電針對具有胃動力障礙的抑郁模型大鼠行為學(xué)及胃排空的影響

何偉軍　張健　鐘麗霞　張泓

〔摘要〕 目的 觀察電針對具有胃動力障礙的抑郁模型大鼠行為學(xué)及胃排空的影響。方法 SD大鼠60只，隨機(jī)選取16只為對照組，余44只采用慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）配合孤養(yǎng)的方法制備抑郁模型，用曠場實(shí)驗(yàn)確定抑郁模型復(fù)制是否成功、胃電圖確定抑郁模型大鼠是否具有胃動力障礙（造模組剔除12只），再從對照組和造模組各隨機(jī)選取8只進(jìn)行胃排空檢測，驗(yàn)證抑郁模型具有胃動力障礙，造模組剩余的24只大鼠隨機(jī)分為模型組、針刺組、百憂解組，每組8只。對照組、模型組束縛處理，生理鹽水灌胃；針刺組束縛處理，生理鹽水灌胃，針刺足三里、太沖、肝俞、胃俞、中脘穴，中脘穴只針刺、不接電，余穴接電針；百憂解組束縛處理，百憂解灌胃。干預(yù)結(jié)束后，處死所有大鼠檢測各組大鼠胃排空率；取血清檢測血漿P物質(zhì)（substance P，SP）和降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）；取腦組織檢測多巴胺（dopamine，DA）。結(jié)果 （1）電針能增加模型大鼠曠場實(shí)驗(yàn)水平方向總位移和垂直運(yùn)動次數(shù)（P<0.01），同時(shí)增加胃排空率（P<0.05）；（2）電針能促進(jìn)模型大鼠腦組織DA表達(dá)（P<0.05）和血清SP表達(dá)（P<0.01），抑制血清CGRP表達(dá)（P<0.01）。結(jié)論 電針可同時(shí)改善抑郁模型大鼠抑郁和胃動力障礙癥狀，其作用機(jī)制可能是通過促進(jìn)DA和SP表達(dá)、抑制CGRP表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。

〔關(guān)鍵詞〕 抑郁癥；胃動力障礙；電針；多巴胺；P物質(zhì)；降鈣素基因相關(guān)肽

〔中圖分類號〕R245.3；R749.4 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2018.06.019

〔Abstract〕 Objective To observe the influence of electroacupuncture on behavior and gastric emptying in depression model rats with gastric motility disorder. Methods The 16 rats selected from 60 SD rats were assigned into the control group， The depression models of remaining 44 rats were prepared under the conditions of chronic unforeseeable mild stress （CUMS） and separation. The rat model of depression was determined by open field test. The gastric motility disorders of depression model rats were detected by electrogastrogram （12 rats were removed from the rat model）. Then 8 rats were selected from each the control group and the model group， and the gastric emptying was detected. The remaining 24 models were randomly divided into acupuncture group， fluoxetine group and model group， 8 rats in each group. The control group and model group were given bound-bound treatment and gavaged with normal saline. The acupuncture group were acupunctureed at Zusanli （ST36）， Taichong （LR3）， Ganshu （BL18）， Weishu （BL21）， Zhongwan （RN12） acupoints. Zhongwan acupoint was given needling and with no electricity， and other acupoints were received electroacupuncture. Fluoxetine group was administrated with fluoxetine. After the intervention， all rats were killed to detect the gastric emptying rate， substance P（SP） and calcitonin gene related peptide （CGRP） in serum were detected， and dopamine （DA） was detected in the brain tissue. Results （1） electroacupuncture could increase the level of total displacement and vertical movement（P<0.01）， and increase the rate of gastric emptying（P<0.05）. （2） Electroacupuncture could promote the expression of DA （P<0.05） and the expression of SP （P<0.01） in the brain tissue of rats and inhibit the expression of CGRP in serum （P<0.01）. Conclusion Electroacupuncture can improve the symptoms of depression and gastric motility in rats with depression. Its mechanism may be promoting the expression of DA and SP， and inhibiting the expression of CGRP.

〔Keywords〕 depression； gastric motility disorder； electroacupuncture； dopamine； SP； calcitonin gene related peptide

抑郁癥是以持續(xù)性的情緒低落、抑郁悲觀為特點(diǎn)，常伴有胃動力障礙等表現(xiàn)的疾病[1]，具有發(fā)病率高、死亡率高、致殘率高的特點(diǎn)[2]。流行病學(xué)研究顯示[3]，中國抑郁癥患病率約為6.1%，全國有近9000萬抑郁癥患者。因此，抑郁癥的防治工作已成為臨床及科研的重點(diǎn)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療抑郁癥以藥物治療為主[4]，選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑類藥物是臨床常用的抗抑郁藥[5]，但由于其治療時(shí)間長、維持療效時(shí)間短[6]及嚴(yán)重的副作用[7-9]，使相當(dāng)一部分抑郁癥患者接受不了[10-12]。臨床常用的抗抑郁藥大部分只作用于腦，只能改善抑郁癥患者的抑郁癥狀，對胃動力障礙癥狀無效，而臨床常用的改善胃動力障礙的藥只作用于胃，對抑郁癥狀無效。此外，大部分抗抑郁藥在改善抑郁癥患者抑郁癥狀的同時(shí)，往往又抑制了胃腸動力；有些改善胃動力的藥又會加重抑郁癥狀，因此，找到一種能同時(shí)改善其抑郁癥狀和胃動力障礙的治療方法，已成為抑郁癥治療的關(guān)鍵。針灸治療具有多系統(tǒng)、多層次、多水平、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)。臨床研究[13-14]證實(shí)針刺治療抑郁癥療效確切，能有效改善其抑郁癥狀和其他伴隨癥狀。但對針刺改善其抑郁和胃動力障礙作用機(jī)制的研究較少，因此，通過電針具有胃動力障礙的抑郁模型大鼠，觀察其行為學(xué)（曠場實(shí)驗(yàn)）、胃排空、腦組織海馬部多巴胺（dopamine，DA）、血清中血漿P物質(zhì)（substance P，SP）和降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）的變化，探討電針對抑郁模型大鼠干預(yù)的部分機(jī)制，為臨床治療本病提供一定實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

健康SD大鼠60只，SPF級，雌雄各半，體質(zhì)量155～185 g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司供應(yīng)，合格證號：43004700019308。實(shí)驗(yàn)中對動物的處置符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)的主要儀器

TGL-16臺式冷凍離心機(jī)（湘儀公司）；MB-530酶標(biāo)儀（匯松公司）；-80 ℃低溫冰箱（中科美菱公司）；BA210T型顯微鏡（日本Motic公司）；SDZ-V型電子針療儀（蘇州醫(yī)療用品廠公司）；MP150型多導(dǎo)生理記錄儀（英國BIOPAC）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 分組 60只大鼠常規(guī)飼養(yǎng)7 d后編號，隨機(jī)選取16只為對照組，余44只采用慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）配合孤養(yǎng)的方法制備抑郁模型，造模結(jié)束后，所有大鼠行胃電圖檢測確定造模組是否具有胃動力障礙（造模組剔除12只），再從對照組和造模組各選取8只行胃排空檢測，造模組剩余24只隨機(jī)分為3組（n=8）：針刺組、百憂解組、模型組。

1.3.2 模型制備 參照文獻(xiàn)[15]采用CUMS配合孤養(yǎng)的方法制備抑郁模型。方法：禁食24 h、禁水24 h、明暗顛倒24 h、濕籠飼養(yǎng)24 h、夾尾3 min、劇烈搖晃30 min、強(qiáng)迫游泳5 min，每天隨機(jī)選取1種，相鄰2 d不使用同種方案，造模時(shí)間4周。

1.3.3 成模標(biāo)準(zhǔn) 本實(shí)驗(yàn)是探討針刺對抑郁模型大鼠抑郁和胃動力障礙進(jìn)行干預(yù)的機(jī)制研究，因此，本研究的抑郁模型應(yīng)同時(shí)具有胃動力障礙。依據(jù)文獻(xiàn)[16]，用曠場實(shí)驗(yàn)確定抑郁模型復(fù)制是否成功；由于胃電圖是評價(jià)胃動力的一個(gè)客觀指標(biāo)，其中慢波波幅和正常慢波、胃動過緩、胃動過速和無胃電節(jié)律百分比能比較客觀地反映出胃的功能狀況[17]，正常慢波百分比正常值為65%[18]，當(dāng)正常慢波百分比低于65%為胃電節(jié)律紊亂，判斷為胃動力障礙[19]。因此，選用胃電圖的慢波波幅和各種慢波百分比來確定抑郁模型大鼠是否具有胃動力障礙，將造模組大鼠中符合胃電圖波幅低于對照組且正常慢波百分比低于65%的大鼠作為具有胃動力障礙的抑郁模型。

1.3.4 干預(yù)方法 （1）穴位定?。焊鶕?jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》大鼠標(biāo)準(zhǔn)穴位圖譜取穴。足三里：膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，腓骨小頭下5 mm；太沖：足背側(cè)，當(dāng)?shù)?跖骨間隙后方凹陷處；肝俞：第9胸椎棘突下旁開7 mm；胃俞：第13胸椎棘突下旁開7 mm；中脘：劍突和恥骨聯(lián)合上緣中點(diǎn)連線上2/3與下1/3交點(diǎn)為“神闕”穴，當(dāng)劍突與“神闕”中點(diǎn)處；（2）電針設(shè)置：華佗牌SDZ-V型電針治療儀，選用疏密波（10/50 Hz），強(qiáng)度以大鼠下肢或局部出現(xiàn)輕微震顫為度；（3）分組處理：對照組、模型組束縛處理，以5 mL/kg體質(zhì)量灌服生理鹽水；針刺組束縛處理，以5 mL/kg體質(zhì)量灌服生理鹽水，針刺足三里、太沖、肝俞、胃俞、中脘穴，中脘穴只針刺、不接電，余穴接電針，足三里、太沖為一組，肝俞、胃俞為一組，足三里、胃俞接正極，太沖、肝俞接負(fù)極，每天1次，每次30 min；百憂解組束縛處理，以5 mL/kg體質(zhì)量灌服百憂解（百憂解配制濃度為0.36 mg/mL懸濁液），1 d/次，連續(xù)給藥14 d。

1.4 曠場實(shí)驗(yàn)

制作100 cm×100 cm×45 cm且四周和底面為黑色的箱子，箱底由25塊20 cm×20 cm的正方形組成，以白線劃分，攝像機(jī)記錄測試過程。大鼠放入箱底正中央后開始，每次5 min，記錄大鼠水平運(yùn)動情況（記錄大鼠穿越底面積方塊數(shù)，再計(jì)算運(yùn)動距離）和垂直運(yùn)動次數(shù)（攀爬箱壁或兩前爪騰空為1次），每只測試1次，測試完畢，清理糞便后用5%的醋酸水溶液擦拭干凈繼續(xù)。在造模前、造模第1、2、3、4周和干預(yù)的第1、2周進(jìn)行測試。

1.5 胃電圖檢測

檢測前12 h禁食、6 h禁水，腹腔注射10%烏拉坦，起效后仰臥位固定于鼠板上，祛除局部毛發(fā)后75%酒精消毒，參照文獻(xiàn)[17]刺入電極針，穩(wěn)定后記錄30 min，將造模組大鼠中符合胃電圖波幅低于對照組且正常慢波百分比低于65%的大鼠作為具有胃動力障礙的抑郁模型。

1.6 胃排空率測定

以10 mL/kg的標(biāo)準(zhǔn)灌服營養(yǎng)性半固體糊，30 min后用10%水合氯醛行腹腔麻醉，開腹后分離出胃，拭干，稱全質(zhì)量（M1），再用生理鹽水洗凈胃內(nèi)容物，拭干，稱胃凈質(zhì)量（M2），計(jì)算胃殘留率。胃殘留率（%）=（M1-M2）/灌胃量×100%，胃排空率（%）=1-胃殘留率（%）。

1.7 其他指標(biāo)檢測

干預(yù)結(jié)束后，大鼠禁食12 h，經(jīng)腹主動脈采血，靜置4 h，4 000 r/min離心5 min，分離血清，取上清液4 ℃冰箱冷藏，用Elisa法檢測血清中SP及CGRP；切下大鼠頭顱，冰上開顱剝?nèi)〈竽X海馬組織，放于EP管中-80 ℃冰箱凍存，用免疫組化法檢測DA。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 22.0分析，數(shù)據(jù)用“x±s”表示。所有資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，均符合正態(tài)性分析，多組計(jì)量資料采用單因素方差分析（One-way ANOVA），等級資料采用秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 動物數(shù)量分析

實(shí)驗(yàn)中百憂解組、針刺組各死亡1只（操作原因），最后納入分析的數(shù)量為：對照組、模型組各8只，百憂解組、針刺組各7只。

2.2 曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果

造模前各組無明顯差異，造模后模型組、百憂解組、針刺組水平方向總位移明顯低于對照組（P<0.01），水平運(yùn)動減少，反映動物活動度降低；垂直運(yùn)動減少，反映動物好奇程度降低，說明抑郁模型復(fù)制成功。干預(yù)后，針刺組、百憂解組水平方向總位移明顯增加，顯著高于模型組（P<0.01），說明針刺和百憂解能有效改善其抑郁癥狀。見表1-2。

2.3 胃排空率測定和海馬部DA平均光密度值結(jié)果

胃排空率測定結(jié)果：造模后，模型組明顯低于對照組（P<0.05），說明抑郁模型具有胃動力障礙；干預(yù)后，針刺組較模型組明顯增加（P<0.05），說明電針能改善其胃動力障礙，百憂解組較模型組偏低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明百憂解對胃動力障礙無改善作用。見表3。

海馬部DA平均光密度值結(jié)果：模型組較對照組降低（P<0.05）；針刺組、百憂解組較模型組增高（P<0.05）。見表3。

2.4 血清SP和CGRP檢測結(jié)果

與對照組比較，模型組、百憂解組、針刺組SP表達(dá)減少（P<0.01），CGRP表達(dá)增加（P<0.01）；與模型組比較，針刺組SP表達(dá)增加（P<0.01），CGRP表達(dá)減少（P<0.01），百憂解組SP表達(dá)減少（P<0.01），CGRP表達(dá)增加（P<0.01）。見表4。

3 討論

中醫(yī)學(xué)中沒有“抑郁癥”病名，但有類似疾病的記載，如描述百合病之“意欲食復(fù)不能食，常嘿嘿”與抑郁癥表現(xiàn)有相似之處；百合病之“平素多思不斷，情志不遂”與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為抑郁癥與負(fù)性情緒相關(guān)不謀而合[20]。太沖穴為肝經(jīng)輸穴，《靈樞》有云：“所注為輸”，針刺有調(diào)整氣血、疏肝解郁的作用；足三里為胃經(jīng)合穴、下合穴，“肚腹三里留”，針之具有健脾和胃、通腑降氣之功；中脘穴為胃之募穴，腑會，針刺之可治一切腑病；胃俞穴為胃之背俞穴，針之有和胃健脾、理中降逆的作用。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為抑郁癥的發(fā)生和發(fā)展與生物-社會-心理等多因素、多機(jī)制作用有關(guān)[21]。DA作為一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，在細(xì)胞膜內(nèi)外遷移發(fā)揮其功能。張加強(qiáng)等[22]研究發(fā)現(xiàn)：抑郁患者腦內(nèi)DA低于對照組。牛威等[23]研究證實(shí)抑郁患者血清DA低于對照組，進(jìn)一步說明DA減少可能是出現(xiàn)抑郁癥狀的機(jī)制；干預(yù)后，針刺組、百憂解組抑郁癥狀得到明顯改善，DA表達(dá)顯著增加，說明針刺和百憂解可能是通過促進(jìn)DA表達(dá)來改善其抑郁癥狀的。P物質(zhì)是世界上發(fā)現(xiàn)最早的多肽，有促進(jìn)腸道平滑肌收縮和胃收縮的作用[24]，分布于腸道的 SP與胃腸功能障礙的發(fā)生關(guān)系密切[25]。李蕙等[26]研究發(fā)現(xiàn)促胃腸動力藥可增加SP在大鼠胃竇壁和十二指腸壁的表達(dá)。梁慧敏等[27]研究發(fā)現(xiàn)功能性消化不良（functional dyspepsia，F(xiàn)D）患者血漿SP低于正常組。CGRP是人類利用基因重組技術(shù)發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)活性多肽，與胃腸動力障礙疾病密切相關(guān)，可抑制胃酸分泌和胃腸運(yùn)動。李啟祥等[28]研究發(fā)現(xiàn)FD患者胃黏膜CGRP表達(dá)是增加的。沈天華等[29]發(fā)現(xiàn)FD模型大鼠胃竇組織CGRP表達(dá)較正常組增加，進(jìn)一步說明SP表達(dá)減少、CGRP表達(dá)增加可能是出現(xiàn)胃動力障礙的機(jī)制，針刺干預(yù)后SP表達(dá)明顯增加、CGRP表達(dá)明顯減少，說明針刺可能是通過調(diào)節(jié)SP、CGRP表達(dá)來改善其胃動力障礙的。

本研究結(jié)果中，電針能增加模型大鼠曠場實(shí)驗(yàn)水平方向總位移和垂直運(yùn)動次數(shù)（P<0.01），同時(shí)增加胃排空率（P<0.05）；電針能促進(jìn)模型大鼠腦組織DA表達(dá)（P<0.05）和血清SP表達(dá)（P<0.01），抑制血清CGRP表達(dá)（P<0.01）。此結(jié)果證實(shí)電針可同時(shí)改善抑郁模型大鼠的抑郁和胃動力障礙癥狀，特別是改善胃動力障礙方面較百憂解有明顯優(yōu)勢，其作用機(jī)制可能是通過促進(jìn)DA和SP表達(dá)、抑制CGRP表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。

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（本文編輯 匡靜之）