的差別，據(jù)此來(lái)鑒別三七。

4 生物指紋圖譜

在探討中藥藥理的過(guò)程中，人們發(fā)現(xiàn)生物指紋技術(shù)具有良好的選擇性和高通量性能，其結(jié)合了化學(xué)指紋和生物評(píng)價(jià)，特別適合于復(fù)雜成分、整體調(diào)節(jié)、多靶點(diǎn)中藥的分析，獲取信息量大、分析能力強(qiáng)且無(wú)污染，使其備受關(guān)注[76]。迄今為止，人們對(duì)中藥的藥理學(xué)依然知之甚少，對(duì)一些具有潛在毒性的植物、動(dòng)物和礦物中藥心存疑慮，某些傳統(tǒng)的指紋識(shí)別技術(shù)已不能完全滿足該領(lǐng)域的新要求[77]。趙熙等[78]采用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（RAPD）技術(shù)，對(duì)文山和廣西兩地的三七進(jìn)行DNA指紋圖譜的鑒別研究，從45個(gè)引物中篩選出23個(gè)擴(kuò)增穩(wěn)定且譜帶清晰的引物，獲得211個(gè)遺傳標(biāo)記。結(jié)果顯示，不同樣品間有遺傳差異，各自具有不同的遺傳特征。張英等[79]采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)對(duì)三七及其7種偽品的18S rRNA和matK基因部分核苷酸序列以及不同產(chǎn)地三七的DNA分子特征進(jìn)行測(cè)定時(shí)發(fā)現(xiàn)，三七及其偽品的核糖體18S rRNA基因序列存在很大的差異，而不同產(chǎn)地的三七的核糖體18S rRNA和葉綠體matK基因序列特征完全一致，結(jié)合三七的化學(xué)指紋特征，可以為三七的正品藥材基原鑒定提供分子和化學(xué)依據(jù)。張靖等[80]應(yīng)用第二內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS2）序列DNA條形碼對(duì)三七飲片進(jìn)行分子鑒定，利用化學(xué)指紋圖譜結(jié)合DNA分子鑒定技術(shù)進(jìn)行考察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三七精準(zhǔn)煮散飲片與市售原飲片基本屬性相一致，但煮散飲片的浸出、有效成分溶出及質(zhì)量均一性均有明顯提高，提示煮散飲片可提高臨床用藥的精準(zhǔn)性。

5 結(jié)語(yǔ)

三七是我國(guó)的名貴中藥，其止血、消腫、鎮(zhèn)痛等作用顯著，極具藥用價(jià)值，一直以來(lái)被廣泛應(yīng)用于臨床。三七藥材質(zhì)量的優(yōu)劣直接影響著藥物療效以及制劑的穩(wěn)定性與可控性，如何保證優(yōu)質(zhì)藥材來(lái)源，完善藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，利用現(xiàn)代分析技術(shù)把好藥材質(zhì)量關(guān)，是當(dāng)下及未來(lái)中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展的必然要求。

中藥指紋圖譜是一種綜合的、可量化的鑒定手段，能夠全面反映出中藥的內(nèi)部狀況，有效彌補(bǔ)單一指標(biāo)成分質(zhì)量控制的弊端，成為中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)的有力手段。三七化學(xué)指紋圖譜技術(shù)主要借助光譜、色譜等現(xiàn)代先進(jìn)技術(shù)，建立三七藥材及其制劑的共有模式，可以較為全面地反映其所含復(fù)雜化學(xué)成分的整體情況及其制劑內(nèi)在質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性，同時(shí)可以區(qū)分不同年限三七的質(zhì)量差異，能夠快速鑒定和分析含三七皂苷和人參皂苷化合物。非線性化學(xué)指紋圖譜是從非線性化學(xué)的角度對(duì)三七等中藥進(jìn)行真?zhèn)舞b別和質(zhì)量控制的一種新方法，與色譜、光譜指紋圖譜比較，該技術(shù)無(wú)需煩雜的預(yù)處理過(guò)程，適用于各種相態(tài)和劑型樣本的分析鑒別。三七生物指紋圖譜則利用基因組學(xué)和蛋白質(zhì)學(xué)技術(shù)，在分子水平上反映其遺傳多樣性，并體現(xiàn)其特殊性，即藥材的“道地性”，已成為三七等中藥材真?zhèn)舞b別的重要手段。

隨著三七的指紋圖譜研究的不斷深入，指紋圖譜與藥物效應(yīng)之間構(gòu)建的譜-效關(guān)系日益引起關(guān)注。目前，三七譜-效關(guān)系研究尚處于初步階段，“譜”主要集中在液相色譜指紋圖譜，完整的“譜”還不能表征完整的“效”，無(wú)法完全實(shí)現(xiàn)“譜”“效”一致。因此，綜合運(yùn)用各種現(xiàn)代分析技術(shù)對(duì)三七進(jìn)行深入全面的分析研究，闡明三七的譜-效關(guān)系，明確藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，全面控制三七藥材、飲片及其制劑的質(zhì)量，進(jìn)一步完善其鑒別體系和質(zhì)量評(píng)價(jià)系統(tǒng)，不僅是三七的合理開(kāi)發(fā)和應(yīng)用的要求，更是臨床精準(zhǔn)用藥的需要。

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（收稿日期：2018-02-23 修回日期：2018-05-14）

（編輯：余慶華）