血液樣本在不同處理?xiàng)l件下促腎上腺皮質(zhì)激素測(cè)定的穩(wěn)定性分析*

孔麗蕊，吳 風(fēng)，黃亨建

(1.成都市郫都區(qū)中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，成都 611730;2.四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科，成都 610041)

促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormore，ACTH)是垂體前葉分泌的一種由39個(gè)氨基酸殘基組成的多肽化合物，是維持腎上腺正常形態(tài)和功能的激素，在下丘腦-垂體-腎上腺軸的功能調(diào)節(jié)中起重要的作用。ACTH在血漿中含量極低，半衰期短，降解快，對(duì)標(biāo)本采集、運(yùn)送、檢測(cè)時(shí)間等都有特別要求。國(guó)際臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化組織要求，采集ACTH標(biāo)本應(yīng)采用冰凍乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)管，采集后冰浴送檢，低溫離心機(jī)分離血漿和血細(xì)胞，然后立即用塑料或硅化玻璃分裝冷凍保存或冰凍長(zhǎng)期保存［1］。但檢測(cè)前對(duì)血液的不同處理方式影響ACTH穩(wěn)定性的分析鮮見(jiàn)報(bào)道，本研究評(píng)價(jià)標(biāo)本采集后，血漿處理方式(離心血漿分離、離心血漿不分離和全血組)、保存溫度(4℃和 22℃)及存放時(shí)間(0，2，4，12，24 h)對(duì)血漿中ACTH濃度的影響。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇本實(shí)驗(yàn)室自愿者2例，體檢指標(biāo)正常，年齡22～24歲。

1.2 研究方法 受檢者于早晨8:00在無(wú)菌條件下真空負(fù)壓采集靜脈血2～3 ml于EDTA抗凝管，各采集六管。根據(jù)血漿不同處理方式將每位受檢者血液分為三組，A組:低溫離心分離血漿置于EP管;B組:低溫離心后不分離血漿;C組:全血，只在測(cè)量時(shí)將其離心，檢測(cè)完后混勻。每組共四管標(biāo)本，其中兩管標(biāo)本4℃保存，另兩管標(biāo)本22℃保存。A，B，C 三組各四管標(biāo)本分別于 0，2，4，12 和 24 h，Roche601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)ACTH兩次，計(jì)算平均值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 測(cè)定血漿不同處理方式的每組不同時(shí)間點(diǎn) ACTH 值，計(jì)算 2，4，12，24 h測(cè)定的ACTH結(jié)果與0 h測(cè)定ACTH結(jié)果的變化率，ACTH的質(zhì)量規(guī)范TEA要求為19%(來(lái)自于CAP PT基于當(dāng)前技術(shù)水平)，可接受的判斷標(biāo)準(zhǔn)為＜1/2 TEA。

2 結(jié)果

2.1 各組在24h內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)的測(cè)定ACTH結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 A，B，C組24 h內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)的ACTH結(jié)果(pg/ml)

2.2 A，B，C組ACTH結(jié)果變化率及趨勢(shì)圖 表2 和圖1。

表2 24 h內(nèi)A，B，C組ACTH值變化率(%)

圖1 ACTH測(cè)定在不同處理?xiàng)l件下的穩(wěn)定性

以0 h測(cè)定的ACTH結(jié)果為1(100%)，見(jiàn)表1，A組、B組兩種血漿處理方式且4℃，22℃時(shí)2 h變化率＜5.0%，4 h變化率＞5.0%;12 h變化率約為10%。C組全血在4℃和22℃時(shí)2 h變化率＞10%。說(shuō)明血漿的處理方式、溫度及時(shí)間影響ACTH的穩(wěn)定性。離心分離血漿和低溫離心后不分離血漿在4℃和22℃時(shí)ACTH可穩(wěn)定12 h，全血在4℃和22℃時(shí)ACTH穩(wěn)定性不超過(guò)2 h。

3 討論促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)是脊椎動(dòng)物腦垂體分泌的一種多肽類激素，它能促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)的組織增生以及皮質(zhì)激素的生成和分泌，臨床上常用其診斷或輔助診斷庫(kù)欣病、垂體前葉功能減退等疾?。?］。但ACTH水平在體外隨時(shí)間的延長(zhǎng)有逐漸下降的趨勢(shì)，主要是因?yàn)檠褐屑?xì)胞釋放的蛋白水解酶降解ACTH［3］。ACTH穩(wěn)定性與血漿處理方式、溫度及放置時(shí)間有關(guān)。Evans等［4］在研究抗凝血漿于不同保存溫度下檢測(cè)激素類項(xiàng)目標(biāo)本的穩(wěn)定性時(shí)指出，標(biāo)本在4℃保存時(shí)在18 h內(nèi)的檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定，在30℃保存時(shí)結(jié)果僅可穩(wěn)定8 h。林江［5］研究結(jié)果4℃時(shí)不同時(shí)間點(diǎn)的ACTH結(jié)果無(wú)趨勢(shì)性變化，但室溫放置的標(biāo)本呈下降的趨勢(shì)。本研究結(jié)果顯示，離心血漿分離組將血漿離心分離后放置于EP管不與血細(xì)胞接觸與離心血漿不分離組的ACTH穩(wěn)定時(shí)間相當(dāng)，兩種血漿處理方式12 h變化率約為10%。全血組未經(jīng)離心處置，由于血漿與血細(xì)胞充分混勻，血細(xì)胞中持續(xù)分泌的蛋白水解酶降解ACTH，使ACTH即使在4℃下保存降解也很快，2 h變化率約為10%。分析前質(zhì)量控制貫穿于患者采樣前準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、保存、運(yùn)送等多個(gè)過(guò)程。ACTH測(cè)定受采樣時(shí)間、采集樣品預(yù)處理方式等的影響，血漿ACTH極易被血液中肽酶水解成無(wú)免疫活性的代謝物。由此可見(jiàn)，分析前ACTH的測(cè)定穩(wěn)定性主要取決于快速血漿分離和迅速冷卻。根據(jù)離心血漿分離組與離心血漿不分離組的變化率可知，在12 h內(nèi)溫度對(duì)ACTH的穩(wěn)定性影響并不大，超過(guò)12 h后溫度的作用才體現(xiàn)出來(lái)。所以在急診時(shí)不需冷卻，只需快速離心分離出血漿即可，平診時(shí)建議血液采集后快速離心分離血漿并低溫保存［6］，以保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。