廣西百色云耳野生菌株的遺傳多樣性分析

吳圣進(jìn)　陳雪鳳　王燦琴　吳小建　韋仕巖　藍(lán)桃菊

摘要：【目的】分析廣西百色云耳野生菌株的遺傳多樣性，為其種質(zhì)資源的保護(hù)及開發(fā)利用提供參考?！痉椒ā繌膹V西百色地區(qū)采集23個(gè)云耳野生菌株，進(jìn)行人工栽培，期間觀察測(cè)定其農(nóng)藝性狀；采用酯酶同工酶技術(shù)分析不同云耳菌株的酯酶同工酶酶譜多態(tài)性，并進(jìn)行聚類分析?！窘Y(jié)果】在23個(gè)云耳野生菌株中，子實(shí)體朵形為單生的菌株有16個(gè)、簇生的7個(gè)；耳片邊緣平滑的菌株13個(gè)，波浪狀的菌株10個(gè)；耳片背面筋道脈紋明顯或較明顯的有15個(gè)，不明顯或無(wú)脈紋的有8個(gè)；耳片顏色為淺黃褐色的菌株4個(gè)，黃褐色的8個(gè)，黑褐色的11個(gè)；耳片大?。ㄩL(zhǎng)×寬）為30.1～51.6 mm×20.5～41.7 mm，厚度0.95～1.44 mm，表明百色云耳的形態(tài)特征具有豐富的多樣性；原基形成時(shí)間26～59 d，雜菌感染率0～51.1%，耳片干濕比10.1～14.1，第一潮產(chǎn)量8.2%～50.5%，表明不同菌株的原基形成時(shí)間、抗雜性、干濕比和產(chǎn)量等方面也具有豐富的多樣性。23個(gè)云耳野生菌株共檢測(cè)到19條譜帶，有18種譜帶類型，譜帶的遷移率（Rf）為16.6～88.6，分布頻率為4.3%～100.0%，其中有3條帶是百色云耳酯酶同工酶的特征譜帶。23個(gè)云耳野生菌株的遺傳相似系數(shù)為0.68～1.00，在遺傳相似系數(shù)為0.68時(shí)，可分為兩大類群，其中大部分菌株的聚類結(jié)果與其地理位置吻合。【結(jié)論】廣西百色云耳野生菌株具有豐富的遺傳多樣性，蘊(yùn)含著較多的優(yōu)異遺傳性狀，具有較大的開發(fā)利用潛力。

關(guān)鍵詞： 百色云耳；野生菌株；遺傳多樣性；農(nóng)藝性狀；酯酶同工酶

中圖分類號(hào)： S646.603 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2018）06-1061-07

Abstract：【Objective】The genetic diversity of Baise Auricularia auricular wild strains in Guangxi was analyzed， in order to provide reference for protection， exploitation and utilization of the resources of Baise A. auricular. 【Method】Twenty-three A. auricular wild strains were collected from Baise in Guangxi and artificially cultivated. During this period， their agronomic characters were observed and determined. The polymorphism of esterase isozyme bands in different A. auricular strains was analyzed by using esterase isozyme technology， and cluster analysis was also conducted. 【Result】Among the 23 wild strains， there were 16 strains with the growth type of individual fruit body， 7 strains with clustered fruit body；13 stains had smooth margin and 10 strains had wavy margin； at the back of A. auricular， 15 strains had ob-vious or relatively obvious veins， and 8 strains had no veins or no obvious veins； the surface color of 4 strains was fawn， 8 strains tawny， and 11 strains was black brown； the size of surface（length×width） were 30.1-51.6 mm×20.5-41.7 mm and the thickness was 0.95-1.44 mm. These results showed that the morphology characters of Baise A. auricular possessed high diversity. The germination time of primodium varied from 26 to 59 d， and contamination rate of other strains varied from 0 to 51.1%； dry-wet ration of surface varied from 10.1 to 14.1 and yield of first tide varied from 8.2% to 50.5%. These results showed that there were high diversity among different strains on germination time of primordium，anti-weed-moulds， dry-wet ratio and yields. There were 19 bands in total and 18 types of bands detected from the 23 wild strains. The mobility rate（Rf） of bands ranged from 16.6 to 88.6， and the distribution frequency ranged from 4.3% to 100.0%. Three of the bands were the characteristic bands in esterase isozyme bands of Baise A. auricular. The genetic similarity coefficients ranged from 0.68 to 1.00 among the 23 wild strains. The 23 wild strains could be divided into two groups at the similarity coefficient of 0.68. And the cluster analysis results of most strains were agreed with their geographical distribution. 【Conclusion】Baise A. auricular wild strains in Guangxi possesses high genetic diversity，implies many good genetic characters and has great potential for exploitation and utilization.

Key words： Baise Auricularia auricular； wild strains； genetic diversity； agronomic characters； esterase isozyme

0 引言

【研究意義】云耳（Auricularia auricular）是我國(guó)南方地區(qū)對(duì)黑木耳的一種俗稱，隸屬于擔(dān)子菌亞門異擔(dān)子菌綱木耳目木耳科木耳屬（戴玉成等，2010），在我國(guó)廣泛分布，其產(chǎn)量?jī)H次于香菇和平菇，為四大食用菌之一（中國(guó)食用菌協(xié)會(huì)，2013；馮小飛等，2016）。百色云耳是指自然分布于廣西百色地區(qū)各縣（區(qū)）的野生黑木耳，以田林縣分布最廣、產(chǎn)量最高、品質(zhì)優(yōu)良，曾多次在全國(guó)黑木耳質(zhì)量評(píng)比中名列三甲，遠(yuǎn)銷港澳及東南亞等地，是廣西特有的黑木耳（農(nóng)訓(xùn)學(xué)，2009；謝毅棟，2009）。百色云耳屬于適合南亞熱帶植被地理?xiàng)l件生長(zhǎng)的典型生態(tài)種群，也是我國(guó)黑木耳的一個(gè)重要生態(tài)類群（李發(fā)盛等，2008b；黃艷芳等，2012）。因此，開展百色云耳的遺傳多樣性研究對(duì)其種質(zhì)鑒定、馴化栽培、資源保護(hù)及遺傳育種具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前，種質(zhì)資源的遺傳多樣性主要通過形態(tài)學(xué)標(biāo)記、細(xì)胞學(xué)標(biāo)記、生物化學(xué)標(biāo)記和分子遺傳標(biāo)記等方法進(jìn)行研究。有關(guān)黑木耳的遺傳多樣性研究已有較多報(bào)道。唐利華等（2007）通過酯酶同工酶分析對(duì)我國(guó)34個(gè)主栽的黑木耳菌株進(jìn)行遺傳多樣性研究，結(jié)果表明其遺傳背景差異不明顯。陶梅等（2009）通過體細(xì)胞不親和性反應(yīng)和ITS序列分析對(duì)黑龍江省黑木耳栽培菌株進(jìn)行親緣關(guān)系研究，結(jié)果表明其親緣關(guān)系較近，遺傳多樣性不豐富。Tang等（2010）分別采用ISSR和SRAP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)黑龍江省黑木耳菌株的遺傳多樣性進(jìn)行分析，結(jié)果表明其具有較豐富的遺傳多樣性。陶朋飛和許修宏（2011）應(yīng)用ITS和SRAP分子標(biāo)記技術(shù)分析黑龍江省野生黑木耳菌株的遺傳多樣性，結(jié)果表明其具有較豐富的遺傳多樣性。錢雪婷（2016）通過農(nóng)藝學(xué)性狀描述、酯酶同工酶分析試驗(yàn)、體細(xì)胞不親和性反應(yīng)和ITS序列分析對(duì)秦巴山區(qū)的45個(gè)黑木耳菌株的遺傳多樣性進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其遺傳多樣性較豐富。有關(guān)百色云耳的研究報(bào)道，李發(fā)盛等（2008b）、黃艷芳等（2012）研究發(fā)現(xiàn)，百色云耳形態(tài)特征與東北主推的黑木耳品種存在明顯差異；王燦琴等（2012）對(duì)5個(gè)百色云耳菌株的菌絲生長(zhǎng)狀況、子實(shí)體形態(tài)、出菇期和產(chǎn)量等性狀進(jìn)行比較分析，結(jié)果表明不同菌株的農(nóng)藝性狀存在明顯差異?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，針對(duì)百色云耳野生種群資源的研究?jī)H限于形態(tài)學(xué)或農(nóng)藝性狀指標(biāo)的觀察及測(cè)定，涉及的菌株數(shù)量也很少，尚缺乏全面系統(tǒng)的研究，尤其鮮見有關(guān)百色云耳野生菌株遺傳多樣性的研究報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】將農(nóng)藝性狀測(cè)定與酯酶同工酶分析試驗(yàn)相結(jié)合，對(duì)23個(gè)百色云耳野生菌株進(jìn)行遺傳多樣性分析，以期挖掘百色云耳優(yōu)良性狀和優(yōu)異基因，為其種質(zhì)資源的保護(hù)和開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試百色云耳野生菌株共23個(gè)，其名稱、采集時(shí)間和采集地見表1。N，N-亞甲雙丙烯酰胺、α，β-乙酸萘酯、堅(jiān)固藍(lán)等主要試劑購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司。主要儀器設(shè)備：電泳儀（DYCZ-24，北京市六一儀器廠）、恒溫水浴鍋（HH-W420，江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠）、高速冷凍離心機(jī)（TGL-16G，上海安亭科學(xué)儀器廠）和搖床（QYC-211，上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）等。

1. 2 農(nóng)藝性狀測(cè)定

于2016年10月～2017年3月采用袋料栽培方式進(jìn)行云耳菌株的出耳試驗(yàn)。栽培袋料配方：闊葉樹木屑78%，麥麩20%，石膏1%，石灰1%。按照任建平（2015）的方法進(jìn)行栽培袋料配制、裝袋、高壓滅菌和接種，每個(gè)菌株制備菌包90袋。接種后的菌包置于28 ℃培養(yǎng)室培養(yǎng)，期間記錄從接種至多數(shù)菌包開始形成原基所需的天數(shù)，即原基形成時(shí)間。菌絲滿袋并有少量原基形成時(shí)，將菌包移至出菇棚，按照任建平（2015）的方法進(jìn)行催耳芽和出耳管理。出耳期間，觀察記錄云耳的著生方式，統(tǒng)計(jì)菌包雜菌感染率。待云耳耳片充分舒展，耳基收縮，耳邊內(nèi)卷，腹凹面出現(xiàn)白色孢子粉后，采收第一潮云耳。采收時(shí)記錄云耳子實(shí)體形態(tài)，并統(tǒng)計(jì)產(chǎn)量，產(chǎn)量按生物學(xué)效率計(jì)算，即生物學(xué)效率（%）=第一潮云耳鮮重（kg）/栽培袋料干重（kg）×100。同時(shí)測(cè)定每個(gè)菌株子實(shí)體的干濕比，干濕比=吸水完全的云耳鮮重（kg）/云耳干重（kg）。

1. 3 酯酶同工酶酶譜分析

將菌絲剛長(zhǎng)滿試管斜面的云耳菌株接種于裝有PDA液體培養(yǎng)基的三角瓶中，于28 ℃搖床培養(yǎng)25 d，然后過濾菌絲，擠干水分。按照韋仕巖等（2014）的方法制備酯酶同工酶樣品，并進(jìn)行電泳、染色及酶譜分析。

1. 4 統(tǒng)計(jì)分析

基于上述酯酶同工酶的電泳數(shù)據(jù)，以NTSYS-PC計(jì)算不同菌株間遺傳相似系數(shù)。采用不加權(quán)成對(duì)群算術(shù)平均法（UPGMA）進(jìn)行云耳菌株的遺傳相似性聚類分析，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。

2 結(jié)果與分析

2. 1 百色云耳野生菌株的農(nóng)藝性狀測(cè)定結(jié)果

2. 1. 1 形態(tài)特征 由表2可知，在23個(gè)百色云耳野生菌株中，子實(shí)體朵形為單生的有16個(gè)，簇生的有7個(gè)；耳片邊緣平滑的有13個(gè)，波浪狀的有10個(gè)；耳片背面筋道脈紋明顯或較明顯的有15個(gè)，不明顯或無(wú)脈紋的有8個(gè)；耳片顏色淺黃褐色的有4個(gè)，黃褐色的有8個(gè)，黑褐色的有11個(gè)；耳片長(zhǎng)度30.1～51.6 mm；耳片寬度20.5～41.7 mm；耳片厚度0.95～1.44 mm。其中，菌株TY011、TY012、TY013、TY026和TY051具有良好的子實(shí)體形態(tài)，單生，耳片邊緣平滑，脈紋不明顯，耳片也較大（長(zhǎng)×寬>39.0 mm×28.0 mm，下同），但耳片較?。ê穸?1.00 mm，下同）；菌株TY031也具有良好的子實(shí)體形態(tài)，多為單生，耳片邊緣平滑，脈紋不明顯，耳片厚（1.25 mm）但較?。▋H32.8 mm×22.9 mm）；菌株TY041、YE1、YE2、YE3和YE6的耳片較大且厚（厚度>1.00 mm，下同），但耳片邊緣呈波浪狀，部分菌株脈紋較多；菌株TY052.1和TY052.2的耳片較大，但子實(shí)體其他形態(tài)均較差；菌株TY022、TY023、TY024、TY053、TY054、TY055、TY061、TY062和TY063的耳片均較厚，尤其是菌株TY024的耳片厚度為1.44 mm，但子實(shí)體其他形態(tài)均較差。綜上所述，百色云耳野生菌的形態(tài)特征具有豐富的多樣性，且含有較多優(yōu)良的外觀性狀。

2. 1. 2 栽培性狀 由表3可知，23個(gè)百色云耳野生菌株中，菌株TY011、TY012、TY023、TY24、TY026、TY041、TY062、YE1和YE3為早熟型品種，原基形成時(shí)間僅26～32 d；菌株TY031、TY051、TY061、TY013、YE2和YE6為中熟型品種，原基形成時(shí)間為36～45 d；其余菌株均為晚熟型品種，原基形成時(shí)間為48～59 d。菌株TY013、TY024、TY026、TY041、TY063、YE1、YE2、YE3和YE6有較高的抗雜菌能力，雜菌感染率均低于8.0%；菌株TY012、TY022、TY031、TY042、TY053、TY054和TY062的抗雜菌能力較差，雜菌感染率均高于22.0%，最高達(dá)51.1%。菌株TY026、TY041、TY042、YE1、YE2、YE3和YE6的產(chǎn)量均較高，第一潮產(chǎn)量達(dá)41.7%～50.5%；菌株TY022、TY023、TY031、TY053、TY054和TY062的產(chǎn)量較低，第一潮產(chǎn)量?jī)H8.2%～15.3%。不同百色云耳菌株耳片的干濕比為10.1～14.1，表明不同菌株間耳片的干濕比存在明顯差異。綜上所述，百色云耳野生菌的原基形成時(shí)間、抗雜能力、產(chǎn)量和子實(shí)體干濕比等栽培學(xué)性狀多樣性豐富，可滿足不同栽培需求，并蘊(yùn)含較多的優(yōu)良栽培性狀。

2. 2 百色云耳野生菌株的酯酶同工酶酶譜分析結(jié)果

對(duì)23個(gè)云耳野生菌株的酯酶同工酶樣品進(jìn)行電泳，酶譜如圖1所示。根據(jù)酶譜進(jìn)行酶帶分布特征和遷移率分析，結(jié)果如圖2所示。由圖1和圖2可知，從23個(gè)百色云耳菌株共檢測(cè)出19條譜帶，有18種譜帶類型，各菌株的譜帶數(shù)4～10條，各譜帶的遷移率（Rf）為16.6～88.6，分布頻率為4.3%～100.0%，其中帶6和帶8的分布頻率均達(dá)100.0%，為百色云耳酯酶同工酶的特征譜帶，帶7的分布頻率為82.6%，也可能是百色云耳的特征譜帶?？梢?，百色云耳野生菌的酯酶同工酶酶譜多態(tài)性非常豐富。

2. 3 聚類分析結(jié)果

利用NTSYS-PC對(duì)23個(gè)百色云耳野生菌株的酯酶同工酶譜帶數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類分析，結(jié)果如圖3所示。23個(gè)百色云耳野生菌株的遺傳相似系數(shù)為0.68～1.00，遺傳差異變化較大，說(shuō)明百色云耳菌株的遺傳背景較豐富。在遺傳相似系數(shù)為0.68時(shí)，可將23個(gè)菌株分為兩大類：第一類包括菌株YE1、TY011、TY012、TY055、YE3、TY013和TY026共7個(gè)菌株；第二類包括菌株YE2、YE6、TY022、TY042、TY051、TY023、TY024、TY031、TY041、TY053、TY054、TY061、TY062、TY063、TY052.1和TY052.2共16個(gè)菌株。結(jié)合菌株的農(nóng)藝性狀進(jìn)行分析，結(jié)果表明兩大類的菌株在耳片顏色上存在差異。其中，第一類菌株的耳片顏色較淺，呈淺黃褐色至黃褐色，第二類菌株的耳片顏色較深，呈黃褐色至黑褐色；其他農(nóng)藝性狀與聚類結(jié)果間未見相吻合的規(guī)律。第一類的7個(gè)菌株中，菌株TY011、TY012和TY013均來(lái)自田林縣定安鎮(zhèn)，第二類的16個(gè)菌株中，菌株TY041、TY042等11個(gè)菌株來(lái)自田林縣八渡鄉(xiāng)，說(shuō)明同一來(lái)源地的菌株遺傳背景差異較小，親緣關(guān)系較近的可能性較大。不同菌株還可能存在同物異名現(xiàn)象，第一類中，菌株TY011與TY012的遺傳相似系數(shù)為1.00，且與菌株YE1的遺傳相似系數(shù)也達(dá)0.95，表明這3個(gè)菌株存在同物異名的可能性很大；第二類中，菌株TY023與TY024、菌株TY062與TY063、菌株TY052.1與TY052.2及菌株TY053、TY054、TY061與TY041間的遺傳相似系數(shù)均大于0.95，均可能存在同物異名的現(xiàn)象。

3 討論

種質(zhì)資源遺傳多樣性是農(nóng)藝性狀、細(xì)胞學(xué)、生物化學(xué)及分子遺傳標(biāo)記等方面多樣性的綜合體現(xiàn)（季維智和宿兵，1999；錢雪婷，2016）。對(duì)于黑木耳而言，子實(shí)體朵形、腹背面脈紋（皺褶）、耳片顏色、大小和厚度等形態(tài)特征及干濕比、原基形成時(shí)間、抗雜性和產(chǎn)量等栽培性狀是最常用的農(nóng)藝性狀指標(biāo)（陳影等，2014）。本研究的23個(gè)百色云耳菌株在子實(shí)體朵形、耳片背面脈紋、顏色和大小等形態(tài)特征上具有豐富的多樣性。我國(guó)秦巴山區(qū)和東北地區(qū)的黑木耳的農(nóng)藝性狀也呈較高的多樣性（馬慶芳等，2007；錢雪婷，2016）。黃艷芳等（2012）研究認(rèn)為，百色云耳以單生為主、簇生極少，顏色棕褐色，無(wú)脈紋。該結(jié)論未體現(xiàn)百色云耳外觀形態(tài)性狀的多樣性，可能與其觀測(cè)的菌株數(shù)量少（僅6個(gè)）有關(guān)。王燦琴等（2012）分離得到的5個(gè)百色云耳菌株在形態(tài)特征、產(chǎn)量和抗雜性等方面存在明顯差異。本研究結(jié)果顯示，23個(gè)百色云耳野生菌株的原基形成時(shí)間為26～59 d，可分為早熟型、中早熟型和晚熟型3種類型，與馬慶芳等（2007）根據(jù)出耳周期對(duì)東北地區(qū)黑木耳的劃分結(jié)果基本一致；不同菌株的雜菌感染率0～51.1%，產(chǎn)量8.2%～50.5%，說(shuō)明抗雜性和產(chǎn)量差異明顯?？梢?，百色云耳菌株在原基形成時(shí)間、抗雜性和產(chǎn)量等栽培性狀上也具有豐富的多樣性。

豐富的農(nóng)藝性狀多樣性是挖掘云耳優(yōu)良性狀和品種選育的物質(zhì)基礎(chǔ)。很多科研人員均是從農(nóng)藝性狀豐富多樣的黑木耳野生種質(zhì)資源中篩選培育出生長(zhǎng)旺盛、抗雜性強(qiáng)、產(chǎn)量高的優(yōu)良菌株（馬慶芳等，2007；錢雪婷，2016；翟玉，2016）。本研究結(jié)果表明，百色云耳野生資源蘊(yùn)含著較多優(yōu)良性狀，如菌株TY011、TY012和TY031等的子實(shí)體形態(tài)良好，菌株TY024等的耳片較厚，菌株TY013、TY024和TY026等的抗雜性強(qiáng)，菌株TY026、YE2和YE6等產(chǎn)量高，具有較大的開發(fā)利用潛力。李發(fā)盛等（2008a，2009）從百色云耳野生資源中篩選馴化出一株適合桑枝栽培的高產(chǎn)菌株百云6號(hào)；陳雪鳳等（2016a，2018）從百色云耳野生資源中分別篩選出富集鈣和鐵能力強(qiáng)的菌株及耐高溫的菌株。可見，百色云耳野生資源優(yōu)異性狀基因的挖掘潛力巨大。

酯酶同工酶作為基因表達(dá)的產(chǎn)物，其譜帶的差異間接代表了DNA分子變異，因此，酯酶同工酶技術(shù)是研究生物群體遺傳差異的重要手段之一，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于木耳等食用菌的鑒別及遺傳多樣性分析（邊銀丙等，2000；唐利華等，2007；韋仕巖等，2014；陳雪鳳等，2016b）。本研究采用酯酶同工酶技術(shù)對(duì)23個(gè)百色云耳野生菌株進(jìn)行遺傳多樣性分析，結(jié)果顯示從23個(gè)菌株中共檢測(cè)出19條譜帶，有18種譜帶類型，表明百色云耳野生菌株的酯酶同工酶多態(tài)性較高，遺傳多樣性豐富；其遺傳相似系數(shù)為0.68～1.00，說(shuō)明23個(gè)菌株間發(fā)生明顯遺傳變異，親緣關(guān)系較近。同樣采用酯酶同工酶技術(shù)，翟玉（2016）研究發(fā)現(xiàn)，東北地區(qū)和云南地區(qū)的33個(gè)黑木耳菌株的遺傳相似系數(shù)為0.52～1.00；唐利華等（2007）研究發(fā)現(xiàn)，來(lái)自國(guó)內(nèi)不同地區(qū)的34個(gè)黑木耳栽培菌株的遺傳相似系數(shù)為0.14～1.00。與上述研究結(jié)果相比，本研究中百色云耳菌株間的遺傳相似系數(shù)較高，其原因可能是供試的百色云耳僅采集于田林縣或近鄰縣，地理范圍太狹窄，遺傳背景相似。

聚類分析是基于親緣關(guān)系進(jìn)行歸類。翟玉（2016）研究表明，來(lái)自云南和東北地區(qū)的33個(gè)黑木耳的聚類結(jié)果與其地理位置高度吻合。本研究將23個(gè)百色云耳野生菌株劃分為兩大類，第一類有7個(gè)菌株，來(lái)自定安鎮(zhèn)的3個(gè)菌株均歸在該類；第二類有16個(gè)菌株，來(lái)自八渡鄉(xiāng)的12個(gè)菌株中有11個(gè)菌株歸在該類，表明來(lái)自地理位置相近的云耳菌株遺傳背景差異越小，親緣關(guān)系較近的可能性較大。但唐利華等（2007）研究發(fā)現(xiàn)，來(lái)自國(guó)內(nèi)34個(gè)黑木耳栽培菌株聚類結(jié)果與其地理位置不吻合，可能與栽培菌株在我國(guó)各地穿插引種頻繁有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，個(gè)別來(lái)自不同鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）的百色云耳野生菌株間親緣關(guān)系也很近，如田林縣浪平鄉(xiāng)的菌株YE1和田林縣定安鎮(zhèn)的TY011和TY012遺傳相似系數(shù)達(dá)0.95，可能是不同地域間相互引種栽培造成。此外，本研究結(jié)果顯示23個(gè)百色云耳野生菌株的聚類結(jié)果與其耳片顏色具有較好的相關(guān)性，其中第一類菌株耳片顏色偏淺，呈淺黃褐色至黃褐色，第二類菌株的耳片顏色較深，呈黃褐色至黑褐色，由于兩個(gè)類群中均有黃褐色的菌株，且顏色深淺受栽培環(huán)境的影響較大，因此，僅用顏色指標(biāo)作為劃分百色云耳親緣關(guān)系的依據(jù)并不科學(xué)。本研究供試的百色云耳野生菌株多數(shù)來(lái)自百色田林縣，無(wú)法全面、準(zhǔn)確地反映百色云耳野生菌株的遺傳多樣性。在今后的研究中，應(yīng)擴(kuò)大采集菌株的地理范圍，收集更多的菌株，并將多種技術(shù)相結(jié)合對(duì)百色云耳野生菌株開展系統(tǒng)地研究，為其種群資源的保護(hù)和開發(fā)利用提供參考。

4 結(jié)論

百色云耳野生菌株具有豐富的遺傳多樣性，蘊(yùn)含著較多的優(yōu)異遺傳性狀，具有較大的開發(fā)利用潛力。

參考文獻(xiàn)：

邊銀丙，羅信昌，周啟. 2000. 木耳栽培菌株酯酶同工酶的酶譜多樣性研究[J]. 菌物系統(tǒng)，19（1）：91-96. [Bian Y B，Luo X C，Zhou Q. 2000. Esterase isozyme zymogram polymorphisms of cultivated strains in Auricularia auricu-lar[J]. Mycosystema，19（1）：91-96.]

陳雪鳳，韋仕巖，吳圣進(jìn)，王燦琴，吳小建. 2016a. 不同黑木耳菌株的營(yíng)養(yǎng)成分分析比較[J]. 食用菌，38（2）：72-73. [Chen X F，Wei S Y，Wu S J，Wang C Q，Wu X J. 2016a. Comparative analysis on nutritional ingredients of different strains of Auricularia auricular[J]. Edible Fungi，38（2）：72-73.]

陳雪鳳，韋仕巖，吳圣進(jìn)，王燦琴，吳小建. 2016b. 廣西野生靈芝菌株的遺傳多樣性分析[J]. 北方園藝，（7）：136-139. [Chen X F，Wei S Y，Wu S J，Wang C Q，Wu X J. 2016b. Genetic diversity analysis of wild Ganoderma strains collected from Guangxi[J]. Northern Horticulture，（7）：136-139.]

陳雪鳳，吳圣進(jìn)，龐航，王燦琴，吳小建，韋仕巖. 2018. 廣西云耳耐高溫菌株的室內(nèi)篩選[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，31（1）：131-135. [Chen X F，Wu S J，Pang H，Wang C Q，Wu X J，Wei S Y. 2018.High temperature resistance strains screening of Auricularia auricular-judae in Guangxi[J]. Southwest China Journal of Agricultural Sciences，31（1）：131-135.]

陳影，姚方杰，張友民，方明. 2014. 黑木耳種質(zhì)資源的農(nóng)藝性狀測(cè)試方法[J]. 食藥用菌，22（3）：153-154. [Chen Y，Yao F J，Zhang Y M，F(xiàn)ang M. 2014. Methods on determination of agronomic characters of Auricularia auricular germplasm resources[J]. Edible and Medicinal Mushroom，22（3）：153-154.]

戴玉成，周麗偉，楊祝良，文華安，圖力古爾，李泰輝. 2010. 中國(guó)食用菌名錄[J]. 菌物學(xué)報(bào)，29（1）：1-21. [Dai Y C，Zhou L W，Yang Z L，Wen H A，Bau T，Li T H. 2010. A revised checklist of edible fungi in China[J]. Mycosystema，29（1）：1-21.]

馮小飛，趙寧，澤桑梓，楊斌. 2016. 不同產(chǎn)地黑木耳中礦質(zhì)元素含量的測(cè)定[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，44（4）：35-38. [Feng X F，Zhao N，Ze S Z，Yang B. 2016. Determination of mine-ral elements in Auriculayia auricular from different habitats[J]. Guizhou Agricultural Sciences，44（4）：35-38.]

黃艷芳，李發(fā)盛，黃雪星，李槐，何達(dá)崇. 2012. 廣西野生黑木耳種質(zhì)資源調(diào)查[J]. 中國(guó)食用菌，36（6）：8-10. [Huang Y F，Li F S，Huang X X，Li H，He D C. 2012. Investigation on germplasm resources of wild Auricularia auricular in Guangxi[J]. Edible Fungi of China，36（6）：8-10.]

季維智，宿兵. 1999. 遺傳多樣性研究的原理與方法[M]. 杭州：浙江科學(xué)技術(shù)出版社：1-19. [Ji W Z，Su B. 1999. Principles and Methodologies of Genetic Diversity Studies[M]. Huangzhou：Zhejiang Science and Technology Press：1-19.]

李發(fā)盛，李海鷹，何達(dá)崇，李槐. 2008a. 野生云耳分離及馴化[J]. 食用菌，30（6）：20-21. [Li F S，Li H Y，He D C，Li H. 2008a. Isolation and naturalization of wild Auricularia auricular[J]. Edible Fungi，30（6）：20-21.]

李發(fā)盛，李槐，何達(dá)崇，孫文波，李海鷹，羅先群. 2008b. 廣西百色野生云耳生態(tài)環(huán)境調(diào)查[J]. 食用菌，30（5）：13-14. [Li F S，Li H，He D C，Sun W B，Li H Y，Luo X Q. 2008b. Investigation on ecology environment of wild Auricularia auricular in Baise， Guangxi[J]. Edible Fungi，30（5）：13-14.]

李發(fā)盛，莫祺暉，韋星明，李海鷹. 2009. 云耳百云6號(hào)的生物學(xué)特性試驗(yàn)[J]. 食用菌，31（3）：22-24. [Li F S，Mo Q H，Wei X M，Li H Y. 2009. Study on biological characters of Auricularia auricular strain Baiyun 6[J]. Edible Fungi，31（3）：22-24.]

馬慶芳，孔祥輝，戴肖東，韓增華，張丕奇. 2007. 東北地區(qū)黑木耳生產(chǎn)菌株栽培特性研究[J]. 食用菌學(xué)報(bào)，14（4）：59-61. [Ma Q F，Kong X H，Dai X D，Han Z H，Zhang P Q. 2007. Fruiting characteristics of Auricularia auricular strains cultivated in northeast China[J]. Acta Edulis Fungi，14（4）：59-61.]

農(nóng)訓(xùn)學(xué). 2009. 百色云耳爆雞脯[J]. 烹調(diào)知識(shí)，（9）：832-833. [Nong X X. 2009. Fried chicken jerky with Baise Auricu-laria auricular[J]. Cooking Knowledge，（9）：832-833.]

錢雪婷. 2016. 秦巴山區(qū)黑木耳種質(zhì)資源遺傳多樣性及液體發(fā)酵條件的研究[D]. 漢中：陜西理工學(xué)院. [Qian X T. 2016. Research on the genetic diversity and liquid fermentation conditions of Auricularia auricular from Qinba mountains[D]. Hanzhong：Shannxi Institute of Techno-logy.]

任建平. 2015. 黑木耳優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培技術(shù)[J]. 中國(guó)林副特產(chǎn)，136（3）：66-68. [Ren J P. 2015. Cultivation techniques of Auricularia auricular for good quality and high yield[J]. Forest By-Product and Speciality in China，136（3）：66-68.]

唐利華，郭倩，王瑞娟，邊銀丙. 2007. 中國(guó)黑木耳主要栽培菌株酯酶同工酶的研究[J]. 食用菌學(xué)報(bào)，14（4）：37-40. [Tang L H，Guo Q，Wang R J，Bian Y B. 2007. Esterase isoenzyme patterns of the major cultivated Auricularia auricular strains of China[J]. Acta Edulis Fungi，14（4）：37-40.]

陶梅. 2009. 黑龍江省黑木耳栽培菌株遺傳多樣性研究[D]. 哈爾濱：東北林業(yè)大學(xué). [Tao M. 2009. Research on the genetic diversity of Auricularia auricular cultivated strains in Heilongjiang Province[D]. Harbin：Northeast Forestry University.]

陶朋飛，許修宏. 2011. 利用ITS和SRAP分子標(biāo)記對(duì)黑龍江省野生黑木耳菌株進(jìn)行遺傳多樣性分析[J]. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，42（11）：144-149. [Tao P F，Xu X H. 2011. Genetic polymorphism study of wild Auricularia auricular isolated from Heilongjiang Province using ITS sequence analysis and SRAP marker technique[J]. Journal of Northeast Agricultural University，42（11）：144-149.]

王燦琴，熊建文，陳麗新. 2012. 五個(gè)野生云耳菌株的比較試驗(yàn)[J]. 食用菌，34（2）：21-24. [Wang C Q，Xiong J W，Chen L X. 2012. Comparative test on five wild strains of Auricularia auricular[J]. Edible Fungi，34（2）：21-24.]

韋仕巖，王燦琴，覃曉娟，吳圣進(jìn)，汪茜. 2014. 金福菇菌株的酯酶同工酶分析[J]. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，33（5）：1025-1030. [Wei S Y，Wang C Q，Qin X J，Wu S J，Wang Q.2014. Esterase isozyme analysis of Tricholoma lobayense strains[J]. Genomics and Applied Biology，33（5）：1025-1030.]

謝毅棟. 2009. 廣西食用菌發(fā)展歷程及對(duì)策[J]. 安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，15（21）：86-88. [Xie Y D. 2009. Development history and strategy on mushroom industry in Guangxi[J]. Anhui Agricultural Science Bulletin，15（21）：86-88.]

翟玉. 2016. 黑木耳野生種質(zhì)資源遺傳分析與優(yōu)良菌株新基質(zhì)開發(fā)研究[D]. 長(zhǎng)春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué). [Zhai Y. 2016. Study on the genetic analysis uncultivated Auricularia heimuer germplasm resources and the development of good strains and new matrix[D]. Changchun：Jilin Agricultural University.]

中國(guó)食用菌協(xié)會(huì). 2013. 對(duì)2012年度食用菌統(tǒng)計(jì)結(jié)果的分析[J]. 食藥用菌，21（6）：363. [Mushroom Associate of China. 2013. Analysis on statistic data of mushroom in 2012[J]. Edible and Medicinal Mushrooms，21（6）：363.]

Tang L H，Xiao Y，Li L，Guo Q，Bian Y B. 2010. Analysis of genetic diversity among Chinese Auricularia auricular cultivars using combined ISSR and SPAP marker[J]. Cu-rrent Microbiology，61（2）：132-140.

（責(zé)任編輯 陳 燕）