金針菇菌株農(nóng)藝性狀評(píng)價(jià)及遺傳多樣性分析

楊和川 譚一羅 蘇文英 秦裕營(yíng) 馬騰 周振玲 浦漢春

摘要：【目的】分析評(píng)價(jià)金針菇菌株的農(nóng)藝性狀及其遺傳多樣性，為金針菇種質(zhì)資源分類(lèi)鑒定、保藏及遺傳育種等提供理論參考。【方法】采用拮抗對(duì)峙試驗(yàn)、ISSR標(biāo)記分析和農(nóng)藝性狀測(cè)定相結(jié)合的方法綜合分析29株采自山東和江蘇地區(qū)的金針菇菌株遺傳多樣性，并利用NTSYSpc 2.11F計(jì)算菌株間遺傳相似系數(shù)，采用非加權(quán)配對(duì)算數(shù)平均法（UPGMA）構(gòu)建聚類(lèi)樹(shù)狀圖?！窘Y(jié)果】29株金針菇菌株間有246組發(fā)生拮抗反應(yīng)，有160組未發(fā)生拮抗反應(yīng)。供試菌株的菌蓋和菌柄顏色有黃色、淺黃色、乳白色和白色4種，菌柄長(zhǎng)度15.00～21.20 cm，菌蓋直徑0.73～1.72 cm，單袋產(chǎn)量332～513 g，生育期41～68 d。白色或乳白色金針菇菌株的生物學(xué)效率為73.0%～102.6%，生育期48～68 d;黃色或淺黃色金針菇菌株的生物學(xué)效率為66.4%～87.2%，生育期41～58 d，表明白色或乳白色金針菇菌株較黃色或淺黃色菌株產(chǎn)量較高，商品性狀優(yōu)良，但生育期較長(zhǎng)。篩選出的8條ISSR引物共計(jì)擴(kuò)增多態(tài)性位點(diǎn)270個(gè)，多態(tài)性比率為94%。供試金針菇菌株遺傳相似系數(shù)為0.860～0.900，在遺傳相似系數(shù)0.870處，29株金針菇菌株可分為五大類(lèi)群?！窘Y(jié)論】菌株間是否發(fā)生拮抗反應(yīng)與菌株子實(shí)體顏色無(wú)關(guān)。江蘇和山東兩地區(qū)的金針菇菌株具有較豐富的遺傳差異和遺傳多樣性，但親緣關(guān)系較近。

關(guān)鍵詞： 金針菇;遺傳多樣性;農(nóng)藝性狀;ISSR;拮抗反應(yīng);遺傳相似系數(shù)

中圖分類(lèi)號(hào)： S646.150.24? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2018）12-2371-08

Agronomic traits evaluation and genetic diversity analysis of Flammulina filiformis

YANG He-chuan， TAN Yi-luo， SU Wen-ying， QIN Yu-ying，

MA Teng， ZHOU Zhen-ling， PU Han-chun*

（Lianyungang Academy of Agricultural Sciences， Lianyungang， Jiangsu? 222000， China）

Abstract：【Objective】To provide valuable references for identification， protection and breeding of Flammulina filiformis，the agronomic traits and genetic diversity of F. filiformis strains were analyzed. 【Method】Antagonistic reaction，ISSR marker analysis and agronomic traits test were used to investigate the genetic diversity of 29 tested strains from Shandong and Jiangsu. The genetic similarity coefficient among tested strains was calculated by NTSYSpc 2.11F， and the clustering tree was constructed by unweighted pairwise arithmetic average method（UPGMA）. 【Result] In the antagonistic reaction，246 groups had antagonistic phenomenon and 160 groups did not in the 29 strains. There were four types of strain cap and stipe color：yellow，light yellow，milky white and white. The length of the stipe was 15.00-21.20 cm，the diameter of the cap was 0.73-1.72 cm，and the yield of single bag was 332-513 g. The growth period was 41-68 d. The biological efficiency of white and milky strains was 73.0%-102.6%，and the growth period was 48-68 d. The biological efficiency of yellow and light yellow strains was 66.4%-87.2%，and the growth period was 41-58 d，indicating that the yield of white and milky F. filiformis strains were generally higher than the yellow and light yellow strains，and their commodity characters were fine， but the growth period was relatively longer. A total of two hundred and seventy polymorphic sites were amplified by eight ISSR primers，and the percentage of polymorphism was 94%. The genetic similarity coefficient among the 29 tested strains ranged from 0.860 to 0.900. All the twenty-nine strains could be clustered into five groups at the genetic similarity coefficient of 0.870. 【Conclusion】The results showed that the antagonistic reaction between F. filiformis strains is independent of the fruit body color. F. filiformis strains in Jiangsu and Shandong have rich genetic differences and gene-tic diversity， but their genetic relationship is relatively close.

Key words： Flammulina filiformis; genetic diversity; agronomic characters; ISSR;antagonistic reaction; genetic similarity coefficient

0 引言

【研究意義】金針菇（Flammulina filiformis）又名樸菇、冬菇等（Wang et al.，2018），是世界第四大食用菌，具有廣闊的市場(chǎng)前景。我國(guó)金針菇栽培歷史悠久，東起福建，西至四川，北起黑龍江，南至廣東，均有大面積栽培（張介馳等，2007）。目前市場(chǎng)上金針菇菌種生產(chǎn)銷(xiāo)售混亂，同種異名、異種同名現(xiàn)象較普遍，不僅影響實(shí)際生產(chǎn)中的菌種管理，還給金針菇種性鑒定、良種選育等科研及產(chǎn)業(yè)體系建立帶來(lái)巨大困難。因此，分析金針菇種質(zhì)資源遺傳多樣性，對(duì)金針菇種質(zhì)資源保藏與鑒定、遺傳育種和產(chǎn)業(yè)發(fā)展等具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】簡(jiǎn)單重復(fù)序列區(qū)間（ISSR）（Karoly，2004）、酯酶同工酶（王波等，2008）、相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性（SRAP）（許峰等，2010）、目標(biāo)起始密碼子多態(tài)性（SCoT）（張斌，2013）、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（AFLP）（陸歡等，2014）、簡(jiǎn)單重復(fù)序列（SSR）（陸歡等，2015）、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（RAPD）（李紅等，2018）等是從蛋白質(zhì)或DNA水平鑒定菌株間的遺傳差異，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于金針菇遺傳多樣性研究。其中，ISSR是一種新型微衛(wèi)星類(lèi)分子標(biāo)記，通過(guò)錨定SSR對(duì)簡(jiǎn)單重復(fù)序列的遺傳信息進(jìn)行多態(tài)性擴(kuò)增，綜合了多態(tài)性豐富、重復(fù)性好、成本低等優(yōu)點(diǎn)，且無(wú)需預(yù)知基因組序列信息（Xie et al.，2018）。劉勇男等（2015）采用ISSR、RAPD和SRAP分子標(biāo)記對(duì)6株金針菇菌株的遺傳多樣性進(jìn)行綜合分析，結(jié)果表明3種分子標(biāo)記的綜合分析結(jié)果比單一分子標(biāo)記的分析結(jié)果更準(zhǔn)確可靠。劉昊（2016）利用SSR分子標(biāo)記分析33株金針菇菌株遺傳多樣性，結(jié)果表明我國(guó)金針菇種質(zhì)資源存在較高的遺傳變異。黃龍花等（2018）分析11株野生金針菇的遺傳多樣性，結(jié)果表明地域分布越近的菌株更易聚為一支，且分子鑒定結(jié)果與傳統(tǒng)形態(tài)鑒定結(jié)果吻合?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】山東和江蘇是我國(guó)食用菌的主產(chǎn)區(qū)，金針菇種質(zhì)資源的研究多集中于遺傳多樣性分析或農(nóng)藝性狀測(cè)定，其中遺傳多樣性分析主要采用瓊脂糖凝膠電泳或聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)方法。與上述傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳的準(zhǔn)確性和靈敏度更高，適合大量樣本檢測(cè)，但目前鮮見(jiàn)有關(guān)利用熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳技術(shù)研究金針菇種質(zhì)資源遺傳多樣性的文獻(xiàn)報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】采用拮抗對(duì)峙試驗(yàn)、ISSR分子標(biāo)記分析和農(nóng)藝性狀測(cè)定相結(jié)合的方法綜合分析29株采自山東和江蘇地區(qū)的金針菇菌株遺傳多樣性，并利用NTSYSpc 2.11F計(jì)算菌株間遺傳相似系數(shù)，采用非加權(quán)配對(duì)算數(shù)平均法（UPGMA）構(gòu)建聚類(lèi)樹(shù)狀圖，以期為金針菇種質(zhì)資源分類(lèi)鑒定、保藏及遺傳育種等提供理論參考。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試材料為29株采自山東和江蘇地區(qū)的金針菇菌株，其編號(hào)和來(lái)源地如表1所示。10×PCR Bu-ffer（含Mg2+）、Taq DNA聚合酶、dNTP和ROX1000 Marker均購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司。主要儀器設(shè)備：高速臺(tái)式低溫離心機(jī)（Eppendorf，德國(guó)），PCR儀（Eppendorf，德國(guó)），DG-3D電泳槽（北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司），ABI PRISM 377 Sequencer測(cè)序儀（ABI，美國(guó)）。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 拮抗對(duì)峙試驗(yàn) 分別取培養(yǎng)7 d的29株金針菇菌株菌落邊緣（0.5 mm2）接種于MYG固體培養(yǎng)基（葡萄糖5 g、麥芽糖10 g、酵母粉5 g、瓊脂粉15 g和水1000 mL，pH自然）平皿的3個(gè)象限進(jìn)行對(duì)峙培養(yǎng)。將培養(yǎng)基平皿置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10 d，觀(guān)察并記錄菌絲間的拮抗反應(yīng)（陳雪鳳等，2016）。

1. 2. 2 農(nóng)藝性狀測(cè)定 將菌種接種于MYG液體培養(yǎng)基，25 ℃下?lián)u床（150 r/min）培養(yǎng)7 d。不同供試菌株分別采用對(duì)折徑聚丙烯栽培袋（17.5 cm×38.0 cm）進(jìn)行出菇試驗(yàn)。栽培料配方為棉籽殼38%、木屑25%、麩皮32%、玉米粉3%、輕質(zhì)碳酸鈣1.5%和過(guò)磷酸鈣0.5%，每袋菌包干重500 g，121 ℃高壓滅菌2 h，冷卻后接種液體菌種，置于20～22 ℃下培養(yǎng)。每菌株接種50袋，每組10袋，共設(shè)5組。菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)袋后按常規(guī)方法進(jìn)行出菇管理，出菇溫度10～12 ℃。出菇后，各菌株隨機(jī)挑選5個(gè)菌包，測(cè)量并記錄菌株的主要農(nóng)藝性狀，并對(duì)菌柄長(zhǎng)度、菌蓋直徑和單袋均產(chǎn)進(jìn)行方差分析。

1. 2. 3 DNA提取 將供試菌株分別接種于MYG固體培養(yǎng)基平皿，25 ℃恒溫培養(yǎng)10 d，收集菌株氣生菌絲體于1.5 mL離心管中，液氮研磨成粉末后采用CTAB法提取DNA，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2. 4 ISSR引物篩選 從加拿大哥倫比亞大學(xué)（UBC）公布的96條ISSR引物中隨機(jī)挑選15條引物序列（表2），由北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司合成。利用15條ISSR引物分別對(duì)2株白色金針菇菌株和2株黃色金針菇菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，篩選條帶清晰、多態(tài)性豐富的引物進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

1. 2. 5 ISSR-PCR擴(kuò)增 ISSR-PCR反應(yīng)體系25.0 μL：DNA模板2.0 μL，上、下游引物各0.5 μL，dNTPs 0.5 μL，10×PCR Buffer 2.5 μL，Taq DNA聚合酶0.5 μL，ddH2O補(bǔ)足至25.0 μL。擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性5 min;95 ℃ 30 s，退火溫度（表2）退火45 s，72 ℃ 2 min，進(jìn)行45個(gè)循環(huán);72 ℃延伸2 min，4 ℃保存。PCR產(chǎn)物采用熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。

1. 2. 6 數(shù)據(jù)處理 觀(guān)察電泳圖譜，并進(jìn)行條帶數(shù)目統(tǒng)計(jì)，相同位置上有條帶記為1，無(wú)條帶記為0，轉(zhuǎn)換為0/1矩陣。采用NTSYSpc 2.11F計(jì)算菌株間遺傳相似系數(shù)，并通過(guò)非加權(quán)配對(duì)算數(shù)平均法（UPGMA）構(gòu)建聚類(lèi)樹(shù)狀圖。

2 結(jié)果與分析

2. 1 拮抗對(duì)峙試驗(yàn)結(jié)果

拮抗反應(yīng)是初步鑒定食用菌菌株差異的重要方法。不同菌株在同一平皿培養(yǎng)后，菌絲接觸能融合且與其他象限內(nèi)菌絲無(wú)明顯差異，鑒定為無(wú)拮抗反應(yīng);若菌絲接觸后在菌絲接觸區(qū)域氣生菌絲稀疏甚至無(wú)氣生菌絲的隔離帶或菌絲接觸區(qū)域氣生菌絲稠密交織形成隆起，甚至在隔離帶的基質(zhì)內(nèi)產(chǎn)生黃褐色物質(zhì)（以上簡(jiǎn)稱(chēng)為拮抗線(xiàn)），則鑒定為有拮抗反應(yīng)。由圖1可看出，F(xiàn)03、F08和F09組合間均無(wú)拮抗反應(yīng)（圖1-A），說(shuō)明親緣關(guān)系較近;F01、F06和F07間均出現(xiàn)明顯拮抗線(xiàn)（圖1-B），F(xiàn)01分別與F12和F13出現(xiàn)明顯拮抗線(xiàn)（圖1-D），F(xiàn)07分別與F03和F06間出現(xiàn)明顯拮抗線(xiàn)（圖1-C），說(shuō)明親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。據(jù)此統(tǒng)計(jì)29株供試金針菇菌株拮抗結(jié)果（表3），發(fā)現(xiàn)有246組發(fā)生拮抗反應(yīng)，160組未發(fā)生拮抗反應(yīng)，表明菌株間是否發(fā)生拮抗反應(yīng)與菌株子實(shí)體顏色無(wú)關(guān)，29株供試菌株具有較豐富的遺傳差異。

2. 2 主要農(nóng)藝性狀測(cè)定結(jié)果

對(duì)29株金針菇菌株進(jìn)行出菇試驗(yàn)，并測(cè)定主要農(nóng)藝性狀，結(jié)果如表4所示。29株金針菇菌株的菌蓋和菌柄顏色有黃色、淺黃色、乳白色和白色4種，根據(jù)菌蓋顏色劃分，F(xiàn)01、F02、F03、F04、F05、F08、F09、F10、F11、F18、F19、F20、F21、F25、F26和F27屬于白色或乳白色菌株，F(xiàn)06、F07、F12、F13、F14、F15、F16、F17、F22、F23、F24、F28和F29屬于黃色或淺黃色菌株，各菌株的菌蓋和菌柄顏色相似或一致（除F06和F07外）。根據(jù)菌柄直徑，29株金針菇菌株可分為粗柄型（直徑≥0.50 mm）和細(xì)柄型（直徑<0.50 mm）兩大類(lèi)，其中F03、F04、F10、F13、F22、F23和F29為粗柄型，其余菌株為細(xì)柄型。29株金針菇菌株生育期為41～68 d，可分為早熟菌株和晚熟菌株兩大類(lèi)，其中早熟菌株生育期41～54 d，晚熟菌株生育期58～68 d。29株金針菇菌株平均單袋產(chǎn)量332～513 g，生物學(xué)效率為66.4%～102.6%，可將其分為三大類(lèi)：生物學(xué)效率85.0%及以上為高產(chǎn)菌株，占24.1%;生物學(xué)效率75.0%～84.9%為中產(chǎn)菌株，占55.2%;生物學(xué)效率74.9%及以下為低產(chǎn)菌株，占20.7%。綜合分析發(fā)現(xiàn)，29株金針菇菌株中，白色或乳白色菌株的生物學(xué)效率為73.0%～102.6%，生育期48～68 d;黃色或淺黃色菌株的生物學(xué)效率為66.4%～87.2%，生育期41～58 d，表明白色或乳白色金針菇菌株較黃色或淺黃色菌株產(chǎn)量較高，商品性狀優(yōu)良，但生育期較長(zhǎng)。

2. 3 ISSR分析結(jié)果

從15條ISSR引物中篩選出8條條帶清晰、多態(tài)性豐富的ISSR引物，分別是UBC807、UBC809、UBC811、UBC841、UBC842、UBC880、UBC881和UBC888（圖2）。利用其對(duì)金針菇菌株進(jìn)行遺傳多樣性分析，結(jié)果顯示，共擴(kuò)增出287個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)270個(gè)，多態(tài)性比率為94%，表明29株金針菇菌株具有豐富的遺傳多樣性（圖3）。

2. 4 聚類(lèi)分析結(jié)果

根據(jù)菌株間遺傳相似系數(shù)構(gòu)建29株金針菇菌株的UPGMA聚類(lèi)樹(shù)狀圖（圖4），29株金針菇菌株遺傳相似系數(shù)為0.860～0.900，其中以F12和F16的遺傳相似系數(shù)最高，說(shuō)明二者親緣關(guān)系最近;以F02和F29的遺傳相似系數(shù)最低，即二者親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。在遺傳相似系數(shù)0.860處，29株金針菇菌株聚為同一類(lèi)群，其中，F(xiàn)29單獨(dú)聚為一亞類(lèi)，說(shuō)明F29與其他菌株遺傳差異明顯，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。在遺傳相似系數(shù)0.870處，29株金針菇菌株分為五大類(lèi)群，類(lèi)群Ⅰ包含5株菌株，類(lèi)群Ⅱ包含2株菌株，類(lèi)群Ⅲ包含18株菌株，類(lèi)群Ⅳ包含3株菌株，類(lèi)群Ⅴ包含1株菌株。

當(dāng)29株金針菇菌株分為五大類(lèi)群時(shí)，類(lèi)群Ⅰ子實(shí)體菌蓋和菌柄均為白色，且類(lèi)群內(nèi)各菌株均不發(fā)生拮抗反應(yīng);類(lèi)群Ⅱ包含2株白色金針菇菌株，二者不發(fā)生拮抗反應(yīng)，說(shuō)明同一類(lèi)群內(nèi)金針菇菌株親緣關(guān)系較近。雖然類(lèi)群Ⅳ內(nèi)菌株間也不發(fā)生拮抗反應(yīng)，但子實(shí)體顏色不同;除類(lèi)群Ⅴ外，白色金針菇菌株在其他4個(gè)類(lèi)群中均有分布，表明白色金針菇菌株具有豐富的遺傳多樣性。綜上所述，ISSR標(biāo)記的聚類(lèi)分析結(jié)果可較準(zhǔn)確揭示金針菇菌株的遺傳差異、親緣關(guān)系及遺傳多樣性。

3 討論

拮抗反應(yīng)是體細(xì)胞不親和性的具體表現(xiàn)，可作為鑒定菌株遺傳差異的傳統(tǒng)方法，日本的食用菌品種登記制度也將其列為一個(gè)重要指標(biāo)。王守現(xiàn)等（2009）研究表明，6株供試金針菇菌株的拮抗對(duì)峙試驗(yàn)結(jié)果與聚類(lèi)分析結(jié)果一致，說(shuō)明拮抗對(duì)峙試驗(yàn)是對(duì)菌株的初步鑒定。本研究通過(guò)拮抗對(duì)峙試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，406組中有160組不發(fā)生拮抗反應(yīng)，且大部分拮抗對(duì)峙試驗(yàn)結(jié)果與聚類(lèi)分析結(jié)果一致，如菌株F12和F16、F23和F28、F25和F26等，但少部分拮抗對(duì)峙試驗(yàn)結(jié)果與聚類(lèi)分析存在差異，如在拮抗對(duì)峙試驗(yàn)中菌株F29與F7、F12等12株菌株均不發(fā)生拮抗反應(yīng)，但在聚類(lèi)分析時(shí)其與菌株F07和F12親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，說(shuō)明拮抗對(duì)峙試驗(yàn)不能完全準(zhǔn)確鑒定金針菇菌株的遺傳差異。趙淑英和王立安（2012）研究也發(fā)現(xiàn)，金針菇拮抗對(duì)峙試驗(yàn)結(jié)果與親緣關(guān)系分析結(jié)果存在差異，推測(cè)拮抗對(duì)峙試驗(yàn)結(jié)果受菌種繼代次數(shù)和培養(yǎng)基的影響。此外，本研究發(fā)現(xiàn)在金針菇菌株間存在拮抗線(xiàn)不明顯的現(xiàn)象，因此，觀(guān)察拮抗線(xiàn)時(shí)會(huì)受主觀(guān)因素影響，說(shuō)明拮抗對(duì)峙試驗(yàn)可作為菌株鑒定的輔助方法，還需結(jié)合分子標(biāo)記等方法進(jìn)行綜合分析評(píng)價(jià)。

ISSR分子標(biāo)記可從DNA水平反映菌株間的遺傳變異，近年來(lái)被廣泛應(yīng)用于食用菌鑒定及遺傳多樣性分析（王翠，2010）。本研究利用篩選出的8條ISSR分子標(biāo)記引物從29株金針菇菌株擴(kuò)增出287個(gè)位點(diǎn)，多態(tài)性比率94%，表明金針菇菌株具有較豐富的遺傳多樣性。至今，大量科研人員對(duì)金針菇種質(zhì)資源的遺傳多樣性進(jìn)行分析，由于供試菌株、引物種類(lèi)和數(shù)量等不同，多態(tài)性水平和遺傳相似系數(shù)等也有所不同。王波和鮮靈（2013）研究發(fā)現(xiàn)，8條ISSR引物從國(guó)內(nèi)外114株菌株中擴(kuò)增獲得的條帶中多態(tài)性比率為93.97%，菌株間遺傳相似系數(shù)為0.660～0.950;譚艷（2016）研究發(fā)現(xiàn)，8條ISSR引物從29株金針菇菌株中擴(kuò)增獲得的條帶中多態(tài)性比率為79.52%，遺傳相似系數(shù)為0.670～0.890;宿紅艷等（2008）研究發(fā)現(xiàn)，8條ISSR引物從6株金針菇菌株擴(kuò)增獲得的條帶中多態(tài)性比率為81.60%，遺傳相似系數(shù)為0.600～0.900。這些研究測(cè)定的多態(tài)性比率比本研究低，說(shuō)明本研究篩選獲得的ISSR引物具有較好的多態(tài)性，但本研究供試菌株間的遺傳相似系數(shù)比上述研究高，說(shuō)明供試菌株間的親緣關(guān)系較近，究其原因可能是供試菌株為山東和江蘇地區(qū)的常用菌種，地區(qū)間的相互引種導(dǎo)致供試菌株間的遺傳差異較小。此外，檢測(cè)方法不同也會(huì)導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)差異，本研究采用熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳技術(shù)，與傳統(tǒng)的瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳相比，其在分離小片段DNA和分辨率方面更具優(yōu)勢(shì)（常玉卉等，2017）。

目前，金針菇生產(chǎn)用菌種按生產(chǎn)模式主要分為農(nóng)戶(hù)栽培品種和工廠(chǎng)化栽培品種兩類(lèi)。本研究發(fā)現(xiàn)在0.870上，類(lèi)群Ⅰ包含4株工廠(chǎng)化栽培菌株和1株農(nóng)戶(hù)栽培菌株，類(lèi)群Ⅱ均是工廠(chǎng)化栽培菌株，類(lèi)群Ⅲ和類(lèi)群Ⅴ均是農(nóng)戶(hù)栽培菌株，說(shuō)明生產(chǎn)性質(zhì)相同的菌株親緣關(guān)系較近，可能是同類(lèi)菌株起源相似且生產(chǎn)環(huán)境接近，進(jìn)化差異小。陸歡等（2014）研究表明，我國(guó)市場(chǎng)上金針菇工廠(chǎng)化菌種親緣關(guān)系較近，與本研究結(jié)果相符。本研究結(jié)果顯示，聚類(lèi)結(jié)果與菌株來(lái)源地?zé)o明顯相關(guān)性，不同地區(qū)的菌株聚為一類(lèi)，說(shuō)明供試菌株遺傳基礎(chǔ)較集中，推測(cè)是由品種選育和栽培中不同地區(qū)相互引種或親本雜交所造成。

農(nóng)藝性狀測(cè)定是金針菇種質(zhì)資源開(kāi)發(fā)利用及優(yōu)質(zhì)品種選育的基礎(chǔ)工作。本研究29株金針菇菌株農(nóng)藝性狀測(cè)定結(jié)果表明，不同品種金針菇子實(shí)體間的表觀(guān)特征存在明顯差異，其中，菌株F12、F15、F22和F24等生育期較短，菌株F02、F05和F19等產(chǎn)量較高且菌蓋較小、商品性好，可作為雜交育種的優(yōu)良親本選育早熟、高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的金針菇新品種。本研究供試菌株主要引自江蘇和山東地區(qū)，今后應(yīng)擴(kuò)大菌種采集范圍，收集具有地方特征的優(yōu)勢(shì)品種，并結(jié)合多種分子標(biāo)記技術(shù)，綜合分析金針菇的遺傳多樣性，為金針菇新品種選育和雜種優(yōu)勢(shì)的預(yù)測(cè)提供參考。

4 結(jié)論

菌株間是否發(fā)生拮抗反應(yīng)與菌株子實(shí)體顏色無(wú)關(guān)。江蘇和山東兩地區(qū)的金針菇菌株具有較豐富的遺傳差異和遺傳多樣性，但親緣關(guān)系較近。

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