壯腰健身丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究△

沈敏，趙雯，劉敏，任琦，付輝政

(江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029)

壯腰健身丸收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十四冊(cè)[1]，系由女貞子(酒蒸)、黃精、熟地黃、金櫻子、狗脊、制何首烏、千斤拔七味藥材組成，具有壯腰健身的功效。用于腰酸腿軟，頭暈耳鳴，眼花心悸，陽(yáng)萎遺精等癥。壯腰健身丸標(biāo)準(zhǔn)僅有性狀、顯微鑒別、檢查項(xiàng)目，難以有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，目前未見(jiàn)有關(guān)壯腰健身丸質(zhì)量控制方面的報(bào)道。為了有效地控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，保證其安全性和有效性，本實(shí)驗(yàn)采用TLC 法對(duì)壯腰健身丸中熟地黃[2-3]、制何首烏[2，4-5]進(jìn)行定性鑒別研究，并運(yùn)用HPLC 同時(shí)測(cè)定其中特女貞苷的量[2，6-8]，為該制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AD高效液相色譜儀，四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、PAD檢測(cè)器、LC solution工作站;電子天平：Sartorius BT 25 S十萬(wàn)分之一天平。

1.2 試藥

壯腰健身丸樣品由江西半邊天藥業(yè)有限公司(批號(hào)：160302、160603)和江西九華藥業(yè)有限公司(批號(hào)：20160701)提供；熟地黃對(duì)照藥材(批號(hào)：121196-201406)、制何首烏對(duì)照藥材(批號(hào)：121454-201405)、特女貞苷對(duì)照品(批號(hào)：111926-201001，含量為94.4%)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。硅膠G 板(青島海洋化工廠分廠)；乙腈、甲醇為色譜純，水為娃哈哈飲用純凈水，其他試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別

2.1 熟地黃薄層色譜鑒別

取本品5 g，剪碎，加等量硅藻土，研勻，加水100 mL，溫?zé)崾钩浞秩苌?，加熱至沸，放冷，離心，取上清液用乙酸乙酯振搖提取3次，每次30 mL，合并乙酸乙酯液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取熟地黃對(duì)照藥材4 g，加水60 mL，煎煮30 min，用脫脂棉濾過(guò)，濾液同法制成對(duì)照藥材溶液。取缺少熟地黃藥材的陰性處方樣品5 g，并按供試品溶液的制備方法同法操作，制得陰性對(duì)照液。照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版通則0502)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二甲苯-乙酸乙酯(1∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2，4-二硝基苯肼乙醇試液，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。且陰性對(duì)照在該位置上無(wú)相同顏色的斑點(diǎn)，無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

注：1.熟地黃對(duì)照藥材；2.陰性對(duì)照；3～5.供試品溶液。圖1 熟地黃薄層色譜鑒別

2.2 制何首烏薄層色譜鑒別

取本品6 g，剪碎，加等量硅藻土，研勻，加乙醇50 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。另取制何首烏對(duì)照藥材0.25 g，同法制成作為對(duì)照藥材溶液。取缺少制何首烏藥材的陰性處方樣品6 g，并按供試品溶液的制備方法同法操作，制得陰性對(duì)照液。照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版通則0502)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯(5∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。且陰性對(duì)照在該位置上無(wú)相同顏色的熒光斑點(diǎn)，無(wú)干擾。見(jiàn)圖2。

注：1.制何首烏對(duì)照藥材；2～4.供試品溶液；5.陰性對(duì)照。圖2 制何首烏薄層色譜鑒別

3 特女貞苷的HPLC含量測(cè)定

3.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-SP C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀水溶液(25∶75)；檢測(cè)波長(zhǎng)：224 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。在上述色譜條件下，特女貞苷與其他組分的色譜峰分離度良好。色譜圖見(jiàn)圖3。

注：A.特女貞苷對(duì)照品溶液；B.壯腰健身丸供試品溶液；C.缺女貞子(酒制)陰性對(duì)照溶液。圖3 壯腰健身丸HPLC含量測(cè)定色譜圖

3.2 對(duì)照品溶液的制備

取特女貞苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成50 μg·mL-1的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下的本品，剪碎，取約3 g，精密稱(chēng)定，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)1 h，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，取上清液濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

3.4 線性關(guān)系的考察

3.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取按3.2項(xiàng)下方法制備的對(duì)照品溶液10 μL，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果特女貞苷峰面積的RSD為0.3% (n= 6)，表明儀器精密度良好。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批壯腰健身丸樣品6份，每份約3 g，精密稱(chēng)定，按3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行分析測(cè)定，特女貞苷的含量的平均值為0.883 5 mg·g-1，RSD為1.6%，表明該方法有良好的重復(fù)性。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0、7、14、21、28、35 h進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得特女貞苷峰面積的RSD為0.4%(n= 6)，說(shuō)明供試品溶液在35 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.8 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法，精密稱(chēng)取已知含量(特女貞苷含量為0.883 5 mg·g-1)的壯腰健身丸樣品6份，每份約1.5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，每份精密加入含特女貞苷 0.026 9 mg·mL-1的對(duì)照品溶液50 mL，按3.3項(xiàng)下方法制備供試溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行分析測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果特女貞苷的平均回收率為98.0% (n=6)，RSD為0.5%。見(jiàn)表1。

3.9 耐用性試驗(yàn)

取本品照3.1項(xiàng)下方法試驗(yàn)，分別用A：Inertsil ODS-SP C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、B：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、C：Thermo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)3種品牌的色譜柱按3.1項(xiàng)下的色譜條件對(duì)其進(jìn)行測(cè)定，含量測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯差別。

3.10 樣品測(cè)定

分別取不同批號(hào)的壯腰健身丸3批，每個(gè)樣品取3份，按3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液。精密吸取供試品溶液10 μL，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，測(cè)定峰面積，用外標(biāo)法計(jì)算出特女貞苷的含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

4 討論

4.1 薄層色譜條件的選擇

本實(shí)驗(yàn)選擇的薄層色譜條件下，熟地黃、制何首烏供試品色譜與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

4.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

采用PDA檢測(cè)器對(duì)特女貞苷對(duì)照品色譜峰進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果特女貞苷在224 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，由于224 nm雜峰對(duì)目標(biāo)峰干擾少且穩(wěn)定，故選擇224 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

4.3 提取方法的選擇

比較了甲醇加熱回流提取，甲醇超聲提取兩種提取法，結(jié)果表明超聲提取法提取效率大于加熱回流提取法。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中比較了提取溶劑倍量(25、50、100 mL)、提取時(shí)間(30、45、60、90 min)及提取溶劑(50%甲醇、70%甲醇、甲醇、50%乙醇、70%乙醇)，結(jié)果表明，提取溶劑量為50 mL、提取時(shí)間為60 min和提取溶劑為甲醇時(shí)能將特女貞苷完全提取，作為最終提取方法。

4.4 色譜條件的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)摸索乙腈-水、甲醇-水、乙腈-甲酸水溶液、甲醇-甲酸水溶液和甲醇-磷酸二氫鉀水溶液按一定比例混合作為流動(dòng)相，考察其分離度，結(jié)果以甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀水溶液(25∶75)為流動(dòng)相，流速1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃的色譜條件下供試品中特女貞苷與其他共存組分峰能達(dá)到良好的分離。

本實(shí)驗(yàn)建立了壯腰健身丸中特女貞苷的HPLC 含量測(cè)定方法，并對(duì)方中主要藥味熟地黃、制何首烏進(jìn)行了TLC 定性鑒別。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所建立的方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠、重復(fù)性好。