華南地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)豬繁殖與呼吸綜合征病毒的免疫及流行情況調(diào)查

郭建超，李 亮，許華釗，樊福好

（農(nóng)業(yè)部種豬質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心，廣東省畜牧技術(shù)推廣總站，廣東 廣州 510500）

豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）所致的豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是一種嚴(yán)重影響全球養(yǎng)豬業(yè)的重要疾病，又稱“豬藍(lán)耳病”，以引起種豬群繁殖障礙，仔豬、生長(zhǎng)育肥豬群呼吸道問題為特點(diǎn)，給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前，除澳大利亞、新西蘭、瑞士等少數(shù)國(guó)家無(wú)疫情而外，PRRS在許多國(guó)家和地區(qū)呈地方性流行[1]。病毒的易變異，易重組，疫苗株存在毒力返強(qiáng)等特點(diǎn)，使防控難度加大，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

本調(diào)查的樣品來自華南地區(qū)26個(gè)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)的保育豬，采樣場(chǎng)生產(chǎn)情況穩(wěn)定，用頸靜脈抽血的方法采集血液樣品，并用動(dòng)物血液保護(hù)液保存，第1次采樣豬只在48～80日齡，第2次采樣在首次采樣后混群飼養(yǎng)30 d。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法及材料

采用PCR技術(shù)和ELISA技術(shù)，PCR方法檢測(cè)豬藍(lán)耳病經(jīng)典株和變異株，PCR采用的儀器和試劑來自金瑞鴻捷（廈門）生物科技有限公司，POCKIT 智能型手提式核酸分析儀、Nublieic Acid Co-prep Kit(PRRSVNA)、Nublieic Acid Co-prep Kit（PRRSV-CN）。

表1 PCR、ELISA檢測(cè)結(jié)果

ELISA試劑盒由愛德仕（IDEXX）提供PR R SV抗體檢測(cè)試劑盒（IDEXX PRRS X3 Ab），該試劑盒是以核衣殼蛋白（N蛋白）作為包被抗原，使用Thermo Multiscan MK3酶標(biāo)儀。

2 結(jié)果

PCR、ELISA首次采樣檢測(cè)結(jié)果如表1，26個(gè)豬場(chǎng)的375頭保育豬，總體抗原陽(yáng)性率52.53%（197/375），抗體陽(yáng)性率 57.87%（217/375），PRRS抗體陽(yáng)性場(chǎng)率高達(dá)92.30%（24/26），僅有2個(gè)場(chǎng)抗原和抗體檢測(cè)為雙陰性，同時(shí)未進(jìn)行有關(guān)PRRS的免疫。

不同疫苗的使用情況及對(duì)應(yīng)場(chǎng)的抗原抗體情況調(diào)查，如表2，其中統(tǒng)計(jì)有4個(gè)毒株的減毒苗在華南地區(qū)使用，13個(gè)場(chǎng)注射減毒苗，1個(gè)場(chǎng)注射滅活苗。其中減毒苗ATCCVR-2332株使用場(chǎng)數(shù)最多，抗體陽(yáng)性率達(dá)81.82%。1個(gè)場(chǎng)使用滅活苗，二次免疫后抗體陽(yáng)性率達(dá)72.50%，但同時(shí)存在抗原感染，陽(yáng)性率達(dá)65.00%。

采用不同免疫方式豬場(chǎng)抗體和抗原的檢測(cè)情況，注射減毒苗的豬總體抗體陽(yáng)性率不如免疫過兩次滅活苗的豬，但其抗原陽(yáng)性率較低。使用滅活苗的豬群抗體陽(yáng)性率情況最好，但其S/P均值、S/P≥2.0比例、抗原陽(yáng)性率均最高，說明其群內(nèi)抗原活躍度最高。未免疫豬場(chǎng)總體抗體陽(yáng)性率最低，S/P均值也最低，說明最易受到野毒感染。從抗體離散度看，減毒苗和滅活苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體在豬群中均勻度都不好。如表3。

不同周齡豬只（人工免疫）抗體陽(yáng)性率、抗體的S/P的均值和≥2.0比例變化的變化情況，如圖1，采用減毒苗和滅活苗免疫的豬只共234頭，總體陽(yáng)性率為66.67%（156/234），檢測(cè)抗體陽(yáng)性頭/總頭數(shù)，8周齡25/55頭、9周齡68/104頭、10周齡39/47頭、11周齡24/28頭。將本次檢測(cè)的375頭豬只混群飼養(yǎng)30 d后，隨機(jī)采集85頭豬的血液樣品，采用同樣的方法和試劑，抗體陽(yáng)性率已達(dá)94.12%（80/85），S/P 值 1.86，抗原陽(yáng)性率 27.06%（23/85）。8周到11周S/P均值、S/P≥2.0比例都在升高，表明免疫后的豬群中PRRSV活躍逐漸升高，抗體離散度降低說明群體中抗體均勻度越來越整齊。

不同周齡豬只（未免疫）抗原抗體陽(yáng)性的變化情況，抗原陽(yáng)性率逐漸降低，抗體陽(yáng)性率在9周齡時(shí)又升高，10周齡時(shí)又降低，總體呈下降態(tài)勢(shì)。檢測(cè)抗體/抗原/總頭數(shù)，第7周10/9/14頭，第8周10/15/28頭，第9周29/29/65頭，第10周3/8/21頭，共128頭。

不同品種豬只（未免疫）對(duì)PRRSV的感染狀況，如表4，杜洛克豬感染率最低。

表2 不同疫苗的使用情況

表3 不同免疫方式豬場(chǎng)抗體和抗原情況

圖1 抗體陽(yáng)性率、S/P值均值及≥2.0比例變化情況

3 結(jié)果討論

我國(guó)在1996年分離到PRRSV[2]，2006 年以后，我國(guó)暴發(fā)了豬高致病性藍(lán)耳病，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[3]，時(shí)至今日人們?cè)谘芯糠乐蜳RRS領(lǐng)域仍未取得有效進(jìn)展，尤其是在疫苗的研究使用方面，該病一直是制約養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要因素之一。從本次調(diào)查的26個(gè)豬場(chǎng)的抗原抗體的情況，僅有兩個(gè)場(chǎng)抗原和抗體檢測(cè)為雙陰性，同時(shí)也未進(jìn)行有關(guān)PRRS的免疫，可見華南地區(qū)能保持雙陰性的種豬場(chǎng)屈指可數(shù)。在進(jìn)行免疫的豬場(chǎng)，個(gè)別場(chǎng)抗體陽(yáng)性率低，同時(shí)場(chǎng)間抗體陽(yáng)性率差異較大，從12.50%～100%，免疫效果差次不齊。除陰性場(chǎng)外，其余豬場(chǎng)均存在PRRSV感染狀況，陽(yáng)性率18.75%～100%?？傮w華南地區(qū)PRRS疫情復(fù)雜、防控形勢(shì)嚴(yán)峻、凈化困難。

PRRSV變異和毒株重組頻繁，新毒株層出不窮，減毒活苗回復(fù)突變和毒力返強(qiáng)[4]，同時(shí)交叉免疫效果差，單一毒株的疫苗不能抵抗或者只能抵抗部分其他毒株感染，不能阻止病毒在豬群中的傳播感染，只能夠抑制或減少臨床癥狀的發(fā)生[5]。本次調(diào)查數(shù)據(jù)看，對(duì)于進(jìn)行PRRS減毒苗免疫的豬群，抗體陽(yáng)性率高，抗原陽(yáng)性率低，免疫后效果最好，即可提供最大限度的免疫保護(hù)，又可以降低疫苗毒在體內(nèi)的存在時(shí)間。本次統(tǒng)計(jì)華南地區(qū)有4個(gè)減毒株疫苗在使用，包括了經(jīng)典株和變異株，各個(gè)毒株的抗體陽(yáng)性率/抗原陽(yáng)性率，ATCCVR-2332 株 81.82%/57.58%，JXA1-R株 86.36%/72.73%，TJM-F92株 61.54%/61.54%，HuN4-F112株38.03%/40.85%，免疫后抗體陽(yáng)性率在80%以上的有ATCCVR-2332 株和JXA1-R株，但是ATCCVR-2332 株抗原陽(yáng)性率較低，因此減毒苗中ATCCVR-2332 株（經(jīng)典株）免疫效果最好。

圖2 未免疫豬只抗原抗體變化情況

表4 不同品種豬只（未免疫）對(duì)PRRSV的感染狀況

豬群免疫后的理想效果是抗體檢測(cè)應(yīng)該全為陽(yáng)性，S/P值最好在1.6以下且大于2.0比例越低越好，但豬場(chǎng)很難達(dá)到這種水平，本次統(tǒng)計(jì)（表3）表明使用滅活苗的群體S/P均值高于減毒苗，且S/P值≥2.0的比例較高，這些特點(diǎn)表明使用滅活苗的豬群中PRRSV處于更加活躍，豬群潛在風(fēng)險(xiǎn)最高，雖滅活苗誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體的陽(yáng)性率較高，但其抵抗再次感染的能力一直備受質(zhì)疑，F(xiàn)ederico A報(bào)道滅活苗免疫，再次感染盡管可以誘導(dǎo)干擾素和中和抗體反應(yīng)，但不能夠起到保護(hù)作用[6]，Zuckermann FA也做過相應(yīng)報(bào)道[7]。本文較高的抗原陽(yáng)性率65%，也印證了這一點(diǎn)。但是滅活苗不存在減毒活苗回復(fù)突變和毒力返強(qiáng)等現(xiàn)象。

免疫后的豬群按周齡分析（圖1），8周齡豬只抗體陽(yáng)性率最低，以后逐漸升高，可能在哺乳階段注射疫苗后，由于外界應(yīng)激較頻繁，如斷奶、混群、換料等，加之仔豬自身免疫系統(tǒng)未發(fā)育完善，對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答反應(yīng)弱等原因，抗體并沒有立刻達(dá)到理想的保護(hù)率（75%～80%以上），也可能與抗體在機(jī)體內(nèi)存在的時(shí)間規(guī)律有關(guān)，哺乳階段接種后免疫抗體上升后逐漸下降，從8周齡又開始上升，Eric A對(duì)3日齡5頭仔豬接種病毒，利用IFA對(duì)病毒N蛋白抗體檢測(cè)，N蛋白抗體在14、21、28、42日均為陽(yáng)性，58日齡變?yōu)殛幮裕?0、86、93、106、113、127、140日 齡 為陽(yáng)性[8]，58日齡即為本文的第8周。隨著豬只的生長(zhǎng)，免疫系統(tǒng)的完善，同時(shí)PRRSV在豬群中活躍度也呈逐漸增強(qiáng)狀態(tài)，被感染豬只不斷增多，抗體陽(yáng)性率從第8周的45.45%到第11周達(dá)85.71%。375頭豬在混群前抗原陽(yáng)性率52.53%，抗體陽(yáng)性率57.86%，S/P值1.12，混群飼養(yǎng)30 d后，抗原陽(yáng)性率27.06%（23/85），抗體陽(yáng)性率已達(dá)94.12%，S/P值1.86，抗體陽(yáng)性率和S/P上升很快，可能與本次混群是不同來源場(chǎng)、不同免疫方式，不同減毒株免疫的豬，加劇了病毒傳播感染，被感染抗體陽(yáng)性率不斷升高，血清中抗原陽(yáng)性率降低。

未免疫過疫苗的豬群總體抗原和抗體陽(yáng)性率分別為46.88%、40.63%，抗原抗體都隨著日齡增加而降低（圖2）。抗原陽(yáng)性率逐漸減低，可能隨著日齡的增加豬機(jī)體對(duì)病毒的清除能力增強(qiáng)及易感性降低，也可能超出PCR血清檢測(cè)的時(shí)限，病毒仍定植到其他位置，如扁桃體、淋巴結(jié)。利用RT-PCR對(duì)感染后血清檢出的時(shí)限在1～35 d，有報(bào)道稱時(shí)限更長(zhǎng)，在實(shí)驗(yàn)條件下感染PRRSV后130～157 d時(shí)可以從扁桃體和口腔試子中分離病毒[9]，因此血清檢測(cè)抗原呈陰性并非表示體內(nèi)無(wú)PRRSV感染，但可以說明豬只已經(jīng)擺脫了病毒血癥時(shí)期?？贵w的陽(yáng)性率逐漸降低，與抗原的降低有關(guān)，也可能與N蛋白抗體在體內(nèi)隨日齡的增加，而含量降低的變化規(guī)律有關(guān)，Batisia發(fā)現(xiàn)即使淋巴結(jié)中有病原的存在，血清中N蛋白抗體也會(huì)減少[10]。調(diào)查結(jié)果顯示，未免疫豬場(chǎng)PRRS無(wú)明顯臨床癥狀且不做任何免疫的豬場(chǎng)，抗原抗體的陽(yáng)性率都會(huì)降低，這是否說明，即使哺乳或保育階段初次檢測(cè)抗原抗體的陽(yáng)性率高，本文第7周測(cè)定抗體71.43%，抗原64.29%，也無(wú)需增加相關(guān)免疫程序，做好生物安全工作，持續(xù)保持優(yōu)良的管理，不引進(jìn)陽(yáng)性豬，即可保持豬群穩(wěn)定。但這些豬場(chǎng)仍需做好持續(xù)的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，這種隱性感染是否對(duì)豬場(chǎng)生產(chǎn)成績(jī)有何影響，需要進(jìn)一步研究。

本文同時(shí)對(duì)未注射疫苗的豬只，按不同品種分類，發(fā)現(xiàn)不論從抗原還是抗體陽(yáng)性率，杜洛克的感染率最低，這可能和其遺傳性狀有關(guān)。