海南省漢族人群HLA—B*5801基因多態(tài)性與別嘌醇所致不良反應(yīng)的相關(guān)性研究

云雄 吳丹娜 韓方璇 黃春新 彭文興

中圖分類號 Q343.1+5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）09-1256-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.09.25

摘 要 目的：探討海南省漢族人群HLA-B*5801基因多態(tài)性與別嘌醇所致不良反應(yīng)的相關(guān)性。方法：對海南省人民醫(yī)院2015年9月-2017年9月住院的149例使用別嘌醇的患者采用原位雜交熒光染色分析技術(shù)檢測其HLA-B*5801等位基因，根據(jù)其不良反應(yīng)情況分為耐受組和不良反應(yīng)組，應(yīng)用Woolfs公式計(jì)算比值比（OR），分析HLA-B*5801等位基因與別嘌醇不良反應(yīng)發(fā)生的相關(guān)性。結(jié)果：149例患者中耐受組133例，其中17.29%（23/133）攜帶HLA-B*5801等位基因；不良反應(yīng)組16例，其中93.75%（15/16）攜帶HLA-B*5801等位基因。發(fā)生不良反應(yīng)的16例患者中，13例為皮膚及其附件損傷、1例為全身性損害，1例為胃腸系統(tǒng)損害，1例為中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)損害。攜帶HLA-B*5801等位基因患者發(fā)生不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)顯著高于不攜帶HLA-B*5801等位基因患者（OR：71.74，95%CI：9.02～570.55，P<0.000），其中發(fā)生皮膚及其附件損傷與HLA-B*5801等位基因也呈強(qiáng)相關(guān)性（OR：57.39，95%CI：7.11～463.50，P<0.000）。結(jié)論：海南省漢族人群HLA-B*5801等位基因與別嘌醇所致不良反應(yīng)具有強(qiáng)相關(guān)性，建議本地區(qū)漢族患者開始服用別嘌醇前先檢測HLA-B*5801等位基因，有助于減少別嘌醇所致不良反應(yīng)的發(fā)生。

關(guān)鍵詞 HLA-B*5801；別嘌醇；基因多態(tài)性；不良反應(yīng)；海南??；漢族

ABSTRACT OBJECTIVE： To investigate the relationship between HLA-B*5801 gene polymorphism and allopurinol-induced ADR in the Han population of Hainan Province. METHODS： The in-situ hybridization fluorescence staining analysis technique was used to detect HLA-B*5801 allele of 149 inpatients receiving allopurinol in Hainan Provincial Peoples Hospital during Sept. 2015-Sept. 2017. They were divided into tolerance group and ADR group according to ADR. Woolfs formula was used to calculate OR. The correlation of HLA-B*5801 allele with the occurrence of allopurinol-induced ADR was analyzed. RESULTS： Of 149 patients， there were 133 cases in tolerance group， among which 17.29% （23/133） carried HLA-B*5801 allele. There were 16 cases in ADR group， among which 93.75%（15/16） carried HLA-B*5801 allele. Among 16 ADR patients， 13 patients suffered from lesion of skin and its appendents； 1 patient suffered from systemic damage； 1 patient suffered from gastrointestinal systemic damage； 1 patient suffered from central and peripheral nervous system damage. The risk of ADR in patients with HLA-B*5801 allele was significantly higher than patients without HLA-B*5801 allele（OR：71.74，95%CI：9.02-570.55，P<0.000）. The lesion of skin and its appendents was strongly associated with HLA-B*5801 allele （OR：57.39， 95%CI： 7.11-463.50， P<0.000）. CONCLUSIONS： HLA-B*5801 allele is strongly associated with allopurinol-induced ADR. It is suggested that HLA-B*5801 allele of Han patients should be detected before taking allopurinol， which helps to reduce the incidence of allopurinol-induced ADR.

KEYWORDS HLA-B* 5801； Allopurinol； Gene polymorphism； ADR； Hainan province； Han population

海南由于特色的飲食結(jié)構(gòu)，如常食海鮮等富含嘌呤類食物，高血脂、痛風(fēng)等慢性疾病發(fā)病率日趨上漲[1]，近些年已有不少研究[2-3]報(bào)道，別嘌醇是治療痛風(fēng)的主要藥物，但其易引發(fā)嚴(yán)重不良反應(yīng)，尤其是嚴(yán)重的皮膚反應(yīng)，包括重癥滲出性多形紅斑型藥疹（Stevens-Johnson syndrome，SJS）和中毒性表皮壞死松解癥（Toxic epidermal necrolysis，TEN），發(fā)生率約為5%，約占藥疹病例的11.94%，病死率可達(dá)30%～50%[2]，已引起人們越來越多的關(guān)注。已有研究顯示，中國漢族人群中HLA-B*5801等位基因陽性者發(fā)生別嘌醇所致SJS或TEN的風(fēng)險(xiǎn)顯著高于HLA-B*5801等位基因陰性者[3]，但目前針對海南省漢族人群HLA-B*5801等位基因多態(tài)性與別嘌醇所致不良反應(yīng)的相關(guān)性研究報(bào)道很少。故本研究主要收集海南省行HLA-B*5801 等位基因檢測的漢族人群，根據(jù)其使用別嘌醇后不良反應(yīng)的發(fā)生情況，分析該地區(qū)人群HLA-B*5801等位基因多態(tài)性與別嘌醇所致不良反應(yīng)的相關(guān)性。

1 資料來源與方法

1.1 臨床資料

收集海南省人民醫(yī)院2015年9月-2017年9月具有別嘌醇使用指征的海南省漢族人群資料及其服藥后3個月內(nèi)的不良反應(yīng)發(fā)生情況。共收集患者149例，主要來源于腎病風(fēng)濕科129例、醫(yī)療保健科20例，根據(jù)是否發(fā)生不良反應(yīng)分為使用別嘌醇后未發(fā)生不良反應(yīng)的耐受組和使用別嘌醇后發(fā)生不良反應(yīng)的不良反應(yīng)組。耐受組共133例患者，平均年齡（51.65±19.9）歲，男性89例，女性44例；不良反應(yīng)組共16例患者，平均年齡（49.25±17.56）歲，男性10例，女性6例，兩組患者年齡和性別分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 基因檢測

利用原位雜交熒光染色分析技術(shù)檢測患者基因型。具體操作：（1）氯化銨溶液與滅菌注射用水按照1 ∶ 9比例稀釋作為預(yù)處理液，對用乙二胺四乙酸鈉抗凝采血真空管采集的臨床全血樣本進(jìn)行編號，上下顛倒混勻。（2）取對應(yīng)編號的1.5 mL離心管加入1.2 mL預(yù)處理液與150 μL混勻的臨床全血樣本上下顛倒10次混勻，然后放于室溫環(huán)境靜置5 min。（3）將樣本放入離心機(jī)中，700×g離心5 min。（4）去上清液后離心管底部可見約2 mm×2 mm的白細(xì)胞沉淀，若團(tuán)塊過小須重復(fù)（2）～（4）步驟。（5）向離心管中加入50 μL PHARM-GENE01SNP分析保存液（北京華夏時(shí)代基因科技發(fā)展有限公司）反復(fù)吹打混勻，放于室溫環(huán)境靜置30 min，得到白細(xì)胞保存液。（6）取1.5 μL白細(xì)胞保存液加入HLA-B*5801 PHARM- GENE200SNP分析樣品處理試劑（北京華夏時(shí)代基因科技發(fā)展有限公司）后，置于TL998A熒光檢測儀中。（7）采用原位雜交熒光染色分析系統(tǒng)自動判讀熒光信號值獲取熒光曲線圖進(jìn)行HLA-B*5801基因分型并作陽性質(zhì)控，當(dāng)兩條熒光信號中有一條信號高于內(nèi)參信號，則此位點(diǎn)為陽性，因此“+/-”和“+/+”的結(jié)果均表示HLA-B*5801等位基因呈陽性，即攜帶HLA-B*5801等位基因，而“-/-”表示HLA-B*5801等位基因呈陰性，即不攜帶HLA-B*5801等位基因。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，基因型頻率采用頻率計(jì)數(shù)法計(jì)算，“-/-”“-/+”“+/+”3種基因型的個體數(shù)分別為n1、n2、n3，其基因型頻率分別為n1/（n1+n2+n3）、n2/（n1+n2+n3）、n3/（n1+n2+n3），陰性基因等位頻率p=（2n1+n2）/（n1+n2+n3），陽性基因等位頻率q=（2n2+n3）/（n1+n2+n3），“-/-”“-/+”“+/+”3種基因型理論基因型頻率分別為p2、2pq、q2。將基因頻率進(jìn)行Hardy-Weinberg（簡稱H-W）遺傳平衡檢驗(yàn)[4]。相關(guān)性分析采用卡方檢驗(yàn)和Fisher精確檢驗(yàn)，應(yīng)用Woolfs公式計(jì)算比值比（OR）及其95%置信區(qū)間（CI），以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HLA-B*5801 基因分布

149例患者中38例（占總?cè)藬?shù)的25.50%）攜帶HLA-B*5801等位基因，包括耐受組23例（占耐受組的17.29%）和不良反應(yīng)組15例（占不良反應(yīng)組的93.75%）。H-W遺傳平衡檢驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)際基因型分布與理論基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.495，P=0.078 1），符合H-W平衡定律，表明具有該地區(qū)人群代表性。HLA-B*5801 基因分布情況見表1。

2.2 不良反應(yīng)發(fā)生情況

不良反應(yīng)組16 例患者使用別嘌醇后出現(xiàn)不同程度的不良反應(yīng)，其中15例患者攜帶HLA-B*5801等位基因。16例患者出現(xiàn)的不良反應(yīng)臨床癥狀主要以皮膚及其附件損傷為主，共13例，占不良反應(yīng)組的81.25%，其中有3例患者（占不良反應(yīng)組的18.75%）表現(xiàn)為嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)，且檢測基因型均為強(qiáng)陽性（“+/+”），經(jīng)Fisher精確檢驗(yàn)顯示，嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)患者與其他不良反應(yīng)患者比較，P<0.05，顯示使用別嘌醇后引起嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)與引起其他不良反應(yīng)的基因分布具有顯著差異，可見HLA-B*5801等位基因強(qiáng)陽性為使用別嘌醇后引起嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)的高危因素?；颊呤褂脛e嘌醇后出現(xiàn)嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)的時(shí)間為第5～30天不等，其中有1例患者用藥15 d后出現(xiàn)的嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)，臨床表現(xiàn)為四肢出現(xiàn)皮疹，停藥后皮疹消退，繼續(xù)服用別嘌醇后第2天面部出現(xiàn)紅斑，伴有發(fā)熱，遂自行口服“快克”治療，紅斑迅速增多，遍布全身，伴有瘙癢，全身皮膚可見大量大小不一片狀紅斑，部分紅斑上分布有大皰，皰壁薄易破，皰液清，尼氏征陽性；住院期間給予注射用甲潑尼龍琥珀酸鈉、鹽酸苯海拉明注射液及枸地氯雷他定片等治療，15 d后皮疹好轉(zhuǎn)，病情穩(wěn)定出院。其他發(fā)生不良反應(yīng)的患者癥狀較輕，預(yù)防良好。別嘌醇所致不良反應(yīng)的主要臨床癥狀見表2。

2.3 HLA-B*5801等位基因與使用別嘌醇所致不良反應(yīng)的相關(guān)性

149例患者中耐受組133例，其中17.29%（23/133）攜帶HLA-B*5801等位基因；不良反應(yīng)組16例，其中93.75%（15/16）攜帶HLA-B*5801等位基因。發(fā)生不良反應(yīng)的16例患者中以皮膚及其附件損傷為主。攜帶HLA-B*5801等位基因患者發(fā)生不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)顯著高于不攜帶HLA-B*5801等位基因患者（OR：71.74，95%CI：9.02～570.55，P<0.000），其中發(fā)生皮膚及其附件損傷與HLA-B*5801等位基因也呈強(qiáng)相關(guān)性（OR：57.39，95%CI：7.11～463.50，P<0.000）。

3 討論

3.1 別嘌醇不良反應(yīng)與基因相關(guān)性

在過去十年中，高尿酸血癥、痛風(fēng)以及降尿酸治療藥物遺傳學(xué)的遺傳基礎(chǔ)研究取得了重大進(jìn)展，主要發(fā)現(xiàn)包括HLA-B*5801基因檢測在降低高危人群別嘌醇所致不良反應(yīng)發(fā)生率方面的影響[5]。別嘌醇是黃嘌呤氧化酶（Xanthine oxidase，XO）的抑制劑，主要機(jī)制是抑制尿酸合成發(fā)揮降尿酸作用，其自1963年上市以來，是臨床治療痛風(fēng)一線降尿酸藥物，人們對別嘌醇的最大安全性關(guān)注是有0.1%～0.4%的嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)[5]，也稱為別嘌醇超敏反應(yīng)綜合征。藥物基因組研究已經(jīng)證明，攜帶HLA-B*5801等位基因患者使用別嘌醇治療，具有較高發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)SJS/TEN的風(fēng)險(xiǎn)[5-10]。半抗原假說[11]認(rèn)為其發(fā)生的機(jī)制可能是藥物修飾抗原與主要組織相容性復(fù)合體（Major histocompatibility complex，MHC）、T細(xì)胞受體（T cell antigen receptor，TCR）相互作用有關(guān)，HLA-B分子將內(nèi)源或加工的外源抗原呈遞給T細(xì)胞，從而引發(fā)適應(yīng)性免疫應(yīng)答。被藥物激活的藥物特異性T細(xì)胞需要人類白細(xì)胞抗原（Human leukocyte antigen，HLA）限制。效應(yīng)T細(xì)胞的T細(xì)胞受體被認(rèn)為識別由抗原呈遞細(xì)胞上的特異性HLA-B分子結(jié)合的藥物-肽復(fù)合物，導(dǎo)致免疫介質(zhì)的釋放并導(dǎo)致嚴(yán)重的適應(yīng)性免疫反應(yīng)藥物不良反應(yīng)。據(jù)報(bào)道，使用別嘌醇所致的SJS/TEN與HLA-B*5801等位基因基于當(dāng)前數(shù)據(jù)顯示具有最強(qiáng)關(guān)聯(lián)，相對風(fēng)險(xiǎn)數(shù)OR高達(dá)580[9-10]。

3.2 HLA-B*5801基因多態(tài)性

已發(fā)現(xiàn)HLA-B*5801基因攜帶率因種族/民族和地理區(qū)域而異。在美國，高加索人和西班牙裔人群的HLA-B*5801基因攜帶率相對較低（0.1%），而非裔美國人（3.8%）和亞洲人（7.4%）的HLA-B*5801基因攜帶率較高[12-13]。美國風(fēng)濕病學(xué)（American college of rheumatology，ACR）指南推薦在韓國、泰國等國人群和具有漢族血統(tǒng)等人群使用別嘌醇之前應(yīng)進(jìn)行HLA-B*5801基因檢測[12]。國際組織相容性工作組報(bào)告顯示，漢族健康人群HLA-B*5801基因的攜帶率為10%左右，吳國光等[14]報(bào)道中國南方地區(qū)漢族人群HLA-B*5801基因的攜帶率為8.35%，北方地區(qū)漢族人群HLA-B*5801基因的攜帶率為5.53%。本研究結(jié)果顯示，海南省漢族人群中使用別嘌醇治療的患者HLA-B*5801基因的攜帶率高達(dá)25.50%，這可能與海南地域環(huán)境有關(guān)。

3.3 檢測HLA-B*5801基因分型的必要性

攜帶HLA-B*5801是別嘌醇嚴(yán)重超敏反應(yīng)綜合征的主要危險(xiǎn)因素，監(jiān)測該基因是安全用藥的重大進(jìn)步。SJS/TEN嚴(yán)重影響患者的健康[15]。筆者還對我院SJS/TEN患者的HLA-B*5801基因進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)我院SJS/TEN患者的HLA-B*5801等位基因攜帶率為100%，顯示了強(qiáng)關(guān)聯(lián)性，因此監(jiān)測該基因能為臨床藥物的選擇提供參考意見，避免攜帶HLA-B*5801等位基因的患者使用別嘌醇進(jìn)行痛風(fēng)的治療，是降低危及生命的不良反應(yīng)發(fā)生率的有效措施。

本研究初步探討了海南省漢族人群中HLA-B*5801基因多態(tài)性與使用別嘌醇所致不良反應(yīng)的相關(guān)性，結(jié)果顯示，海南省漢族人群HLA-B*5801等位基因與別嘌醇所致不良反應(yīng)具有強(qiáng)相關(guān)性，建議該地區(qū)漢族患者開始使用別嘌醇前先檢測HLA-B*5801等位基因，有助于減少別嘌醇所致不良反應(yīng)的發(fā)生。本研究組未來將收集海南省獨(dú)有的少數(shù)民族如黎族等人群的基因數(shù)據(jù)進(jìn)行研究，以期評估該地區(qū)患有高尿酸血癥或痛風(fēng)的少數(shù)民族患者的疾病預(yù)后，以提高其用藥安全。

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（收稿日期：2017-11-06 修回日期：2018-02-11）

（編輯：鄒麗娟）