九項呼吸道感染病原體IgM抗體早期檢測的臨床應(yīng)用

鄭龍榮

【摘要】 目的：對九項呼吸道感染病原體IgM抗體早期檢測的臨床意義進行探究。方法：從2014年9月-2017年8月筆者所在醫(yī)院收治的疑似呼吸道感染患者中抽取9 432例為研究對象，抽取靜脈血檢測九項呼吸道感染病原體IgM抗體，并對結(jié)果與意義進行分析。結(jié)果：9 432例疑似呼吸道感染患者的檢出率為26.59%（2 508/9 432），其中嗜肺軍團菌血清1型-IgM（LP）陽性占陽性病例百分率為0，肺炎支原體-IgM（MP）為67.26%、Q熱立克次體-IgM（COX）為0.56%、肺炎衣原體-IgM（CP）為1.48%、腺病毒-IgM（ADV）為1.24%、呼吸道合胞病毒-IgM（RSV）為1.87%、甲型流感病毒-IgM（IN-FA）為0.60%、乙型流感病毒-IgM（IN-FB）為7.41%、副流感病毒-IgM（PIV）為19.58%。結(jié)論：九項呼吸道感染病原體IgM抗體早期檢出陽性率高，病原體種類多，對呼吸道感染的診斷與治療具有重要臨床意義。

【關(guān)鍵詞】 呼吸道感染； 病原體； 熒光抗體技術(shù)； 間接； IgM抗體

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.11.025 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2018）11-0052-02

呼吸道感染在臨床上具有較高的發(fā)病率，主要誘因為細菌等病原體感染。臨床資料證實，超過90%的上呼吸道感染患者發(fā)病原因為病毒感染[1-2]。該病病原學比較復雜，并且具有季節(jié)流行特征。探究更為迅速、準確的檢測方式對于呼吸道感染的診斷與治療意義重大。本次研究將筆者所在醫(yī)院9 432例疑似呼吸道感染患者作為研究對象，對九項呼吸道感染病原體IgM抗體早期檢測的臨床意義進行探究，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

于2014年9月-2017年8月筆者所在醫(yī)院收治的疑似呼吸道感染患者中抽取9 432例為研究對象，所選患者均有明顯呼吸道感染的臨床表現(xiàn)，排除合并嚴重心肝腎等器官功能障礙患者?；颊呔げ杉瘮?shù)據(jù)的目的和用途，研究獲得患者同意，研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。其中男5 561例、女3 871例，年齡60 d～105歲，平均（23.6±0.9）歲。臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、咽部充血、喘息、肺部濕啰音、扁桃體腫大者分別有5 214、3 624、2 154、7 489、1 478、4 157例。

1.2 方法

患者靜脈抽血，抽血量為2.0 ml，血清樣本采集后在8 h內(nèi)檢測，否則應(yīng)在2 ℃～8 ℃冷藏，如7 d內(nèi)不檢測，則應(yīng)冷凍（<-20 ℃）保存。采用間接免疫熒光法。

1.2.1 檢測試劑 試劑為西班牙VIRCELL公司原裝進口產(chǎn)品，購自鄭州安圖生物有限公司。將九種抗原吸附在載玻片上，包括嗜肺軍團菌血清1型-IgM（LP）、肺炎支原體-IgM（MP）、Q熱立克次體-IgM（COX）、肺炎衣原體-IgM（CP）、腺病毒-IgM（ADV）、呼吸道合胞病毒-IgM（RSV）、甲型流感病毒-IgM（IN-FA）、乙型流感病毒-IgM（IN-FB）、副流感病毒-IgM（PIV）。檢測人血清中相應(yīng)的呼吸道感染病原體IgM抗體，待測樣本中的IgM抗體與吸附在載玻片上的抗原發(fā)生特異性反應(yīng)，再與熒光素標記的抗人球蛋白反應(yīng)，形成抗原-抗體-抗人IgM-FITC復合物，最后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。其他試劑還包括抗人IgM磷酸緩沖液、吸附劑、PBS溶液等。

1.2.2 檢測儀器 熒光顯微鏡[產(chǎn)品型號：CX23LEDRFS1C；生產(chǎn)單位：奧林巴斯（廣州）工業(yè)有限公司]，恒溫水浴箱（型號：TL型電熱恒溫水浴箱；生產(chǎn)單位：姜堰市天力醫(yī)療器械有限公司），水平搖床（型號：KJ-201BD型水平搖床；生產(chǎn)單位：江蘇康健醫(yī)療用品有限公司），低速離心機（型號：DD-5M；生產(chǎn)單位：湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司），臺式高速冷凍離心機（型號：TGL-16；生產(chǎn)單位：湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）。

1.2.3 檢測方式 使用PBS洗液將25 μl血清等比例稀釋，然后將稀釋后的樣品30 μl與150 μl吸附劑充分緩和均勻，在13 000 r/min的速度下離心10 min，防止檢測被其他因素干擾，將沉淀去除。將使用吸附劑處理后的血清放入載玻片的孔中，15 μl/孔。將未稀釋的15 μl陽性對照放入一個載玻片的每個孔中，然后將未稀釋的15 μl陰性對照放入另一個載玻片的每個孔中。把載玻片放入37 ℃的濕盒中培育1.5 h。使用PBS洗液對載玻片進行沖洗，然后將載玻片浸泡在PBS洗液中，使用水平搖床輕輕搖動10 min。將載玻片在蒸餾水中簡單蘸洗，然后自然晾干。每孔加入15 μl抗人IgM FITC結(jié)合物溶液（不需稀釋），把載玻片放入37 ℃的濕盒中溫育0.5 h。將前面洗滌晾干步驟重復進行，然后將封閉介質(zhì)加入，蓋上蓋玻片。盡快用熒光顯微鏡在400倍放大率下對結(jié)果進行觀察。ADV、IN-FA、IN-FB、RSV、PIV陽性表現(xiàn)為：陽性血清1%～15%細胞的細胞核、胞漿為蘋果綠色熒光；LP、CP、COX陽性表現(xiàn)為：全部細菌為蘋果綠色熒光；MP陽性表現(xiàn)為：細胞外圍為蘋果綠色熒光。

2 結(jié)果

9 432例疑似呼吸道感染患者中，檢出率為26.59%（2 508/

9 432），其中LP陽性占陽性病例百分率為0，MP為67.26%、COX為0.56%、CP為1.48%、ADV為1.24%、RSV為1.87%、IN-FA為0.60%、IN-FB為7.41%、PIV為19.58%，見表1。

3 討論

誘發(fā)呼吸道感染的病原菌種類多樣，例如病毒、衣原體、支原體等[3-4]。當前人類生活環(huán)境的持續(xù)惡化使得病原微生物毒性與病原性隨之變化，加上臨床上多種抗生素應(yīng)用范圍的拓寬，細菌性感染率有所下降，但病毒性感染率卻有所上升，病原體感染所占比例也發(fā)生了變化，提升了用藥準確、對癥治療的難度[5-6]。九項呼吸道感染病原體IgM抗體早期檢測只使用一份血清樣本就能實現(xiàn)九項病原體檢測，具有重要的臨床價值。檢測這些病原體有很多方式，例如分離培養(yǎng)、PCR等[7-8]。呼吸道感染，尤其是下呼吸道感染的診斷通常使用實驗室檢查的方式，但并不能達到預(yù)期目標。分離培養(yǎng)的方式過去雖然被大多數(shù)臨床工作者認可，但需要花費較長的培養(yǎng)時間，并具有較高的技術(shù)難度，已經(jīng)被分子生物學的檢測方式取代[9-10]。但分子生物學需要較高的實驗室條件，不能實現(xiàn)大多數(shù)的病原菌檢測[11-12]。當前血清學檢測操作便捷、經(jīng)濟，使用范圍逐漸拓寬[13]。

郭紅仙等[8]研究顯示，九項呼吸道感染病原體IgM抗體早期檢測結(jié)果中MP陽性率最高，陽性感染率為30.2%，其次為IN-FB（15.8%）。提示引發(fā)呼吸道感染的病毒主要為MP。本次研究結(jié)果顯示，9 432例疑似呼吸道感染患者中，檢出率為26.59%（2 508/9 432），在陽性例數(shù)中，其中LP占陽性病例百分率為0，MP為67.26%、COX為0.56%、CP為1.48%、ADV為1.24%、RSV為1.87%、IN-FA為0.60%、IN-FB為7.41%、PIV為19.58%。在引發(fā)呼吸道感染的病毒中，MP最為常見，是感染率最高的呼吸道病原體，引發(fā)上呼吸道感染與肺炎；其次是PIV，可導致呼吸道疾病，突然發(fā)熱，輕微呼吸道感染；然后依次為IN-FB、RSV、CP、ADV、IN-FA、COX，LP檢出率為0，可能是由于該次研究樣本數(shù)量不足，需要進一步選取大數(shù)量樣本深入探索。

綜上所述，九項呼吸道感染病原體IgM抗體早期檢測能實現(xiàn)較高的陽性檢出率，在呼吸道感染的診斷與治療中能夠發(fā)揮重要的臨床作用。

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（收稿日期：2017-11-02）