文蛤寡肽對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)小鼠腎損傷的修護(hù)作用

王佳佳，葉 蕾，楊最素*，余方苗，丁國芳

（浙江海洋大學(xué)食品與醫(yī)藥學(xué)院，浙江省海洋生物醫(yī)用制品工程技術(shù)研究中心，浙江 舟山 316022）

文蛤（Meretrix meretrix）俗稱蛤蜊，屬于軟體動(dòng)物門、真瓣鰓目、簾蛤科、文蛤?qū)伲俏覈鵀┩總鹘y(tǒng)養(yǎng)殖的主要貝類之一[1]。主要產(chǎn)于遼寧、山東、河北、江蘇沿海，盛產(chǎn)期為5、6月。文蛤不僅有“天下第一鮮”之稱，含有人體必需的氨基酸、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素和其他重要物質(zhì)[2]，而且近年來關(guān)于文蛤中多糖、多肽、甾醇化合物、牛磺酸等物質(zhì)的活性研究較多，發(fā)現(xiàn)文蛤在抗癌、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫力、降糖、降血脂等方面具有良好的功效，為臨床治療或輔助治療各種疾病提供了理論依據(jù)[3]。研究發(fā)現(xiàn)文蛤中含有腫瘤抑制因子和促進(jìn)因子，經(jīng)一系列方法得到的腫瘤抑制因子對(duì)小鼠S180肉瘤有顯著的抑制作用，對(duì)正常小鼠沒有毒性，遂將該物質(zhì)命名“蛤素”（mercenene），發(fā)現(xiàn)其可能是分子質(zhì)量小于10 kDa的多肽，且對(duì)體外HeLa細(xì)胞也具有較強(qiáng)抑制作用[4-5]。范成成[6]從文蛤中提取出兩種多肽Mer2和Mer1，Mer2對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞具有很強(qiáng)的抑制作用，Mer1則能降低細(xì)胞內(nèi)黑色素的含量和酪氨酸酶的活性，具有抗氧化活性。王惠[1]從文蛤中提取出一種抗腫瘤多肽Mere15，發(fā)現(xiàn)其可以抑制MMPs的分泌和表達(dá)，并抑制細(xì)胞黏附、遷移、侵襲，對(duì)肺癌A549細(xì)胞具有良好的抑制作用。張綿松[7]進(jìn)行了酶法制備文蛤血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin converting enzyme，ACE）抑制肽的研究，發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)鞍缀繛? mg/mL時(shí)，ACE抑制率高達(dá)65.87%。本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明，文蛤內(nèi)臟經(jīng)酶解獲得的分子質(zhì)量為674.6 Da，氨基酸序列為Gln-Leu-Asn-Trp-Asp的文蛤寡肽（Meretrix meretrix oligopeptides，MMO），能修復(fù)經(jīng)軟脂酸誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝細(xì)胞模型，顯著改善細(xì)胞線粒體能量代謝受阻情況，對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷也具有修復(fù)作用[8-9]。高脂飲食不僅可以導(dǎo)致脂肪肝，高血脂引起的脂質(zhì)代謝異常也是慢性腎損傷的重要影響因素[10-11]，而文蛤寡肽是否對(duì)高脂血引起的腎損傷也有修復(fù)作用，目前鮮見報(bào)道。因此本實(shí)驗(yàn)以高脂飼料建立小鼠慢性腎損傷模型，探索MMO對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠腎損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

動(dòng)物用清潔級(jí)雄性ICR小鼠34 只，體質(zhì)量（20±2）g，購于浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（浙）2016-0001），飼養(yǎng)于浙江海洋大學(xué)動(dòng)物房。

基礎(chǔ)飼料、高脂飼料（膽固醇2.5%、膽酸鈉0.5%、豬油10%、基礎(chǔ)飼料87%） 浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院。

MMO（氨基酸序列：Gln-Leu-Asn-Trp-Asp，純度＞90%）為本實(shí)驗(yàn)室自制；二甲苯、乙醇 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；辛伐他汀 廣東彼迪藥業(yè)有限公司；多聚賴氨酸 美國Sigma公司；低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、甘油三酯（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒、蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染液 南京建成生物工程公司；α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、轉(zhuǎn)錄生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）抗體 北京博奧森生物科技有限公司；山羊抗兔IgG/HRP聚合物（二抗） 北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；SP Rabbit HRP Kit（DAB）試劑盒 北京康為世紀(jì)生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

ALPHA1-4/Ldplus型冷凍干燥機(jī) 德國CHRIST公司；CF16RXⅡ型高速低溫離心機(jī) 日本日立公司；congent μScale超濾系統(tǒng) 德國默克密理博公司；752FC紫外分光光度計(jì) 上海光譜儀器有限公司；切片機(jī)RM2135、攤片機(jī)HI1210、烤片機(jī)H1220 德國Leica公司；光學(xué)顯微鏡、CCD-NC6051顯微攝像 日本OLYMPUS公司。

1.3 方法

1.3.1 文蛤寡肽的提取方法

參考文獻(xiàn)[9]的方法提取文蛤寡肽。

1.3.2 小鼠分組、造模及給藥

將34 只成年雄性ICR小鼠在飼養(yǎng)環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)120 h后隨機(jī)分為2 組，正常組小鼠（8 只）喂基礎(chǔ)飼料，其余小鼠（26 只）喂高脂飼料。20 d后，從正常組與高脂飼料模型組各取兩只小鼠，處死，取肝臟，包埋后HE染色進(jìn)行病理學(xué)診斷，證實(shí)造模成功。造模成功后，將模型組小鼠24 只再隨機(jī)分為4 組，每組6 只，分別為模型組、辛伐他汀陽性藥物組、MMO低劑量組、MMO高劑量組。將各組小鼠灌胃給藥，陽性藥物組劑量為200 mg/kg mb，MMO低、高劑量組分別為50、250 mg/kg mb，正常組與模型組則給予等量蒸餾水。每天觀察動(dòng)物特征、行為活動(dòng)等，每周記錄體質(zhì)量3 次。給藥30 d，末次灌胃后禁食不禁水24 h，摘眼球取血，4 ℃、4 000 r/min離心10 min取血清，用于生化測(cè)定?？焖偃〕瞿I臟觀察形態(tài)并稱質(zhì)量；一部分腎臟用4%多聚甲醛固定，用于HE染色；余下腎臟放入液氮中快速凍存，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 小鼠腎臟指數(shù)的計(jì)算

根據(jù)式（1）計(jì)算腎臟指數(shù)。

1.3.4 小鼠血清中各項(xiàng)生化指標(biāo)的測(cè)定

摘眼球取血，4 ℃、4 000 r/min離心10 min取血清，按試劑盒說明書步驟進(jìn)行LDL-C、HDL-C、TC、TG濃度的測(cè)定。

1.3.5 小鼠AI的計(jì)算

參考文獻(xiàn)[12]，按式（2）計(jì)算小鼠動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)（atherosclerosis index，AI）。

式中：cTC、cHDL-C分別為TC、HDL-C的濃度/（mmol/L）。

1.3.6 小鼠腎組織勻漿液中各種生化指標(biāo)的測(cè)定

參考文獻(xiàn)[13]，準(zhǔn)確稱取小鼠腎臟組織，按1∶9（m/V）的比例加入0.9%的生理鹽水，制成10%的勻漿液，4 000 r/min離心10 min，取上清液進(jìn)行GSH-Px、SOD活力及MDA含量的測(cè)定。

1.3.7 組織病理學(xué)HE染色觀察

參考文獻(xiàn)[14-15]，取小鼠腎臟1 cm3左右，立即放入4%多聚甲醛溶液，固定24 h后，常規(guī)石蠟包埋后，制備5 μm厚切片，按照HE染色順序，中性樹膠封片且光鏡下觀察腎組織病理變化。

1.3.8 免疫組化法檢測(cè)α-SMA、TGF-β1蛋白的表達(dá)

參考文獻(xiàn)[9]，將小鼠腎臟切片常規(guī)脫蠟至水；內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑室溫作用10 min；微波爐抗原修復(fù)，冷卻后磷酸鹽緩沖液洗滌2 次，每次5 min；滴加封閉用正常山羊血清工作液，室溫作用20 min，甩去多余液體；分別滴加適量稀釋的一抗（1∶300），4 ℃孵育過夜，磷酸鹽緩沖液洗3 次，每次5 min；滴加二抗，室溫孵育20 min；滴加適量HRP標(biāo)記的鏈霉親和素，室溫孵育20 min；DAB顯色，鏡下控制時(shí)間，自來水沖洗；蘇木素復(fù)染5 min，乙醇梯度脫水，二甲苯透明后中性樹膠封片。顯微鏡下觀察并拍照。

1.4 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以±s表示，采用單因素方差分析比較差異顯著性，且以P＜0.05表示差異有顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠體質(zhì)量變化情況

灌胃給藥30 d后，小鼠體質(zhì)量變化如表1所示。與正常組相比，高脂飼料模型組體質(zhì)量顯著增加，增幅為68.08%（P＜0.05），陽性藥物組體質(zhì)量增加與正常組相差不大，增幅為45.99%，MMO劑量組體質(zhì)量增幅和模型組相比有所下降，且呈現(xiàn)劑量依賴性，其中MMO高劑量組增幅為48.74%（P＜0.05），與陽性藥物組小鼠體質(zhì)量增加差別不大。

表 1 MMO對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響（n＝6）Table 1 Effect of MMO on body weight of mice (n= 6)

2.2 MMO對(duì)小鼠腎臟指數(shù)的影響

表 2 MMO對(duì)小鼠腎臟指數(shù)的影響（n＝6）Table 2 Effect of MMO on kidney index in mice (n= 6)

如表2所示，與正常組相比，模型組腎臟指數(shù)顯著升高（P＜0.05），各藥物組與模型組相比較，腎臟指數(shù)有所下降，且以陽性藥物組與MMO高劑量組最為明顯，并與模型組呈現(xiàn)顯著性差異（P＜0.05）。說明MMO可降低高脂飲食小鼠腎臟指數(shù)。

2.3 MMO對(duì)小鼠血清LDL-C、HDL-C濃度的影響

表 3 MMO對(duì)小鼠血清LDL-C、HDL-C濃度的影響（n＝6）Table 3 Effect of MMO on serum LDL-C and HDL-C levels of mice (n= 6)

如表3所示，與正常組比較，模型組小鼠血清LDL-C濃度明顯上升，HDL-C濃度明顯下降，呈現(xiàn)顯著性差異（P＜0.05）；MMO高劑量組LDL-C濃度與模型組相比，顯著降低（P＜0.05），陽性藥物組與MMO低劑量組LDL-C濃度與模型組相比有下降趨勢(shì)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比，陽性藥物組與MMO高劑量組HDL-C濃度則顯著升高（P＜0.05）；各組藥物對(duì)血清LDL-C、HDL-C作用大小比較：MMO低劑量組＜陽性藥物組＜MMO高劑量組。說明MMO可降低高脂飲食小鼠血清LDL-C濃度以及升高HDL-C濃度，且有一定的劑量相關(guān)性。

2.4 MMO對(duì)小鼠血清中TC、TG濃度的影響

如表4所示，模型組小鼠血清TC、TG濃度與正常組相比，顯著升高（P＜0.05），分別達(dá)到正常組的1.84 倍與1.66 倍；與模型組比較，各藥物組TC濃度均有所降低，但陽性藥物組與MMO高劑量組效果更為顯著（P＜0.05），其中MMO高劑量組TC濃度降低幅度達(dá)到38.19%；各藥物組TG濃度與模型組相比，均有下降趨勢(shì)，且以MMO高劑量組降幅最大，達(dá)到25.64%。說明MMO可降低高脂飲食小鼠血清TC、TG濃度，并且呈現(xiàn)一定的劑量相關(guān)性。

表 4 MMO對(duì)小鼠血清TC、TG濃度的影響（n＝6）Table 4 Effect of MMO on serum TC and TG levels of mice (n= 6)

2.5 MMO對(duì)小鼠AI的影響

表 5 MMO對(duì)小鼠AI的影響（n＝6）Table 5 Effect of MMO on serum AI of mice (n= 6)

如表5所示，模型組AI與正常組相比，顯著升高（P＜0.05），是正常組的5.08 倍，各藥物組與模型組相比，AI降低，并均呈現(xiàn)顯著性差異（P＜0.05），且以MMO高劑量組降低幅度最為明顯，達(dá)到67.27%，陽性藥物組次之，為61.82%。說明MMO可降低高脂飲食小鼠AI，且劑量越高效果越好。

2.6 MMO對(duì)高脂飲食小鼠腎組織勻漿GSH-Px、SOD活力及MDA含量的影響

表 6 MMO對(duì)小鼠腎組織勻漿GSH-Px、SOD活力及MDA含量的影響（n＝6）Table 6 Effect of MMO on GSH-Px and SOD activities and MDA content in kidney of mice (n= 6)

如表6所示，模型組GSH-Px、SOD活力分別為正常組的63%和53%，MDA含量是正常組的2.76 倍，差異顯著（P＜0.05）；各藥物組與模型組相比，GSH-Px、SOD活性均有所升高，MDA含量均有所降低，其中以陽性藥物組與MMO高劑量組作用較為明顯，MMO高劑量組GSH-Px、SOD活性分別為模型組1.49 倍和1.58 倍，MDA含量是模型組的52%。說明MMO可提高高脂飲食小鼠腎組織勻漿GSH-Px、SOD活力以及降低MDA含量，且呈現(xiàn)劑量相關(guān)性。

2.7 MMO對(duì)腎組織的病理學(xué)影響

圖 1 小鼠腎組織HE染色（×400）Fig. 1 HE stained kidney sections of mouse (× 400)

每組小鼠腎組織切片HE染色后光鏡下觀察，正常組中，腎小體由腎小囊包繞腎小球組成，形態(tài)學(xué)表現(xiàn)正常，管腔清晰，腎小管形態(tài)規(guī)則，無炎癥浸潤（圖1A）；模型組腎組織切面蒼白，系膜細(xì)胞與系膜基質(zhì)增生，腎小管結(jié)構(gòu)不清晰并有明顯空泡變性損傷，周圍可見炎癥細(xì)胞浸潤（圖1B）；MMO低劑量組，系膜細(xì)胞與系膜基質(zhì)增生輕微抑制，腎小管空泡變性情況有所減輕，（圖1D）；陽性藥物組（圖1C）與MMO高劑量組（圖1E）腎小球形態(tài)與正常組差別不大，腎小管結(jié)構(gòu)清晰且腎小管空泡變性抑制效果優(yōu)于MMO低劑量組，炎癥細(xì)胞浸潤減少。

2.8 α-SMA、TGF-β1蛋白的表達(dá)

2.8.1 腎組織α-SMA蛋白表達(dá)

圖 2 小鼠腎組織α-SMA表達(dá)情況（×400）Fig. 2 Protein expression of α-SMA in kidney tissue (× 400)

如圖2所示，α-SMA蛋白陽性表達(dá)為棕褐色，位于細(xì)胞質(zhì)。正常組僅有少量表達(dá)（圖2A）；模型組陽性部位大量表達(dá)于腎小管中，棕褐色顏色較深（圖2A）；MMO低劑量組（圖2D）陽性表達(dá)與模型組相比大量減少；MMO高劑量組（圖2E）α-SMA蛋白陽性表達(dá)部位比低劑量組更少，并與陽性藥物組（圖2C）差別不大。說明MMO可減少α-SMA在腎臟中的表達(dá)。

2.8.2 腎組織TGF-β1蛋白表達(dá)

圖 3 小鼠腎組織TGF-β1表達(dá)情況（×400）Fig. 3 Protein expression of TGF-β1 in kidney tissue (× 400)

免疫組化法顯示MMO對(duì)各組小鼠腎組織TGF-β1蛋白表達(dá)影響如圖3所示，TGF-β1蛋白陽性表達(dá)為棕黃色，位于細(xì)胞質(zhì)。正常組僅少量表達(dá)于腎小管中（圖3A）；模型組腎小管中大量表達(dá)，顏色較深（圖3B）；陽性藥物組少量表達(dá)（圖3C）；MMO低劑量組表達(dá)情況與模型組無太大差異，顏色稍淺（圖3D）；MMO高劑量組表達(dá)量比陽性藥物組更少，僅有個(gè)別細(xì)胞表達(dá)（圖3E）。

3 討 論

近年來，國內(nèi)外也有關(guān)于活性肽緩解腎毒性的報(bào)道。田穎剛等[16]發(fā)現(xiàn)絲羽烏骨雞活性肽能降低治療組小鼠血清尿素氮、血清肌肝的含量，使腎組織勻漿中MDA含量下降，SOD、GSH-Px活力增高，初步證實(shí)適量的羽烏骨雞活性肽對(duì)順鉑所致小鼠腎毒性具有很好的防護(hù)作用。孫青[17]以高脂飲食誘導(dǎo)高脂血癥大鼠，在整體、蛋白、細(xì)胞因子等各個(gè)水平上進(jìn)行探討，發(fā)現(xiàn)大豆肽具有調(diào)節(jié)血脂代謝及抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。由于海洋肽類藥物具有分子質(zhì)量小、結(jié)構(gòu)簡單、副作用小、無免疫原性、活性高等優(yōu)點(diǎn)。因而，從海洋生物中提取護(hù)腎保腎活性物質(zhì)是開發(fā)藥源的重要途徑之一。Nasri等[18]對(duì)蝦虎魚蛋白水解物進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其水解物可有效改善高脂飲食導(dǎo)致的大鼠腎損傷。趙海峰等[19]曾對(duì)海洋膠原肽對(duì)腺嘌呤所致的大鼠慢性腎損傷進(jìn)行研究，以深海鮭魚的魚皮為主要原材料，生物酶法制備混合寡肽，灌胃小鼠。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：海洋膠原肽干預(yù)組小鼠不同時(shí)間點(diǎn)中血清肌肝、尿素氮較模型組大鼠血清的相應(yīng)指標(biāo)明顯降低，而肌醉清除率則明顯高于模型組，超微結(jié)構(gòu)的改變也較模型組減輕。

本研究按提取條件提取所需量的MMO，將小鼠分組、給藥。小鼠體質(zhì)量指標(biāo)與腎臟指數(shù)指標(biāo)顯示：模型組體質(zhì)量增幅明顯高于正常組與各藥物組，小鼠腎臟指數(shù)顯著升高；而各藥物組小鼠體質(zhì)量增幅下降，腎臟指數(shù)均低于模型組。由此說明造模較為成功，MMO可降低小鼠的腎臟指數(shù)。

有研究表明長期高脂飲食會(huì)使機(jī)體脂肪代謝異常，引起高脂血癥，其主要是以LDL-C、TC、TG含量的上升，HDL-C含量下降為主要特征[20]。高脂血使脂質(zhì)在腎臟沉積，直接損傷腎臟。人體中TC、TG主要在肝臟中合成，兩者的血清濃度反映出脂代謝的水平。HDL可將周圍組織TC運(yùn)輸?shù)礁闻K，再轉(zhuǎn)化為膽汁酸或通過膽汁從腸道排出，所以HDL-C濃度與動(dòng)脈管腔狹窄程度呈負(fù)相關(guān)。LDL可以將膽固醇從肝臟運(yùn)輸至外周組織細(xì)胞，當(dāng)其含量過高時(shí)，它所攜的TC便會(huì)在動(dòng)脈壁堆積而引起動(dòng)脈硬化，故而LDL-C濃度與動(dòng)脈管腔狹窄程度呈正相關(guān)[21]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)模型組小鼠TC、TG、LDL-C含量顯著升高，HDL-C含量下降，AI指數(shù)顯著升高，說明高脂飲食誘發(fā)高脂血癥，高血脂繼而損害全身動(dòng)脈產(chǎn)生動(dòng)脈粥樣硬化，而MMO可有效降低小鼠血清TC、TG、LDL-C含量，升高HDL-C含量，并降低AI指數(shù)，降幅達(dá)到67.27%。說明MMO可減輕高脂血癥。

很多研究發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激在腎損傷中也發(fā)揮著重要作用[22-23]。脂質(zhì)過氧化會(huì)產(chǎn)生活性氧，而過量活性氧會(huì)損傷細(xì)胞、組織，加重動(dòng)脈粥樣硬化和腎病的發(fā)生，SOD與GSH-Px活力可以反映出機(jī)體抗氧化能力，MDA是脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，多集中沉積于腎臟、肝臟、睪丸、心肌等組織細(xì)胞內(nèi)，能破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)使細(xì)胞死亡，反應(yīng)出機(jī)體受自由基損傷程度[24]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：模型組腎勻漿SOD與GSH-Px活力下降，與MDA含量增多相一致，MMO高劑量組GSH-Px、SOD活力與模型組相比，顯著升高（P＜0.05），MDA含量則顯著降低（P＜0.05），因此，MMO可提高小鼠腎臟抗氧化水平，減輕小鼠腎損傷。

脂代謝紊亂導(dǎo)致的脂質(zhì)沉積、腎臟系膜基質(zhì)增多、腎小球系膜擴(kuò)張以及巨噬細(xì)胞增殖和聚集等最終可導(dǎo)致腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化[25]。本實(shí)驗(yàn)通過HE染色，觀察MMO對(duì)腎臟病理學(xué)影響，高脂飼料組小鼠腎臟損傷嚴(yán)重，主要體現(xiàn)在腎組織切面蒼白，系膜細(xì)胞與系膜基質(zhì)增生，腎小管結(jié)構(gòu)不清晰并有明顯空泡變性損傷，周圍可見炎癥細(xì)胞浸潤；MMO給藥組則明顯改善了腎臟受損情況，腎濁腫減輕，系膜細(xì)胞與系膜基質(zhì)增生有所抑制，腎小管空泡變性癥狀減輕，MMO高劑量組與陽性藥物組腎臟形態(tài)差別不大。

腎小管間質(zhì)纖維化是各種病因?qū)е碌穆阅I臟疾病的主要特征[26]。腎組織中α-SMA、TGF-β1的大量表達(dá)與腎間質(zhì)纖維化、腎小球硬化、腎功能喪失等有明顯的相關(guān)性[27]。有研究表明腎小管上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）是腎小管間質(zhì)纖維化的重要機(jī)制之一[28-29]。即是指腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞（myofibro-blast，MF）、纖維細(xì)胞而失去上皮細(xì)胞的特性。這一過程涉及4 個(gè)關(guān)鍵步驟：1）上皮細(xì)胞失去極性和黏附特性；2）重新表達(dá)α-SMA。正常情況下上皮細(xì)胞表達(dá)的是角蛋白（cytokeratin，CK），在EMT過程中，CK表達(dá)降低，α-SMA及波形纖維蛋白作為間充質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志表達(dá)量增多，結(jié)構(gòu)蛋白重組成為MF；3）腎小管基底膜破裂；4）細(xì)胞遷移、侵襲力增強(qiáng)。MF進(jìn)入間質(zhì)，細(xì)胞外基質(zhì)增多，形成腎小管間質(zhì)纖維化[30-31]。在EMT的調(diào)節(jié)因子中，TGF-β1被認(rèn)為是最主要的促纖維化因子[32-33]，在腎小管和腎小球足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過程中發(fā)揮著重要作用[34]。有研究證實(shí)，腎小管上皮細(xì)胞在不同濃度TGF-β誘導(dǎo)下，逐漸喪失“鋪路石樣”狀態(tài)而轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維細(xì)胞表型[35]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明：高脂飼料組腎組織中α-SMA、TGF-β1表達(dá)量明顯增加，說明高脂飲食可誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞-間充質(zhì)的纖維化而引進(jìn)慢性腎病變，而應(yīng)用MMO后，α-SMA、TGF-β1的表達(dá)明顯下降，結(jié)合腎的HE染色結(jié)果，認(rèn)為由于MMO組的腎損傷程度小于模型組，腎小管上皮細(xì)胞的間質(zhì)纖維化減輕，這是導(dǎo)致α-SMA和TGF-β1表達(dá)下降的原因。至于MMO通過何種信號(hào)途徑導(dǎo)致α-SMA和TGF-β1表達(dá)下降需要以后的實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，高脂飲食能引起高脂血癥，提高小鼠血清AI指數(shù)，降低腎臟抗氧化酶活性，使α-SMA、TGF-β1表達(dá)量增加，促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的發(fā)生；MMO則可改善小鼠高血脂癥狀，提高腎臟抗氧化水平，緩解腎小管間質(zhì)纖維化，從而保護(hù)腎臟免受損傷。