莪紅片對(duì)急性血瘀證模型大鼠血液流變學(xué)及血栓形成相關(guān)指標(biāo)的影響

郝少君 謝國(guó)旗 李重先 李軍 劉曉斌 李文俊 張正臣

中圖分類號(hào) R364.1+5；R285 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）18-2488-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.18.10

摘 要 目的：觀察莪紅片對(duì)急性血瘀證模型大鼠血液流變學(xué)及血栓形成相關(guān)指標(biāo)的影響。方法：將72只雄性SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、腦心通膠囊組（0.8 g/kg）和莪紅片低、中、高劑量組（0.375、0.75、1.5 g/kg），每組12只。各給藥組大鼠均灌胃相應(yīng)藥物，空白組和模型組大鼠灌胃等容生理鹽水，每天1次，連續(xù)7 d。除空白組外，其余各組大鼠均于末次給藥1 h后皮下注射鹽酸腎上腺素（0.06 mg/kg），2 h后用冷水刺激3 min，并于2 h后再次皮下注射同等劑量的鹽酸腎上腺素以復(fù)制急性血瘀證模型。禁食、不禁水20 h后，觀察各組大鼠行為，并檢測(cè)其全血黏度（高、中、低切）和血清血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素F1a（6-k-PGF1a）含量。結(jié)果：空白組大鼠飲食正常，精神和活動(dòng)狀態(tài)良好；模型組大鼠出現(xiàn)食欲不振、精神萎靡、活動(dòng)減少等癥狀，其全血黏度（高、中、低切）和血清TXB2含量均較空白組顯著升高，6-k-PGF1a含量較空白組顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；各給藥組大鼠上述癥狀均有不同程度改善，且腦心通膠囊組和莪紅片中、高劑量組大鼠全血黏度（高、中、低切）和血清TXB2含量均較模型組顯著降低，6-k-PGF1a含量均較模型組顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：莪紅片可一定程度地降低全血黏度、改善血瘀癥狀，這種作用可能與其下調(diào)血清TXB2、上調(diào)6-k-PGF1a含量有關(guān)。

關(guān)鍵詞 莪紅片；大鼠；急性血瘀證模型；全血黏度；血栓素B2；6-酮-前列腺素F1a

ABSTRACT OBJECTIVE： To observe the effects of Ehong tablets on hemorheology and related indexes of thrombosis in acute blood stasis model rats. METHODS： Totally 72 male SD rats were randomly divided into blank group， model group， Naoxintong capsules group （0.8 g/kg） and Ehong tablets low-dose， medium-dose and high-dose groups （0.375， 0.75， 1.5 g/kg）， with 12 rats in each group. Administration groups were given relevant medicine intragastrically； blank group and model group were given constant volume of normal saline intragastrically， once a day， for consecutive 7 d. Except for blank group， other groups were given adrenaline hydrochloride （0.06 mg/kg） subcutaneously 1 h after last medication， 2 h later were irritated with cold water for 3 min， and then given same dose of adrenaline hydrochloride subcutaneously again 2 h later to induce acute blood stasis model. Twenty hours after fasting without water fasting， the behaviors of rats were observed， whole blood viscosity （high， medium and low shear） and serum contents of TXB2 and 6-k-PGF1a were detected. RESULTS： The rats in the normal group had normal diet， good mental and active state. The model group suffered from loss of appetite， depression and activity decreasing， etc.； whole blood viscosity （high， medium and low shear） and serum contents of TXB2 were increased significantly， while serum content of 6-k-PGF1a was decreased significantly， compared with blank group， with statistical significance （P<0.01）. Compared with model group， above symptoms of rats were improved to different extents in administration groups. The whole blood viscosity （high， medium and low shear） and serum contents of TXB2 were decreased significantly in Naoxintong capsules group， Ehong tablets medium-dose and high-dose groups， while serum contents of 6-k-PGF1a was increased significantly， with statistical significance （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSIONS： Ehong tablets can reduce blood viscosity and improve blood stasis symptoms to certain extent， the effects of which may be associated with down-regulating serum content of TXB2 and up-regulating serum content of 6-k-PGF1a.

KEYWORDS Ehong tablets； Rats； Acute blood stasis model； Blood viscosity； TXB2； 6-k-PGF1a

血瘀證是中醫(yī)臨床常見的一種證型，是由機(jī)體內(nèi)氣機(jī)逆亂、氣血運(yùn)行不暢所致的瘀積凝滯，或者血液離開經(jīng)脈且無法及時(shí)消散以致在體內(nèi)停留所致的多種病癥的總稱，主要表現(xiàn)為疼痛、腫塊、出血、舌紫、脈澀等[1-3]。目前，相關(guān)研究通常根據(jù)血瘀證的病因病機(jī)（如寒邪、外傷、郁怒、氣虛等）復(fù)制動(dòng)物模型，急性血瘀證模型便是其中的一種[4-5]。該模型采用的造模方法為皮下注射鹽酸腎上腺素，并同時(shí)復(fù)合4 ℃冷水浴，可很好地印證中醫(yī)關(guān)于血瘀證“寒則凝，凝則成瘀”的認(rèn)識(shí)[6]。急性血瘀證模型可使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外周血管強(qiáng)烈收縮、心肌耗氧量增加、心功能減退，從而引起血流運(yùn)行障礙；此外，該模型還能引起其血液流變學(xué)的改變，使血液呈“黏、濃、凝、聚”狀態(tài)，最終堵塞血管引發(fā)心血管疾病[7]。

莪紅片是根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)自擬的院內(nèi)制劑，由莪術(shù)、紅花組成，具活血化瘀之功效，可用于治療缺血性心腦血管疾病，且療效較好[8-10]。本課題組前期采用高效液相色譜法對(duì)莪紅片中所含的主要有效成分進(jìn)行了分析[11]。在此基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步探討了莪紅片對(duì)急性血瘀證模型大鼠血液流變學(xué)及血栓形成相關(guān)指標(biāo)的影響，以期為闡明其臨床治療血瘀證的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

N6C型全自動(dòng)血液流變儀（北京普利生儀器有限公司）；680型酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Rad公司）；H2050R型臺(tái)式高速大容量冷凍離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司）；JA1103N型電子分析天平（河南中良科學(xué)儀器有限公司）；JX5001型電子分析天平（上海浦春計(jì)量?jī)x器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

莪紅片[解放軍第371醫(yī)院制劑室，批準(zhǔn)文號(hào)：濟(jì)聯(lián)字（2001）FP10013（21）號(hào)，批號(hào)：20151022，規(guī)格：0.3 g]；腦心通膠囊（陜西步長(zhǎng)制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z20025001，批號(hào)：170566，規(guī)格：每粒裝0.4 g）；鹽酸腎上腺素注射液[遠(yuǎn)大醫(yī)藥（中國(guó)）有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H42021700，規(guī)格：1 mL ∶ 1 mg]；血栓素B2（TXB2）試劑盒、6-酮-前列腺素F1a（6-k-PGF1a）試劑盒均由蘇州卡爾文生物科技有限公司提供；其余試劑均為分析純。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠72只，體質(zhì)量180～200 g，由山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（豫）2015-0005]。

2 方法

2.1 分組、給藥與造模[12-15]

取SPF級(jí)雄性SD大鼠72只，隨機(jī)分為6組，即空白組、模型組、腦心通膠囊組（陽性對(duì)照，0.8 g/kg，根據(jù)成人臨床劑量的10倍換算而得；給藥體積為1 mL/100 g，溶劑為生理鹽水）和莪紅片低、中、高劑量組（0.375、0.75、1.5 g/kg，根據(jù)成人臨床劑量的5、10、20倍換算而得；給藥體積為1 mL/100 g，溶劑為生理鹽水），每組12只。各給藥組大鼠灌胃相應(yīng)藥物，空白組和模型組大鼠灌胃等容生理鹽水，每天1次，連續(xù)7 d。除空白組外，其余各組大鼠均于末次給藥1 h后皮下注射鹽酸腎上腺素（0.06 mg/kg），2 h后將其放入4 ℃冷水浴中刺激3 min，撈出，擦干，2 h后再次皮下注射同等劑量的鹽酸腎上腺素以復(fù)制急性血瘀證模型。

2.2 指標(biāo)檢測(cè)

造模后，所有大鼠均禁食、不禁水20 h，觀察其行為。以10%水合氯醛（0.35 mL/100 g）進(jìn)行麻醉后，于大鼠腹主動(dòng)脈取血兩管。一管采用全自動(dòng)血液流變儀檢測(cè)血液流變學(xué)指標(biāo)[全血黏度（高、中、低切）]；另一管經(jīng)3 000 r/min離心10 min后，取上層血清，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法以酶標(biāo)儀檢測(cè)血栓形成相關(guān)指標(biāo)（TXB2、6-k-PGF1a）的含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以x±s表示；采用單因素方差分析檢查其方差齊性，方差齊者組間比較采用最小顯著差數(shù)（LSD）法，方差不齊者則采用Games-Howell檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 莪紅片對(duì)急性血瘀證模型大鼠行為的影響

空白組大鼠飲食正常，精神與活動(dòng)狀態(tài)良好；模型組大鼠食欲不振，精神萎靡，活動(dòng)減少，皮毛無光澤，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍，且體質(zhì)量降低；各給藥組大鼠上述癥狀均有不同程度的改善，其中以莪紅片高劑量組大鼠的狀態(tài)較好。

3.2 莪紅片對(duì)急性血瘀證模型大鼠全血黏度的影響

與空白組比較，模型組大鼠全血黏度（高、中、低切）均顯著升高（P<0.01），提示模型復(fù)制成功。與模型組比較，腦心通膠囊組和莪紅片中、高劑量組大鼠全血黏度（高、中、低切）均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）；而莪紅片低劑量組大鼠全血黏度（高、中、低切）與模型組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），詳見表1。

3.3 莪紅片對(duì)急性血瘀證模型大鼠血清TXB2和6-k- PGF1a含量的影響

與空白組比較，模型組大鼠血清TXB2含量顯著升高，6-k-PGF1a含量顯著降低（P<0.01），提示模型復(fù)制成功。與模型組比較，腦心通膠囊組和莪紅片中、高劑量組大鼠血清TXB2含量均顯著降低，6-k-PGF1a含量均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）；而莪紅片低劑量組大鼠血清TXB2、6-k-PGF1a含量與模型組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），詳見表2。

4 討論

腦心通膠囊由丹參、當(dāng)歸、川芎、紅花、水蛭等多種中藥組成，具有益氣活血、化瘀通絡(luò)之功效，可用于治療氣虛血滯、脈絡(luò)瘀阻所致的中風(fēng)、腦梗死等癥[16]。臨床研究表明，該藥可顯著降低血瘀證患者的全血黏度（高、中、低切）、血漿黏度和血小板黏附率，可抑制腺苷二磷酸（ADP）誘導(dǎo)的血小板聚集，顯著抑制血栓的形成；同時(shí)，其還可顯著增加腦血流量，降低腦血管阻力，延長(zhǎng)凝血時(shí)間，增加心肌供血，有效改善患者的心功能[17]。因此，本研究選擇腦心通膠囊作為陽性對(duì)照藥物。

有研究認(rèn)為，血瘀證主要表現(xiàn)為血液流變學(xué)異常及體內(nèi)微循環(huán)障礙，是一種因血液流動(dòng)性和黏性異常而引發(fā)的血流紊亂癥[18-19]。相關(guān)研究表明，血瘀證伴有全血黏度升高及血小板聚集性增強(qiáng)等現(xiàn)象[20]。全血黏度不僅能反映血液的黏滯程度，還能反映血液流變學(xué)的基本特征[19]。因此，全血黏度是診斷血瘀證的重要指標(biāo)之一。正常情況下，人體體內(nèi)凝血系統(tǒng)、抗凝血系統(tǒng)以及纖溶系統(tǒng)處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，相互制約；發(fā)生血瘀后，血液運(yùn)行受阻，血流不暢，血液凝滯，內(nèi)外源凝血途徑均被激活，血小板黏附聚集，血栓形成[21]。TXB2由血小板產(chǎn)生并釋放，能夠收縮血管、促進(jìn)血小板聚集；6-k-PGF1a是TXB2的抑制物，能夠舒張血管、抑制血小板聚集，兩者對(duì)血栓的形成具有重要的作用[21]。

莪術(shù)是較為常用的破血行氣中藥，對(duì)血瘀證具有很好的治療效果；紅花為活血之王，性辛、溫，歸心、肝經(jīng)，具有活血祛瘀的功效[22]?！侗静輩R言》中記載，“紅花，破血、行血、和血、調(diào)血之藥也”?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，紅花黃色素能夠降低血漿黏度，抑制血小板聚集，阻礙血栓形成。本課題組根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)以莪術(shù)、紅花配伍（莪術(shù)為主，紅花為佐）制成莪紅片，并在有效成分分析的基礎(chǔ)上，初步探討了其對(duì)急性血瘀證模型大鼠血液流變學(xué)及血栓形成相關(guān)指標(biāo)的影響，結(jié)果顯示，模型組大鼠出現(xiàn)食欲不振、精神萎靡、活動(dòng)減少等癥狀；與空白組比較，模型組大鼠全血黏度和血清TXB2含量均顯著升高，6-k-PGF1a含量顯著降低，提示造模成功；與模型組比較，各給藥組大鼠上述癥狀均有不同程度的改善，且腦心通膠囊組和莪紅片中、高劑量組大鼠全血黏度和血清TXB2含量均顯著下降，6-k-PGF1a含量均顯著升高。這提示，莪紅片可以降低急性血瘀證模型大鼠的全血黏度和血清TXB2含量，升高血清6-k-PGF1a含量，從而有效改善了大鼠血瘀癥狀。

綜上所述，莪紅片可一定程度地降低全血黏度、改善血瘀癥狀，這種作用可能與其下調(diào)血清TXB2、上調(diào)6-k-PGF1a含量有關(guān)。但本研究未對(duì)血小板聚集的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，且尚未評(píng)估莪紅片對(duì)血瘀證模型大鼠血小板功能的影響，故仍有待后續(xù)研究深入探討。

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（收稿日期：2018-03-02 修回日期：2018-07-11）

（編輯：張?jiān)拢?/p>