一個遺傳性對稱性色素異常癥家系A(chǔ)DAR1基因突變分析

陳源昊琪 焦亞寧 楊彪 董輝 吳昊 喻楠 葛新紅

750004銀川，寧夏醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院（陳源昊琪），總醫(yī)院皮膚科（焦亞寧、楊彪、董輝、喻楠、葛新紅）；四川省都江堰市醫(yī)療中心（吳昊）

遺傳性對稱性色素異常癥（dyschromatosis symmetrica hereditaria，DSH，MIM127400）是一種少見的單基因遺傳性皮膚病，呈常染色體顯性遺傳，有較高的外顯率和較低的發(fā)病率［1］。2003年Miyamura等［2］利用基因連鎖分析和一代測序技術(shù)將其致病基因定位于常染色體1q11?1q21上的ADAR1基因。我們應(yīng)用Sanger測序技術(shù)檢測一DSH家系A(chǔ)DAR1基因突變情況。

一、臨床資料

先證者男，8歲。2歲時雙手背、足背開始出現(xiàn)粟粒大小散在色素沉著斑及色素減退斑，不相互融合，對稱分布，無自覺癥狀，皮損隨年齡增加而逐漸增多、擴(kuò)大；5歲時顏面出現(xiàn)雀斑樣皮損。日光照射后皮疹顏色加深，冬輕夏重（圖1）。皮膚科檢查：雙手背、足背、頸項(xiàng)部、踝部可見米粒至蠶豆大小褐色沉著斑和色素減退斑，似網(wǎng)狀，對稱分布，局部皮損未見融合，無皮膚萎縮，顏面及頸部散在雀斑樣損害；系統(tǒng)檢查未見異常。手背部皮損病理表現(xiàn)：色素沉著處棘層和基底層內(nèi)黑素細(xì)胞增加，真皮上部噬色素細(xì)胞增多；白斑處黑素細(xì)胞減少甚至消失。

先證者的母親、外祖母及其他患者均自幼出現(xiàn)上述類似皮損，隨年齡增加，雙手背、足背出現(xiàn)色素沉著斑和色素減退斑，頸部、顏面部有雀斑樣損害。所有患者均無外傷史、特殊色素性藥物接觸史，否認(rèn)日光性皮炎史?；颊吒改阜墙H婚配。對該家系4代29例成員中目前有6例患者（男1例，女5例），多于嬰幼兒期發(fā)病，無隔代遺傳現(xiàn)象，遺傳方式符合常染色體顯性遺傳（圖2）。

圖1 先證者手部（1A）及頸部（1B）皮損

圖2 遺傳性對稱性色素異常癥家系圖

二、方法

1.DNA提?。汉炇鹬橥鈺笕≡摷蚁?例成員（5例患者、3例非患者）及100例無血緣關(guān)系的健康人對照外周血各4～5Ml，乙二胺四乙酸抗凝，-80℃保存。采用北京康為世紀(jì)DNA試劑盒提取DNA，標(biāo)化質(zhì)量濃度80mg/L。

2.引物設(shè)計(jì)：根據(jù)文獻(xiàn)［3］設(shè)計(jì)，ADAR1基因2號外顯子有3對引物，4～5、8～9、10～11、14～15外顯子分別共用1對引物，共13對引物，由北京華大基因技術(shù)有限公司合成。

3.ADAR1基因PCR擴(kuò)增：擴(kuò)增ADAR1基因的15個外顯子。PCR體系為50μl，PCR 反應(yīng)混合試劑（Mix）25μl，上下游引物各1 μl，DNA模板2 μl，ddH2O 21μl，反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5min；94℃ 35 s，52～ 58℃ 30 s，72℃ 40 s，35個循環(huán)；充分延伸10min，4℃保存產(chǎn)物，產(chǎn)物純化后用ABI 3730XLDNA測序儀進(jìn)行直接測序。

三、結(jié)果

將ADAR1基因的15個外顯子序列與GeneBank中ADAR標(biāo)準(zhǔn)序列對比，發(fā)現(xiàn)家系中5例患者在2號外顯子的第1420位堿基C均突變?yōu)門，此突變?yōu)闊o義突變，即c.1420C ＞ T（p.Arg474X）（圖3），且均為雜合突變，而家系正常成員和100例健康對照無此突變。

圖3 遺傳性對稱性色素異常癥家系成員和健康對照ADAR1基因測序圖 家系患者（先證者和其母親）ADAR1基因1 420位堿基C突變?yōu)閴A基T，而家系非患者成員和健康對照均無此突變

四、討論

研究證實(shí)，DSH的致病基因?yàn)锳DAR1，到目前為止，人類基因突變數(shù)據(jù)庫（HGMD）已收錄188種突變位點(diǎn)，基因突變方式主要包括錯義突變、無義突變、移碼突變、剪切位點(diǎn)突變，移碼突變及錯義突變多見［4］。本研究檢測到該家系中患者的ADAR1基因2號外顯子末端存在c.1420C＞T（p.Arg474X）無義突變。Miyamura等［2］曾報(bào)道該突變，其導(dǎo)致提前產(chǎn)生終止密碼子并編碼出無效截短蛋白，不完整的缺陷蛋白不能形成同源二聚體，不具有與底物識別和結(jié)合功能，可能影響后續(xù)重要的功能區(qū)域，引起蛋白結(jié)合功能域的結(jié)構(gòu)和功能異常，從而導(dǎo)致皮膚色素異常。Zhang等［5］回顧2003—2013年發(fā)表的關(guān)于DSH家系A(chǔ)DAR1基因突變的文章，發(fā)現(xiàn)R474X、R1083C、R1096X和R1155W突變多次在不同的家系中被檢測出，推測這4個突變可能是DSH的熱點(diǎn)突變。本研究雖然沒有發(fā)現(xiàn)新的突變，但進(jìn)一步證實(shí)該位點(diǎn)可能為突變熱點(diǎn)。本文家系中，在基因型和臨床表型之間沒有發(fā)現(xiàn)明顯的相關(guān)性，患者都有相同的突變，但皮損部位和程度不盡相同，先證者皮損最重且累及頸部，色素沉著和色素減退差異明顯，而先證者祖母和母親皮損相對較輕，未累及踝部，提示DSH表型可能與其他因素相關(guān)，如日照、溫度、病毒感染等。此前也有研究發(fā)現(xiàn)，該病臨床表型與基因型之間無明確相關(guān)性［6?7］。