精子DNA碎片率對體外受精胚胎移植妊娠結(jié)局的影響研究

陶萍

【摘要】 目的：探討精子DNA碎片率（DNA fragmentation index，DFI））對體外受精胚胎移植（IVE-ET）過程中妊娠結(jié)局的治療影響。方法：收集140例體外受精（IVF）周期患者作為研究對象進(jìn)行回顧性分析，采用精子染色質(zhì)擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)（spermchromatin dispersion，SCD）對進(jìn)行精子DNA碎片率檢測，總共分為三組，A組低DFI（<10%），B組中DFI（10%～25%），和C組高DIF（>25%）。比較三組的受精率、優(yōu)胚率、卵裂率及臨床妊娠率，并分析三組的精液參數(shù)的差異。結(jié)果：A組、B組的受精率、臨床妊娠率高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A組優(yōu)胚率高于B組、C組，A組、C組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；三組卵裂率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。A組、B組、C組其他精液常規(guī)指數(shù)也有差異，其中，三組中A組前向運(yùn)動精子（Progressive motility，PR）百分率、精子正常形態(tài)率顯著高于C組（P<0.05），A組高于B組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：（1）前向運(yùn)動精子數(shù)量、精子正常形態(tài)率會隨精子DFI升高而降低；（2）精子DFI高于一定閾值（25%）會影響IVF受精率和優(yōu)胚率。

【關(guān)鍵詞】 精子DNA碎片率； IVE-ET； 優(yōu)胚率； 受精率

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.11.084 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2018）11-0171-02

相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，隨著當(dāng)今社會快速發(fā)展，在多種因素的綜合影響下，不孕不育患者的數(shù)量在逐年增加。在這一類患者人群中，男性患者的比例占到了50%[1]。目前男性不育的主要診斷指標(biāo)還是精液常規(guī)參數(shù)，包括精子濃度、精子活動率及精子形態(tài)學(xué)檢查等，但其診斷存在很大局限性，不能全面反映精子的受精能力[2]。精子DNA碎片率（DFI）是指發(fā)生DNA鏈斷裂的精子占全部精子的百分比。精子自身沒有DNA修復(fù)機(jī)制，而染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的完整性是正常受精、胚胎發(fā)育與妊娠的前提條件[3-4]。精子DNA損傷程度對于生殖結(jié)局是否存在不利影響是臨床關(guān)注的重點(diǎn)問題[5]。為了對這一問題進(jìn)行更深入的了解，本文通過對中心140例男性患者的精液進(jìn)行了臨床探究，對于精子形態(tài)及DFI對IVE-ET妊娠結(jié)局的影響進(jìn)行了回顧性的分析，為研究來自精子的因素對IVE-ET的影響提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選擇筆者所在醫(yī)院在2017年1-7月接受體外受精-胚胎移植（IVE-ET）治療的符合納入標(biāo)準(zhǔn)的患者140例進(jìn)行臨床探究。納入標(biāo)準(zhǔn)：夫婦染色體G顯帶技術(shù)檢查均為正常核型，女方為單純雙側(cè)輸卵管阻塞性因素不孕，且不合并其他女性不孕因素，年齡<40歲，BMI<24 kg/m2，助孕次數(shù)≤2次，月經(jīng)第2～5天測基礎(chǔ)內(nèi)分泌值正常，無卵巢手術(shù)史、放化療史及遺傳病家族史，男性檢查包括男性第二性征、陰莖、陰囊、精索、輸精管、附睪、睪丸等均無異常，常規(guī)IVF，新鮮精液標(biāo)本。排除標(biāo)準(zhǔn)：重度少弱精子癥患者。女方年齡22～40歲，平均（31.60±6.08）歲。患者的不育年限1.1～10.4年，平均（4.8±1.6）年。

1.2 儀器與試劑

日本Olympus公司光學(xué)顯微鏡，西班牙Microptic公司計(jì)算機(jī)輔助精子分析儀，深圳市博銳德生物科技有限公司精子DNA碎片檢測試劑盒和Diff-Quik 染色液，美國Irvine公司精子分離液，瑞典Vitrolife公司GOMPS PLUS培養(yǎng)液。

1.3 方法

1.3.1 精液采集和處理 男方禁欲2～7 d，在取卵當(dāng)日以手淫法收集精液。精液取出后立即放置于37 ℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，待精液完全液化后，留取小部分精液進(jìn)行精液常規(guī)檢測和DFI檢測。精液常規(guī)檢測按照WHO實(shí)驗(yàn)室手冊（第5版）標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，精子形態(tài)學(xué)分析采用Diff-Quik染色，采用Kruger嚴(yán)格形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)閱片。剩余大部分精液采用密度梯度離心法處理，處理后調(diào)整精液密度，用于IVF受精。

1.3.2 精子DFI檢測 采用精子染色質(zhì)擴(kuò)散法（SCD）：按照變性、去核蛋白、脫水、染色等步驟制精子標(biāo)本片，200倍光學(xué)顯微鏡下觀察制得玻片。根據(jù)Fernández標(biāo)準(zhǔn)分級，大暈環(huán)和中暈環(huán)精子為 DNA完整精子，小暈環(huán)、無暈環(huán)和退化精子為DNA損傷精子。以DNA損傷精子數(shù)與計(jì)數(shù)總數(shù)（500個）之比為精子DFI。共有140例入組周期，根據(jù)DFI值將入組患者分為三組：A組低DFI（<10%）共88例，B組中DFI（10%～25%）共38例，和C組高DIF（>25%）共14例。

1.3.3 IVF治療 采用本中心常規(guī)的超排卵方案進(jìn)行，B超及雌二醇（E2）水平監(jiān)測卵泡發(fā)育，卵泡發(fā)育成熟后，肌注人絨毛膜促性腺激素（hCG），36 h后陰道B超引導(dǎo)下行穿刺取卵術(shù)取卵。取卵當(dāng)日行常規(guī)IVF授精，授精后16～18 h觀察受精情況，40～42 h觀察卵裂情況。72 h后選擇1～2個優(yōu)質(zhì)胚胎進(jìn)行移植，移植后14 d尿和血hCG陽性者4周后行B超檢查，見宮內(nèi)妊娠囊為臨床妊娠。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本次試驗(yàn)探究中所有數(shù)據(jù)全部采用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精子DFI與精液常規(guī)參數(shù)的比較

共140例取卵周期，A組88例，B組38例，C組14例。A組、B組精常規(guī)各參數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。C組精子濃度和精子活力與A組、B組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），前向運(yùn)動精子數(shù)和正常精子形態(tài)率顯著低于A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 精子DFI與IVF結(jié)局比較

A有88例取卵周期，73例移植周期，B組有38例取卵周期，32例移植周期，C組有14例取卵周期，11例移植周期。A組、B組的受精率、卵裂率、優(yōu)胚率和臨床妊娠率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。C組的受精率和臨床妊娠率顯著低于A組、B組，優(yōu)胚率顯著低于A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3 討論

精子DNA完整性對于父方基因正常遺傳給子代是至關(guān)重要的，是精子發(fā)揮正常功能的先決條件[6-8]。精子DNA碎片的產(chǎn)生不僅會嚴(yán)重影響到精子的受精能力，影響受精后原核的形成，還可能導(dǎo)致流產(chǎn)，后代先天畸形或者某些遺傳性疾病[9]。對于精子DNA損傷影響胚胎質(zhì)量的機(jī)制目前還不清楚，比較認(rèn)同的觀點(diǎn)是精子染色質(zhì)的異常導(dǎo)致胚胎質(zhì)量下降[10]。精子DFI反映了精子DNA的完整性，作為一項(xiàng)評價(jià)精液質(zhì)量和預(yù)測生育能力的新指標(biāo)，精子DFI已成為近年來生殖醫(yī)學(xué)界關(guān)注的焦點(diǎn)[11-12]。本文重點(diǎn)研究了精子DFI與精液常規(guī)參數(shù)的相關(guān)性，以及精子DFI對IVF結(jié)局的影響。

本文研究結(jié)果顯示，前向運(yùn)動精子數(shù)和精子正常形態(tài)率會隨精子DFI升高而降低，而這兩項(xiàng)精液常規(guī)指標(biāo)通常用于對IVF-ET結(jié)局的預(yù)測，但精確度和準(zhǔn)確性有限。進(jìn)一步比較不同精子DFI組的IVF相關(guān)數(shù)據(jù)，可以發(fā)現(xiàn)，當(dāng)精子DFI<25%時，其對胚胎質(zhì)量、臨床妊娠率無顯著影響，但當(dāng)其>25%時，優(yōu)胚率和臨床妊娠率則有明顯的下降，說明當(dāng)精子DFI高于25%閾值時，IVF結(jié)局會有顯著影響。將精子DFI與精液常規(guī)指標(biāo)相結(jié)合，無疑可以更精確地預(yù)測IVF結(jié)局。

綜上所述，本文通過對中心140例不孕不育患者進(jìn)行臨床探究，驗(yàn)證了精子DFI與精液常規(guī)指標(biāo)的關(guān)系，且當(dāng)其高于一定閾值時會對IVF結(jié)局造成影響。不過由于本次臨床試驗(yàn)樣本數(shù)量較小，說明性有限，應(yīng)該進(jìn)一步擴(kuò)大樣本數(shù)量進(jìn)行探究。

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（收稿日期：2017-10-31）