阿利維A酸原料藥的微粉化工藝研究

楊玉金 唐舒棠 王紹輝

中圖分類號(hào) R943 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）07-0914-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.07.12

摘 要 目的：篩選阿利維A酸原料藥的微粉化工藝。方法：以原料藥粉碎后的粒徑分布特征值[d（0.9）]和雜質(zhì)A含量為指標(biāo)，篩選阿利維A酸原料藥的粉碎方式（萬能粉碎機(jī)、球磨機(jī)、氣流粉碎機(jī)）、粉碎氣源（壓縮空氣、高壓氮?dú)猓?、粉碎壓力?.2、0.4、0.6 MPa），并進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果：最優(yōu)工藝為采用氣流粉碎機(jī)以高壓氮?dú)庾鳛闅庠丛?.4 MPa下粉碎；驗(yàn)證試驗(yàn)中3批原料藥粉碎后的粒徑分別為8.57、8.55、8.54 μm（均小于10 μm，RSD=0.15%，n=3），雜質(zhì)A的含量與未粉碎前比較未見增加（均為0.07%）。結(jié)論：篩選的阿利維A酸原料藥的微粉化工藝操作可行、質(zhì)量穩(wěn)定。

關(guān)鍵詞 阿利維A酸；微粉化工藝；粉碎工藝；d（0.9）；雜質(zhì)A

ABSTRACT OBJECTIVE： To screen the optimal micronization technology of Alitretinoin crude drug. METHODS： Using characteristic value of particle size distribution [d（0.9）] and the content of impurity A of crude drug after crushed as indexes， crushing method （universal pulverizer， ball crusher， airslide disintegrating mill）， crushing gas source （compressed air， high pressure nitrogen） and crushing pressure （0.2， 0.4， 0.6 MPa） of Alitretinoin crude drug were screened， and validation test was also conducted. RESULTS： The optimal technology was as follows as airslide disintegrating mill， high pressure nitrogen as gas source， at 0.4 MPa. In validation test， particle sizes for 3 batches of crude drug after crushed were 8.57， 8.55， 8.54 μm （<10 μm，RSD=0.15%， n=3）. The content of impurity A was not increased compared with before crushed （0.07%）. CONCLUSIONS： Screened micronization technology of Alitretinoin crude drug is feasible and stable in quality.

KEYWORDS Alitretinoin； Micronization technology； Crushing technology； d（0.9）； Impurity A

阿利維A酸（Alitretinoin）是一種內(nèi)源性維甲酸，維甲酸類化合物包含了維生素A系列的代謝產(chǎn)物及其合成類似物。臨床研究表明，維甲酸能調(diào)節(jié)多種代謝，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和運(yùn)轉(zhuǎn)，如細(xì)胞分化、增殖和凋亡[1]。阿利維A酸被證實(shí)可以用于3種惡性腫瘤即神經(jīng)母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤和滑膜肉瘤以及慢性手部濕疹的治療[1-4]。1999年，美國(guó)FDA批準(zhǔn)0.1%阿利維A酸凝膠劑用于治療卡波濟(jì)肉瘤[5]；2009年11月，加拿大批準(zhǔn)阿利維A酸軟膠囊上市，用于局部外用強(qiáng)效糖皮質(zhì)激素?zé)o效的慢性手部濕疹患者。

藥物在人體內(nèi)的吸收速度常常由溶解性決定，固體制劑中的藥物在被吸收前，必須經(jīng)過崩解和溶解然后轉(zhuǎn)為溶液的過程，如果藥物不易從制劑中釋放出來或藥物的溶解速度極為緩慢，則該制劑中藥物的吸收速度或吸收程度均達(dá)不到被人體吸收而發(fā)揮藥效的要求；另一方面，某些藥理作用劇烈、安全指數(shù)小、吸收迅速的藥物如果溶出速度太快，可能產(chǎn)生明顯的不良反應(yīng)，且維持藥效的時(shí)間也將縮短。在這種情況下，必須對(duì)制劑中藥物的溶出速率進(jìn)行控制[6-9]。原料藥粒徑是影響制劑溶出速率的關(guān)鍵質(zhì)量屬性。研究表明，阿利維A酸的生物藥劑學(xué)分類為Ⅳ類，其在水中的溶解度極低[10]。因此，阿利維A酸釋放過快或者過慢均不利于其在體內(nèi)的吸收，其溶解行為對(duì)生物利用度有極大的影響。為了能夠有效控制阿利維A酸制劑的釋放速度，將其控制在合理范圍內(nèi)，必須對(duì)阿利維A酸的粒徑分布進(jìn)行有效控制。由于阿利維A酸為共軛多烯類化合物，在空氣中極易吸潮氧化，在制劑研究中對(duì)其開展粒徑控制的文獻(xiàn)報(bào)道較少，筆者對(duì)其進(jìn)行了相關(guān)的粉碎工藝研究，以期為制備可供制劑生產(chǎn)的粒度合格的阿利維A酸原料藥提供參考，同時(shí)為這類原料藥的粒度控制方法的建立提供參考。

1 材料

1.1 儀器

YQ100-1氣流粉碎系統(tǒng)（上海賽山粉體機(jī)械制造有限公司）；Malvern Mastersizer 2000激光粒度分析儀和Hydro 2000 MU濕法進(jìn)樣器（英國(guó)馬爾文儀器有限公司）；LC2010A高效液相色譜儀（日本島津公司）。

1.2 藥品與試劑

阿利維A酸對(duì)照品/原料藥（重慶華邦勝凱制藥有限公司，批號(hào)：ALI-160301，純度：99.90%，雜質(zhì)A：0.07%）；阿利維A酸雜質(zhì)A（阿利維A酸氧化雜質(zhì)，批號(hào)：ALI-A-151201，純度：98.90%）、雜質(zhì)B（維A酸，批號(hào)：TRA-160204，純度：99.78%）、雜質(zhì)C（異維A酸，批號(hào)：ISO-160101，純度：99.85%）、雜質(zhì)D（11-cis-維A酸，批號(hào)：ALI-D-160201，純度：98.67%）對(duì)照品均來源于重慶華邦制藥有限公司；聚山梨酯80、甲醇、冰乙酸、正己烷、十二烷基磺酸鈉等均為分析純，均來源于國(guó)藥化學(xué)試劑有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 粒度測(cè)定方法

2.1.1 進(jìn)樣方式和進(jìn)樣器的選擇

參考2015年版《中國(guó)藥典》（四部）方法[11]，分別選用干法進(jìn)樣器和濕法進(jìn)樣器對(duì)微粉后的成品進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，濕法進(jìn)樣器下成品的粒徑測(cè)定結(jié)果與顯微鏡下標(biāo)尺測(cè)量結(jié)果更為接近，由于阿利維A酸原料藥的粒徑分布特征值[d（0.9），代表占總粒子量90%的粒子對(duì)應(yīng)的粒徑]均小于20 μm，干法進(jìn)樣器的測(cè)定結(jié)果受到本品分散效率的影響，與顯微鏡下的觀察結(jié)果差異較大，故選擇濕法進(jìn)樣器進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)中本品粒度的測(cè)定。

2.1.2 測(cè)定條件的確定

參考2015年版《中國(guó)藥典》（四部）方法[11]，在前期試驗(yàn)中，對(duì)測(cè)定方法中各條件[包括：分散介質(zhì)（水、己烷）、分散劑（0.2%聚山梨酯80水溶液、0.1%十二烷基磺酸鈉水溶液）、吸光度（0.01、0.005、0.02）、攪拌速度（800、 1 000、1 200、1 500、1 600、1 900 r/min）、平衡時(shí)間（0.5、1、2、3、4、5 min）、測(cè)量時(shí)間（2、5、10、20 s）]以及供試品溶液制備方法等進(jìn)行篩選，確定最優(yōu)的測(cè)定條件如下。

（1）分散介質(zhì)：水；分散劑：0.2%聚山梨酯80水溶液；成品折射率：1.678；成品吸光度：0.01；分散介質(zhì)折射率：1.33；攪拌速度：1 500 r/min ；平衡時(shí)間：1 min；測(cè)量時(shí)間：10 s；遮光度范圍：5%～15%；分析模型：通用模型；結(jié)果類型：體積分布。

（2）供試品溶液制備：稱取微粉阿利維A酸樣品約30 mg，置于50 mL燒杯中，加30 mL分散劑，超聲（頻率：40 kHz，功率：120 W）并攪拌25 min，即得到分散均勻的供試品溶液。

2.1.3 測(cè)定方法

在濕法進(jìn)樣器中加入800 mL分散介質(zhì)，系統(tǒng)對(duì)光及背景扣除完成后，加入供試品溶液，使遮光比在5%～15%，平衡1 min后開始測(cè)定，重復(fù)測(cè)定5次，記錄d（0.9），取平均值。

2.1.4 測(cè)定方法驗(yàn)證結(jié)果

參照《中國(guó)藥典》要求[11]對(duì)上述粒度測(cè)定方法進(jìn)行系統(tǒng)方法驗(yàn)證。經(jīng)方法驗(yàn)證結(jié)果表明，采用此方法測(cè)定本品粒度，滿足粒徑測(cè)定結(jié)果。平行6次測(cè)定結(jié)果的RSD[d（0.1）]≤10%，RSD[d（0.5）]≤6%，RSD[d（0.9）]≤10%，符合2015 年版《中國(guó)藥典》（四部）通則粒度方法中第三法[11]的相關(guān)規(guī)定。

2.2 有關(guān)物質(zhì)含量測(cè)定方法

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Sphorisorb ODS1（150 mm×4.6 mm，3 ?m）；流動(dòng)相：甲醇-水-冰乙酸=（700 ∶ 294 ∶ 6，V/V/V）；采用紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：350 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2.2 溶液制備

（1）供試品溶液：稱取待測(cè)樣品20 mg，置于20 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（2）自身對(duì)照溶液：精密吸取供試品溶液1.0 mL，置于100 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

（3）雜質(zhì)B對(duì)照品貯備液：稱取雜質(zhì)B對(duì)照品20 mg，置于20 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（4）阿利維A酸對(duì)照品貯備液：稱取阿利維A酸對(duì)照品20 mg，精密稱定，置于20 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（5）系統(tǒng)適用性溶液：精密移取阿利維A酸對(duì)照品貯備液1.0 mL和雜質(zhì)B對(duì)照品貯備液0.5 mL，置于同一100 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（6）雜質(zhì)定位溶液：分別稱取雜質(zhì)A、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D對(duì)照品20 mg，精密稱定，分別置于3個(gè)不同的20 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為雜質(zhì)A、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D對(duì)照品溶液。移取雜質(zhì)A對(duì)照品溶液0.15 mL，雜質(zhì)C、雜質(zhì)D對(duì)照品溶液各0.1 mL，雜質(zhì)B對(duì)照品貯備液0.5 mL，置于同一100 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 測(cè)定方法

（1）取雜質(zhì)定位溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖，各雜質(zhì)出峰順序分別為雜質(zhì)A、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)B。

（2）取系統(tǒng)適用性溶液進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，阿利維A酸與雜質(zhì)B峰的峰面積RSD均未超過2.0%（如超過，本次試驗(yàn)結(jié)果不可用）。

（3）取供試品溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖（供試品溶液記錄色譜圖中如有與雜質(zhì)定位溶液記錄色譜圖中雜質(zhì)A、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)B保留時(shí)間一致的色譜峰，則判定供試品溶液中的雜質(zhì)為雜質(zhì)A、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)B）。

（4）取自身對(duì)照溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖，計(jì)算雜質(zhì)含量。

①雜質(zhì)含量計(jì)算公式如下：

外標(biāo)法計(jì)算雜質(zhì)B含量公式：雜質(zhì)B（%）=（A樣×C對(duì)）/（C樣×A對(duì)）×Ps×100%。式中：A樣為供試品溶液中雜質(zhì)B峰的峰面積；C樣為供試品溶液的質(zhì)量濃度（?g/mL）；A對(duì)為雜質(zhì)B對(duì)照品溶液中主峰的峰面積；C對(duì)為雜質(zhì)B對(duì)照品溶液的質(zhì)量濃度（?g/mL）；Ps為雜質(zhì)B對(duì)照品的純度（%）。

②其余雜質(zhì)含量計(jì)算公式：X（%）=Ax/A自×RRF×100%。式中，Ax為供試品溶液中其余雜質(zhì)（除雜質(zhì)B外）的峰面積；A自為自身對(duì)照溶液中阿利維A酸主峰的峰面積；RRF為校正因子（雜質(zhì)A的相對(duì)校正因子為1.217 1，雜質(zhì)C的相對(duì)校正因子為0.963 0，雜質(zhì)D的相對(duì)校正因子為2.179 0，未知雜質(zhì)按1計(jì)算）。

③總雜質(zhì)含量計(jì)算公式：總雜質(zhì)=已知雜質(zhì)總量（%）+未知雜質(zhì)總量（%）

2.3 原料藥粉碎方法篩選

取適量純度為99.87%的阿利維A酸原料藥，分別用萬能粉碎機(jī)（轉(zhuǎn)速：2 500 r/min）、球磨機(jī)（轉(zhuǎn)速：2 500 r/min）以及氣流粉碎機(jī)（高壓氮?dú)猓?.6 MPa粉碎壓力）進(jìn)行粉碎試驗(yàn)。按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行粒度測(cè)定。按“2.2”項(xiàng)下方法用色譜法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)測(cè)定以及純度[純度（%）=100%-總雜質(zhì)含量]計(jì)算，結(jié)果見表1。

從表1可以看出，阿利維A酸采用萬能粉碎機(jī)和球磨機(jī)進(jìn)行粉碎后d（0.9）均大于10 μm，而且在粉碎過程中雜質(zhì)A分別由0.07%增加到了0.56%和0.42%，超出了制劑質(zhì)量要求。采用氣流粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，d（0.9）均小于10 μm，雜質(zhì)增加不明顯。因此選用氣流粉碎機(jī)對(duì)阿利維A酸進(jìn)行粉碎。

2.4 氣流粉碎機(jī)的氣源篩選

在同一氣流粉碎機(jī)上分別用壓縮空氣和高壓氮?dú)庠诜鬯閴毫?.6 MPa下對(duì)阿利維A酸進(jìn)行粉碎，檢測(cè)樣品，結(jié)果見表2。

從表2可知，采用壓縮空氣作為氣源，阿利維A酸粉碎過程中雜質(zhì)A由0.07%增加到0.22%，增加明顯；采用高壓氮?dú)庾鳛闅庠?，阿利維A酸粉碎過程中雜質(zhì)不變，無增加趨勢(shì)。

2.5 氣流粉碎機(jī)粉碎壓力篩選

在同一氣流粉碎機(jī)上，采用高壓氮?dú)庾鳛闅庠?，采用不同的逐步降低的粉碎壓力?duì)阿利維A酸進(jìn)行氣流粉碎，檢測(cè)樣品，結(jié)果見表3。

從表3可以看出，當(dāng)粉碎壓力分別為0.2、0.4、0.6 MPa時(shí)，粉碎得到的阿利維A酸粒徑分布d（0.9）分別為11.21、8.52、7.96 μm，因此粉碎壓力為0.4、0.6 MPa時(shí)可以滿足粉碎后d（0.9）小于10 μm的要求，而且粉碎過程中雜質(zhì)不增加，純度不下降。

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn)

在同一氣流粉碎機(jī)上，采用高壓氮?dú)庾鳛闅庠?，粉碎壓力?.4 MPa，進(jìn)行3.0 kg阿利維A酸原料藥的粉碎，3批樣品測(cè)定結(jié)果見表4。

從表4可以看出，當(dāng)采用高壓氮?dú)鉃闅庠?、粉碎壓力?.4 MPa時(shí)粉碎得到的阿利維A酸d（0.9）的均值為8.55 μm，3批粒度分布的RSD為0.15%，粉碎過程中雜質(zhì)不增加，純度不下降。由此證明此工藝條件穩(wěn)定可靠。

3 討論

為解決對(duì)空氣敏感的阿利維A酸原料藥的粒度分布控制的問題，筆者采用了3種不同粉碎方法，并對(duì)篩選得到的最優(yōu)方法氣流粉碎法的氣源和粉碎壓力進(jìn)行了篩選，以粉碎后原料藥的粒度分布、雜質(zhì)增長(zhǎng)情況和原料藥的純度為指標(biāo)考察了3種粉碎方法優(yōu)劣。以高壓氮?dú)鉃闅庠?，在惰性氣體的保護(hù)下，阿利維A酸原料藥粉碎過程中不與氧氣接觸，避免了氧化雜質(zhì)的增大；在粉碎壓力為0.4 MPa時(shí)，氣流粉碎機(jī)磨盤中物料對(duì)撞力度足以將阿利維A酸原料藥顆粒粉碎至d（0.9）為10 μm以下。最終確定了工業(yè)化粉碎阿利維A酸原料藥的方法。提供了在空氣中對(duì)易氧化的化合物批量粉碎的新方法。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] REDFERN CPF，LOVAT PE，MALCOLM AJ，et al. Gene expression and neuroblastoma cell differentiation in response to retinoic acid：differential effects of 9-cis and all-trans retinoic acid[J]. Eur J Cancer，1995，31（4）：486-494.

[ 2 ] BOLLAG W，OTT F. Successful treatment of chronic hand eczema with oral 9-cis-retinoic acid[J]. Dermatology，1999，199（4）：308-312.

[ 3 ] KARLY P，GARNOCK J，CAROLINE MP. Alitretinoin in severe chronic hand eczema[J]. Drugs，2009，69（12）：1625- 1634.

[ 4 ] BLAIR HA，SCOTT LJ. Alitretinoin：a review in severe chronic hand eczema[J]. Drugs，2016，76（13）：1271- 1279.

[ 5 ] CALEB C，JASON M， NOAH S. Alitretinoin：a comprehensive review[J]. Expert Opin Investig Drugs，2008，17（3）：437-443.

[ 6 ] BROUWERS J，BREWSTER ME，AUGUSTIJNS P. Supersaturating drug delivery systems：the answer to solubility-limited oral bioavailability？ [J]. J Pharma Sci，2009，98（9）：2549-2572.

[ 7 ] 王燕，牟聰，劉金鳳，等.替格瑞洛原料藥粒徑對(duì)其片劑體外溶出行為的影響[J].中國(guó)藥房，2017，28（1）：119-121.

[ 8 ] 鐘瀟驍，曹雯，楊必勇，等.布地奈德鼻噴霧劑粒度分布的測(cè)定及一致性分析[J].中國(guó)藥房，2017，28（18）：2560- 2563.

[ 9 ] 張慶剛，程剛.鹽酸厄洛替尼不同粒徑分布對(duì)其片劑溶出行為的影響[J].食品與藥品，2015，17（2）：83-86.

[10] SAKET B，RITU G，RAVINDRA PS，et al. Effects of solubility and dissolution characteristics on oral bioavailability of alitretinoin[J]. International Journal of Pharmaceutical Research & Allied Sciences，2016，5（1）：40-49.

[11] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：四部[S]. 2015 年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：132-134.

（收稿日期：2017-10-09 修回日期：2017-11-16）

（編輯：劉 萍）