甜瓜枯萎病拮抗菌的篩選及鑒定

余小蘭　鄒立飛　鄒雨坤　李光義　李曉亮　李勤奮

摘要：【目的】篩選對甜瓜枯萎病菌有較強拮抗活性的菌株，并對拮抗菌株進行分類鑒定，為豐富熱帶地區(qū)甜瓜枯萎病生防菌資源庫及田間應(yīng)用提供參考?！痉椒ā恳郧捌诤Y選獲得的82株菌株為試驗材料，通過平板對峙、繼代培養(yǎng)、發(fā)芽率及盆栽試驗篩選出對甜瓜枯萎病菌有較強拮抗活性的菌株，并通過形態(tài)特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析對篩選獲得的菌株進行分類鑒定。【結(jié)果】篩選出一株對甜瓜枯萎病菌有較強拮抗活性的放線菌菌株D2，其對枯萎病的防治效果達73.53%。D2菌株可形成氣生菌絲和孢子絲，孢子絲呈螺旋形，孢子卵呈圓形，且與利迪鏈霉菌（Streptomyces lydicus）聚于同一分支中，其同源性達99.6%；綜合D2菌株的形態(tài)特征及生理生化特性，可鑒定其為利迪鏈霉菌（S. lydicus）?！窘Y(jié)論】D2菌株對甜瓜枯萎病有較好的防治效果，具有開發(fā)成生物農(nóng)藥或生物肥料的潛力。

關(guān)鍵詞： 甜瓜枯萎??；拮抗菌；篩選；鑒定；熱帶地區(qū)

中圖分類號： S182 文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：2095-1191（2018）06-1118-07

Abstract：【Objective】Antagonistic bacteria with strong antagonistic effect to fusarium wilt of melon was screened and identified to provide reference for enriching the resources of biocontrol bacteria against melon fusarium wilt in tropical zone. 【Method】Eighty-two strains obtained in preliminary screening were used as experimental material， and antagonistic bacteria against melon fusarium wilt were screened by using plate confront culture， successive transfer culture， germination experiment and pot experiment.The strains were classified through characteristics in morphology， physiology and biochemistry and information of 16S rDNA. 【Result】A strain of actinomycetes D2 with strong antagonistic effect to melon fusarium wilt was screened and it had 73.53% control efficiency to fusarium wit of muskmelon. Strain D2 would form aerial hyphae and fibrillae of spores， and fibrillae of spores were spiral， and spore eggs were round. Strain D2 and Streptomyces lydicus were clustered in the same branch with 99.6% homology. Taking the morphological characters and physiological and biochemical characters of strain D2 into consideration， strain D2 was finally identified as S. lydicus. 【Conclusion】Strain D2 has strong antagonistic effect to fusarium wilt of melon and worth to be developed as biological pesticides and fertilizers.

Key words： melon fusarium wilt； antagonistic bacteria； screening； identification； tropical zone

0 引言

【研究意義】甜瓜是我國廣泛栽種的經(jīng)濟作物之一（張永平等，2017），據(jù)中國農(nóng)業(yè)統(tǒng)計年鑒數(shù)據(jù)顯示，2016年我國甜瓜種植面積超過48萬ha，產(chǎn)量達1570萬t；海南省2016年甜瓜種植面積為2823 ha，產(chǎn)量5.69萬t。在甜瓜種植面積、產(chǎn)量和效益穩(wěn)步上升的同時，甜瓜土傳病害尤其是枯萎病日益嚴(yán)重，極大地限制了甜瓜產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。目前，防治甜瓜枯萎病的主要途徑有化學(xué)藥劑防治（周小林等，2007；楊長成等，2010；張靜和胡立勇，2012；?zbah?e et al.，2014）、種植抗病品種（王雙伍等，2010）、農(nóng)業(yè)措施（李瑞琴，2004；Egamberdiyeva et al.，2004；尹守恒等，2012）及生物防治（李旭等，2014；Madadkhah et al.，2014）等?；瘜W(xué)藥劑對枯萎病有一定防效，但易使枯萎病病原菌產(chǎn)生抗藥性，造成甜瓜果實安全隱患。生物防治因生態(tài)環(huán)保且經(jīng)濟投入較少而受到人們的廣泛關(guān)注（Cao et al.，2016）。因此，挖掘甜瓜枯萎病的生防菌資源，對甜瓜產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義?！厩叭搜芯窟M展】近年來，國內(nèi)外學(xué)者對甜瓜枯萎病的生物防治進行了研究，已報道的能有效抑制鐮刀菌而防治枯萎病的生防菌株有枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）（黃建鳳等，2016；李歡等，2017）、熒光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens）（孫廣正等，2015）、哈茨木霉（Trichoderma harzianum）（Ainhoa et al.，2009；Gava and Pinto，2016）、草酸青霉（Penicillium oxalicum）（Cal et al.，2009；白飛榮等，2014）、多粘類芽孢桿菌（GenBank accession number GQ849013）（趙青云，2011）、放線菌S14（鄒立飛，2013；姚輝，2014）等。黃艷青等（2009）研究發(fā)現(xiàn)，接種木霉菌（Trichoderma spp.）制劑T23和Ta22可顯著抑制甜瓜枯萎病的發(fā)生，且相對防效可達79%。牛夢天（2016）從土壤、微生物菌劑及生物肥料中篩選出對黃瓜枯萎病有較高抑制效果的多粘芽孢桿菌D1和解淀粉芽孢桿菌D3，其抑菌圈直徑均大于3 cm。李晨楚等（2017）篩選出一株枯草芽孢桿菌B43，該拮抗菌對香蕉枯萎病有較好的防治效果?！颈狙芯壳腥朦c】目前，針對我國熱帶地區(qū)甜瓜枯萎病生物防治的研究較少，有效的生防菌資源非常有限，且已報道的枯萎病生防菌多為細(xì)菌和真菌，因而有必要分離篩選更多不同類型的微生物功能菌?！緮M解決的關(guān)鍵問題】對本課題組前期篩選獲得的可對甜瓜枯萎病菌產(chǎn)生抑菌帶的82株菌株進行平板對峙、繼代培養(yǎng)、發(fā)芽率及盆栽試驗，并通過形態(tài)學(xué)、生理生化特性、16S rDNA序列分析及構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹進行鑒定，以期為熱帶地區(qū)甜瓜枯萎病生防制劑研發(fā)提供菌種資源，為有效控制甜瓜枯萎病提供參考。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

供試枯萎病菌：由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院生態(tài)農(nóng)業(yè)研究中心保存。供試拮抗菌：從海南省11個縣（市、地區(qū)）露地栽培的厚皮甜瓜根際土壤中分離獲得，共82株菌株，保存于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院生態(tài)農(nóng)業(yè)研究中心。甜瓜品種：南海蜜。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 拮抗菌篩選

1. 2. 1. 1 平板對峙試驗 以甜瓜枯萎病菌為指示菌，對供試82株菌株進行平板對峙試驗，計算拮抗菌的拮抗指數(shù)。拮抗指數(shù)=（抑菌圈半徑-拮抗菌半徑）/拮抗菌半徑

1. 2. 1. 2 繼代培養(yǎng)試驗 以拮抗指數(shù)變化為依據(jù)，對平板對峙試驗篩選獲得的拮抗菌進行室內(nèi)繼代培養(yǎng)，從而篩選出對甜瓜枯萎病菌拮抗作用能穩(wěn)定遺傳的菌株。

1. 2. 1. 3 種子發(fā)芽率試驗 將繼代培養(yǎng)試驗篩選獲得的拮抗菌株制成菌懸液進行甜瓜種子發(fā)芽率試驗，以未添加拮抗菌的培養(yǎng)基為對照，每處理50粒種子，重復(fù)3次。種子處理方法：將飽滿且大小一致的甜瓜種子放入10% H2O2溶液中消毒5 min，用蒸餾水清洗2～3次后放入菌懸液中浸泡2 h，取出種子均勻置于鋪有濕潤無菌濾紙的滅菌培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿放入恒溫培養(yǎng)箱中，30 ℃培養(yǎng)36 h后統(tǒng)計種子發(fā)芽數(shù)，計算種子發(fā)芽率。

1. 2. 1. 4 盆栽防效試驗 選擇拮抗效果較好的菌株（D1、D2和H3）作為拮抗菌，以甜瓜枯萎病菌為試驗病原菌，進行甜瓜枯萎病防治效果盆栽試驗。試驗設(shè)19個處理，每處理9盆，每盆種植甜瓜1株，接菌量均為10 mL/株，3次重復(fù)，具體試驗設(shè)計見表1。甜瓜枯萎病分級標(biāo)準(zhǔn)參照相關(guān)文獻（李瑞琴，2004）。

1. 2. 2 拮抗菌鑒定及系統(tǒng)發(fā)育進化分析 拮抗菌的形態(tài)觀察及生理生化測定方法參照《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》（Buchanan and Gibbons，1995）。拮抗菌的16S rDNA測序及系統(tǒng)發(fā)育進化分析：菌株16S rDNA引物設(shè)計、PCR擴增參照Sambrook和Russell（2002）、鄒立飛（2013）的方法。PCR反應(yīng)體系50.0 ?L：濃縮反應(yīng)緩沖液5.0 ?L，dNTP混合物（0.2 mol/L）1.0 ?L，Tap DNA聚合酶0.5 ?L，氯化鎂（1.5 mol/L）5.0 ?L，上、下游引物（1 ?mol/L）各1.0 ?L，DNA模板1.0 ?L，無菌水35.5 ?L。測序分析：將測得的16S rDNA序列在NCBI數(shù)據(jù)庫（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）中進行相似性檢索，在MEGA7.0中采用ClustalW將拮抗菌及其同源序列對齊，進而構(gòu)建Neighbor-Joining進化樹，分析拮抗菌與其他已報道菌株間的系統(tǒng)發(fā)育進化關(guān)系。

2 結(jié)果與分析

2. 1 拮抗菌篩選結(jié)果

2. 1. 1 平板對峙試驗結(jié)果 由表2可知，在初篩得到的82株菌株中，拮抗指數(shù)>2.00的菌株有9株，其拮抗指數(shù)排序為D2>D3>H5=H3>D1>H6>H20>H7>H2。

2. 1. 2 繼代培養(yǎng)試驗結(jié)果 對2.1.1中篩選獲得的9株菌株D2、D3、H5、H3、D1、H6、H20、H7和H2進行繼代培養(yǎng)，各菌株子代拮抗病原菌能力如圖1所示。由圖1可知，各菌株隨著繼代數(shù)的增加，其拮抗能力逐漸下降，當(dāng)經(jīng)歷到20代時，只有D1、D2、H3、H5和H6菌株對病原菌仍有一定的拮抗作用，故可判定D1、D2、H3、H5和H6菌株對甜瓜枯萎病菌的拮抗性遺傳較穩(wěn)定，有利于拮抗菌在生產(chǎn)實踐應(yīng)用中持續(xù)發(fā)揮拮抗作用。

2. 1. 3 種子發(fā)芽率試驗結(jié)果 經(jīng)菌株D1、D2、H3、H5和H6處理后的甜瓜種子發(fā)芽率結(jié)果如圖2所示。由圖2可知，經(jīng)菌株D1、D2和H3處理后的甜瓜種子發(fā)芽率分別為86.7%、93.3%和94.4%，與CK的種子發(fā)芽率（90.0%）差異不顯著（P>0.05），故可判定D1、D2和H3菌株不影響甜瓜種子發(fā)芽。因此，選擇D1、D2和H3菌株為盆栽防效試驗菌，研究其對甜瓜枯萎病的防治效果。

2. 1. 4 盆栽防效試驗結(jié)果 試驗結(jié)果（表3）表明，經(jīng)D2菌株處理的甜瓜發(fā)病情況均輕于D1和H3菌株處理，其中D2-6處理的甜瓜發(fā)病最輕，其對枯萎病的防效達73.53%，故相對于D1和H3菌株，D2菌株拮抗甜瓜枯萎病效果最好。試驗還發(fā)現(xiàn)，先接種拮抗菌后接種病原菌的處理D1-4、D1-5、D1-6、D2-4、D2-5、D2-6、H3-4、H3-5和H3-6，其病情指數(shù)均低于先接種病原菌后接種拮抗菌的處理，說明在前期使用拮抗菌預(yù)防甜瓜枯萎病的效果更佳。

2. 2 拮抗菌鑒定結(jié)果

同步平板對峙試驗、繼代培養(yǎng)、發(fā)芽率試驗及盆栽試驗均顯示D2菌株對甜瓜枯萎病菌的防治效果最佳，故對D2菌株進行分析鑒定。由圖3可知，D2菌株可形成氣生菌絲和孢子絲，孢子絲呈螺旋形，孢子卵呈圓形。從圖4可看出，D2菌株與Streptomyces lydicus NBRC 13058T（AB184281）和S.chattanoogensis DSM 40002T（AJ621611）的親緣關(guān)系最近，且在NBCI的比對中其同源性分別達99.6%和99.5%。由D2菌株的形態(tài)特征（表4）及生理生化特性（表5）比對可知，D2菌株與S. lydicus NBRC 13058T（AB184281）、S. chattanoogensis DSM 40002T（AJ621611）、S. sioyaensis NRRL B-5408T（DQ026654）、S. albofaciens JCM 4342T（AB045880）和S.chrestomyceticus DSM 40545T（AJ621609）等菌株親緣關(guān)系較近。綜上所述，鑒定D2菌株為利迪鏈霉菌（S. lydicus）。

3 討論

放線菌分布廣泛，自1877年發(fā)現(xiàn)以來，其產(chǎn)生的活性物質(zhì)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品及環(huán)境保護等領(lǐng)域，為人類做出了巨大貢獻（黃亞麗等，2005）。目前，放線菌的分類需綜合化學(xué)分類和分子分類等多種分類方法方能確定其精確位置（Hffrench et al.，2007；張茹萍，2011；陸丹丹，2016；田慧，2017）。本研究首先采用經(jīng)典分類方法（形態(tài)及生理生化特征）鑒定D2菌株，發(fā)現(xiàn)該菌株具有典型的鏈霉菌屬形態(tài)特征；隨后通過16S rDNA測序及構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進化樹，發(fā)現(xiàn)D2菌株與利迪鏈霉菌聚于同一分支中，其同源性達99.6%。D2菌株能使明膠液化、牛奶凝固胨化，能利用葡萄糖、果糖、甘露醇，不能使淀粉水解、硝酸鹽還原，不產(chǎn)生硫化氫和黑色素，不能利用木糖和淀粉；而利迪鏈霉菌能使淀粉水解，能利用木糖，弱利用淀粉。由此推測，D2菌株與利迪鏈霉菌可能屬于不同的種，但目前尚不能判定D2菌株是否為利迪鏈霉菌的一個新種，需要通過與模式種的DNA雜交后進一步分析。

隨著研究的深入，近年來放線菌對植物病害的防治作用也逐漸被人們發(fā)現(xiàn)和認(rèn)識。周婧等（2008）從黃瓜、南瓜和甜瓜的根際土壤中篩選到一株生防菌H-5，其對溫室甜瓜枯萎病的防效達75.6%。沈文淵（2012）對黃瓜、冬瓜、西瓜和苦瓜枯萎病進行生物防治研究，篩選出放線菌14號對上述4種瓜類枯萎病的抑制率分別為72.11%、70.09%、54.27%和56.41%。梁銀等（2013）從南京紫金山麓土壤中分離篩選出一株放線菌，其對黃瓜枯萎病的防治效果為51.85%。呂超（2015）對不同西瓜連作地塊進行生防處理，發(fā)現(xiàn)接種放線菌Act1可顯著降低連作大棚西瓜枯萎病的發(fā)病率。莊令（2017）從90株深海鏈霉菌中篩選出24株對香蕉枯萎病菌具有拮抗活性的菌株，活性率高達26.7%，其中菌株220362的拮抗活性強、嗜鹽性高，產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)穩(wěn)定，初步鑒定為鏈霉菌屬的1個新種。本研究篩選獲得的D2菌株對甜瓜枯萎病的最高防效可達73.53%，與上述報道的防治效果基本一致。

目前，報道較多可用于防治甜瓜枯萎病的微生物主要有細(xì)菌（莊敬華等，2008；趙青云，2011；黃建鳳等，2016）和真菌（黃艷青等，2009；Ainhoa et al.，2009；白飛榮等，2014），而本研究篩選獲得的D2菌株屬于放線菌，對于豐富枯萎病生防菌資源庫及利用放線菌防治甜瓜枯萎病有重要指導(dǎo)意義。另外，利迪鏈霉菌能產(chǎn)生許多次生代謝產(chǎn)物，如利迪霉素（Lydimycin）、利迪鏈菌素（Streptolydigin）和蘋果酸氧霉素（Malioxamycin）等抗生素（張致平和姚天爵，2005；石玲玲等，2017），其對細(xì)菌和真菌的繁殖有極大抑制作用。同時，在利迪鏈霉菌發(fā)酵液所產(chǎn)生的抑菌活性物質(zhì)中，涉及到的酶多為β-1，3-葡聚糖酶和幾丁質(zhì)酶，其中以β-1，3-葡聚糖酶研究較多（Liu and Balasubramanian，2001；陳懇，2016）。β-1，3-葡聚糖酶能分解真菌細(xì)胞壁中的葡聚糖，從而使細(xì)胞壁厚度變薄，導(dǎo)致細(xì)胞壁暴露，致使細(xì)胞因滲透壓差而導(dǎo)致死亡（Georgopapadakou，2001）。本研究僅對D2菌株對甜瓜枯萎病抑制效果進行初步研究，下一步將對D2菌株規(guī)?；囵B(yǎng)條件、抑菌活性物質(zhì)鑒定及田間應(yīng)用進行探索，從而為利用該菌開發(fā)新的生物農(nóng)藥或生物肥料提供技術(shù)指導(dǎo)。

4 結(jié)論

本研究篩選出一株對甜瓜枯萎病菌有較強拮抗活性的放線菌D2菌株，經(jīng)形態(tài)特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析，確定D2菌株為利迪鏈霉菌（S. lydicus），該放線菌對甜瓜枯萎病有較好的防治效果，具有開發(fā)成生物農(nóng)藥或生物肥料的潛力。

參考文獻：

白飛榮，劉洋，李輝，姚粟，曹艷花，張欣，程池. 2014. 香山黃櫨枯萎病葉片真菌的分離與鑒定[J]. 生物學(xué)通報， 49（5）：51-53. [Bai F R， Liu Y， Li H， Yao S， Cao Y H， Zhang X， Cheng C. 2014. Isolation and identification of leaf fungi in the leaf of Xiangshan smoke tree[J]. Bulletin of Biology， 49（5）：51-53.]

R. E. 布坎南，N.E. 吉布期. 1995. 伯杰細(xì)菌鑒定手冊[M].中國科學(xué)院微生物研究所《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》翻譯組譯. 第8版. 北京：科學(xué)出版社：1037-1182.[Buchanan R E，Gibbons N E. 1995. Bergeys Manual of Systemaic Bacteriology[M]. Translated by Bergeys Manual of Syste-maic Bacteriology Translation Group， Institute of Microbiology， Chinese Academy of Sciences. The 8th Edition. Beijing：Science Press：1037-1182.]

陳懇. 2016. 利迪鏈霉菌 E12發(fā)酵液及其粗提物的抑菌活性初探[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報， 18（2）：258-262. [Chen K. 2016. Study on the antagonistic activity of fermentation broth and its crude extract produced by Streptomyces lydicus E12[J]. Chinese Journal of Pesticide Science，18（2）：258-262.]

黃建鳳，張發(fā)寶，逄玉萬，黃巧義，唐拴虎，付弘婷，楊苞梅. 2016. 兩株香蕉枯萎病拮抗細(xì)菌的篩選及抑菌機理[J].微生物學(xué)通報，44（4）：835-844. [Huang J F， Zhang F B， Pang Y W， Huang Q Y， Tang S H， Fu H T，Yang B M. 2016. Inhibition of banana Fusarium wilt by two biocontrol agents[J].Microbiology China， 44（4）：835-844.]

黃亞麗，甄文超，張麗萍，張根偉，田連生，程輝彩，史延茂，李書生. 2005. 草莓重茬病菌的分離及其生物防治[J]. 生物技術(shù)，15（6）：74-76. [Huang Y L， Zhen W C， Zhang L P，Zhang G W，Tian L S，Cheng H C，Shi Y M，Li S S. 2005. Separated of causal organisms and biocontrol of strawberry（Fragria ananassa Dach） replant disease[J].Biotechnology， 15（6）：74-76.]

黃艷青，劉學(xué)軍，徐韶，莊敬華. 2009. 木霉菌對甜瓜枯萎病的防治[J]. 農(nóng)業(yè)科技與裝備，（1）：31-32. [Huang Y Q， Liu X J， Xu S， Zhuang J H. 2009. The control effect of Trichoderma against muskmelon wilt[J]. Agricultural Science & Technology and Equipment，（1）：31-32.]

李晨楚，張榮意，康迅，靳鵬飛，譚志瓊. 2017. 枯草芽孢桿菌B43對香蕉枯萎病菌抑菌活性及其活性成分分析[J]. 中國南方果樹， 46（3）：57-63. [Li C C， Zhang R Y， Kang X， Jin P F， Tan Z Q. 2017. The antimicrobial activity and its active component analysis of Bacillus subtilis B43 against banana blight[J]. South China Fruits， 46（3）：57-63.]

李歡，曹雪梅，陳茹，賈杰，馬桂珍，暴增海. 2017. 海洋多黏類芽孢桿菌L1-9菌株粉劑對黃瓜的促生防病作用[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，46（12）：65-69. [Li H，Cao X M，Chen R，Jia J，Ma G Z， Bao Z H. 2017. Effect of marine Paenibacillus polymyxa L1-9 powder on cucumber growth and di-sease occurrence[J]. Journal of Henan Agricultural Scien-ces，46（12）：65-69.]

李瑞琴. 2004. 甜瓜枯萎病病原學(xué)及防治技術(shù)研究[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué). [Li R Q. 2004. Studies on the pathology & control of Fusarium wilt of melonis[D]. Yang-ling： Northwest A & F University.]

李旭，趙娟，徐帥，吳學(xué)宏. 2014. 甜瓜枯萎病及其綜合防治研究進展[J]. 中國植保導(dǎo)刊，34（12）：17-21. [Li X， Zhao J， Xu S， Wu X H. 2014. Research progress on Fusarium wilt of muskmelon and its integrated control[J]. China Plant Protection， 34（12）：17-21.]

梁銀，張谷月，王辰，王世梅，沈其榮. 2013. 一株拮抗放線菌的鑒定及其對黃瓜枯萎病的生防效應(yīng)研究[J]. 土壤學(xué)報，50（4）：810-816. [Liang Y， Zhang G Y， Wang C， Wang S M， Shen Q R. 2013. Identification and biocontrol effect of a strain of actinomycete antagonistic to wilt disease of cucumber[J]. Acta Pedologica Sinica，50（4）：810-816.]

陸丹丹. 2016. 一株拮抗鏈霉菌的篩選及活性物質(zhì)鑒定[D].杭州：中國計量大學(xué). [Lu D D. 2016. Isolation of the antagonist Streptomyces and identification of the active compound[D]. Hangzhou： China Jiliang University.]

呂超. 2015. 生防放線菌Act1防治西瓜枯萎病的田間效果分析[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué). [Lü C. 2015. Analysisi of the field effect on biocontrol actinomycetes 1 preventing watermenlon fusarium wilt[D].Yangling：Northwest A & F University.]

牛夢天. 2016. 黃瓜枯萎病拮抗微生物的篩選及發(fā)酵[D]. 石家莊：河北科技大學(xué). [Niu M T. 2016. Screening and fermentation of antagonistic microorganisms against Fusa-rium wilt of cucumber[D]. Shijiazhuang：Hebei University of Science and Technology.]

Sambrook J， Russell D W. 2002. 分子克隆實驗指南[M]. 黃培堂譯. 第3版. 北京：科學(xué)出版社. [Sambrook J， Russell D W. 2002. Molecular Cloning： A Laboratory Manual[M]. Translated by Huang P T. The 3rd Edition. Beijing：Science Press.]

沈文淵. 2012. 瓜類枯萎病菌四種?；偷纳飳W(xué)特性及瓜類枯萎病生物防治研究[D]. 雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué). [Shen W Y. 2012. Biological characteristics and biological control research on four kinds of gourd Fusarium wilt[D]. Yaan：Sichuan Agricultural University.]

石玲玲，吳慧玲，劉銘，董丹，盧彩鴿，劉偉成. 2017. 利迪鏈霉菌nsdA基因的克隆及其阻斷載體的構(gòu)建[J]. 生物技術(shù)， 27（5）： 409-414. [Shi L L， Wu H L， Liu M， Dong D， Lu C G， Liu W C. 2017. Cloning and disruption vector construction of nsdA in Streptomyces lydicus[J]. Biotechnology， 27（5）： 409-414.]

孫廣正，姚拓，趙桂琴，盧虎，馬文彬. 2015. 熒光假單胞菌防治植物病害研究現(xiàn)狀與展望[J]. 草業(yè)學(xué)報， 24（4）：174-190. [Sun G Z，Yao T，Zhao G Q，Lu H，Ma W B. 2015. Research progress and prospects for controlling plant di-seases using Pseudomonas fluorescens[J].Acta Prataculturae Sinica， 24（4）：174-190.]

田慧. 2017. 尖孢鏈霉菌SN0280次生代謝產(chǎn)物分離鑒定及抑菌活性研究[D]. 沈陽：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué). [Tian H. 2017. Isolation，identification and antibacterial activities of se-condary metabolites of Streptomyces cuspidosporus SN0280[D]. Shenyang： Shenyang Agricultural University.]

王雙伍，李賽群，劉建雄，何科佳，肖光輝，楊筱玲. 2010. 甜瓜空間誘變育種研究初報[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，（23）：28-30.[Wang S W，Li S Q，Liu J X，He K J，Xiao G H，Yang X L. 2010. Preliminary report of space mutation breeding for melon[J]. Hunan Agricultural Sciences，（23）：28-30.]

楊長成，莊敬華，高增貴，魏漢蓮，劉秋晨. 2010. 惡霉靈與多菌靈對甜瓜枯萎病的防治效果[J]. 北方園藝，（7）： 151-153. [Yang C C， Zhuang J H， Gao Z G， Wei H L， Liu Q C. 2010. Control effect of carbendazim and hymexazol on Fusarium oxysporum wilt of melon[J]. Northern Horticulture，（7）：151-153.]

姚輝. 2014. 甜瓜枯萎病高效拮抗放線菌的篩選和特性分析[D]. 長春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué). [Yao H. 2014. Screening and Characteristics of antagonistic Actinomycetes against musk-melon fusarium wilt[D]. Changchun：Jilin Agricultural University.]

尹守恒，劉宏敏，楊宛玉，陳中府，呂愛芹，李紀(jì)軍，張國娜. 2012. 黃淮地區(qū)日光溫室厚皮甜瓜與韭菜輪作高效栽培技術(shù)[J]. 中國蔬菜，（19）： 57-59. [Yin S H， Liu H M， Yang W Y，Chen Z F，Lü A Q，Li J J，Zhang G N. 2012. The high-efficient cultivation technique of the thick skin melon-leek rotation in greenshouse in Huanghuai Area[J]. China Vegetables，（19）：57-59.]

張靜，胡立勇. 2012. 農(nóng)作物種子處理方法研究進展[J]. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，31（2）：258-264. [Zhang J， Hu L Y. 2012. The progress of crops seed treatment[J]. Journal of Huazhong Agricultural University， 31（2）：258-264.]

張茹萍. 2011. 煙草黑脛菌拮抗放線菌的篩選、鑒定及其生防效果研究[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué). [Zhang R P. 2011. Screening and identifying of antagonistic actinomyce against Phytophthora parasitica var. nicotianae and biocontrol effects of the antibiotic[D]. Taian： Shandong Agricultural University.]

張永平，楊少軍，許爽，陳幼源. 2017. 不同甜瓜品種在采后貯藏過程中生理與品質(zhì)變化[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，29（4）：32-35. [Zhang Y P，Yang S J，Xu S，Chen Y Y. 2017. Chan-ges in physiology and quality of different melon varieties during storage[J]. Acta Agriculturae Jiangxi，29（4）：32-35.]

張致平，姚天爵. 2005. 抗生素與微生物產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)[M]. 北京： 化學(xué)工業(yè)出版社：108-135. [Zhang Z P， Yao T J. 2005. Bioactive Substances Produced by Antibio-tics and Microorganisms[M]. Beijing： Chemical Industry Press：108-135.]

趙青云. 2011. 抗甜瓜枯萎病生防菌及其生物有機肥的生防機理研究[D]. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué). [Zhao Q Y. 2011. The antagonistic bacteria against muskmelon Fusarium wilt disease and biocontrol mechanisms of its bio-organic fertilizer[D]. Nanjing： Nanjing Agricultural University.]

周婧，高增貴，何秀玲，莊敬華，張小飛，吳海云. 2008. 甜瓜枯萎病拮抗內(nèi)生細(xì)菌篩選研究[J]. 北方園藝，（2）：225-227. [Zhou J， Gao Z G， He X L， Zhuang J H， Zhang X F， Wu H Y. 2008. Selection of endophytic bacteria for suppression of melon wilt caused by Fusarium oxysporum[J]. Northern Horticulture，（2）：225-227.]

周小林，楊欣娟，丁廣建，包衛(wèi)紅，佘德琴，蔡銀杰，陸慧. 2007. 甜瓜枯萎病藥劑防治試驗[J]. 上海蔬菜，（6）： 105-107. [Zhou X L， Yang X J， Ding G J， Bao W H， She D Q， Chai Y J， Lu H. 2007. The chemical controlling experiments of muskmelon fusarium wilt[J]. Shanghai Vegetables，（6）：105-107.]

莊敬華，楊長成，高增貴，徐韶，鄭雅楠. 2008. 枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）B6對甜瓜枯萎病的生防作用[J]. 果樹學(xué)報，25（6）：891-895. [Zhuang J H， Yang C C，Gao Z G，Xu S，Zheng Y N. 2008. Effects of Bacillus subtilis B6 on melon fusarium wilt[J]. Journal of Fruit Science，25（6）：891-895.]

莊令. 2017. 深海鏈霉菌拮抗香蕉枯萎病菌活性菌株的篩選及鑒定[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，45（12）：59-63. [Zhuang L. 2017. Screening and identification of deep-sea stretpomyces with an antagonistic activity against Fusarum oxysporum[J]. Guizhou Agricultural Sciences，45（12）：59-63.]

鄒立飛. 2013. 甜瓜枯萎病病原拮抗菌的篩選及利用響應(yīng)面法優(yōu)化發(fā)酵條件[D]. 海口：海南大學(xué). [Zou L F. 2013. Screening of antagonistic bacteria against Muskmelon Fusarium wilt and optimization of the fermentation condition by response surface method[D]. Haikou： Hainan University.]

Ainhoa M M，Jose A P，Eva L，Antonio R. 2009. Interraction between arbuscularmycorrhizal fungi and Trichoderma harzianum and their effects on Fusarium wilt in melon plants grown in seedling nurseries[J]. Journal of the Scien-ce of Food and Agriculture， 89（11）： 1843-1850.

Cal A D，Sztejnberg A， Sabuquillo P. 2009. Management Fusarium wilt on melon and watermenlon by Penicillium oxalicum[J]. Biological Control， 51（3）： 480-486.

Cao Y，Wang J D，Wu H S，Yan S H，Guo D J. 2016. Soil chemical and microbial responses to biogas slurry amendment and its effect on Fusarium wilt suppression[J]. Applied Soil Ecology， 107： 116-123.

Egamberdiyeva D， Juraeva D，Haitow B，Gafurova L，Jordan D L. 2004. Microbial and biochemical changes induced by rotation and tillage in a calcareous soil under melon，tomato，wheat and cotton production[C]//Proceedings of the 26th Southern Conservation Tillage Conference for Sustainable Agriculture，（15）： 224-228.

Gava C A T，Pinto J M. 2016. Biocontrol of melon wilt caused by Fusarium oxysporum Schlect f. sp. melonis using seed treatment with Trichoderma spp. and liquid compost[J]. Biological Control， 97： 13-20.

Georgopapadakou N H. 2001. Update on antifungals targeted to thecell wall： Focus on beta-1，3-glucan synthase inhibitors[J]. Expert Opin Investig Drugs，10（2）： 269-280.

Hffrench R H， Dowlingb A， Waterfieldb N R. 2007. Insecticidal toxins from Photorhabdus bacteria and their potential use in agriculture[J]. Toxicon， 49： 436-451.

Liu J， Balasubramanian M K. 2001. 1，3-beta-glucan synthase：Auseful target for antifungal drugs[J]. Curr Drug Targets Infect Disord，1（2）： 159-169.

Madadkhah E，Lotfi M，Nabipour A，Rahmanpour S，Banihashemi Z，Shoorooei M. 2014. Enzymatic activities in roots of melon genotypes infected with Fusarium oxysporum f. sp. melonis race 1[J]. Scientia Horticulturae， 135（24）： 171-176.

?zbah?e A，Tari A F，Yücel S，Okur-Bah?e O. 2014. Chemigation for fusarium wilt and root rot management on melon[J]. Bahce， 97： 113-120.

（責(zé)任編輯 麻小燕）