丹桔合劑的穩(wěn)定性研究

孟思思

【中圖分類號(hào)】R282.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-6851（2018）06--01

丹桔合劑是江蘇省名中醫(yī)謝昌仁主任的經(jīng)驗(yàn)方。由丹參、橘皮、制首烏、決明子、山楂五味藥組成。丹桔合劑通過防治血栓形成和溶解血栓對(duì)中風(fēng)有很好的預(yù)防和治療效果。穩(wěn)定性是不僅是評(píng)價(jià)藥物制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，而且是確定藥物制劑使用期限的主要依據(jù)，這關(guān)系到患者的健康及用藥安全，故丹桔合劑的穩(wěn)定性研究有著非常重要的意義。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

KQ-500型超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；ZF-2型三用紫外分析儀、TDL-40B型低速大容量離心機(jī)：上海安亭電子儀器廠；電子天平：梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；Agilent 1200 infinity series型高效液相色譜儀。

1.2 試藥

丹桔合劑由南京市中醫(yī)院藥劑科制劑室自制（批號(hào)是：20130114、20130115、20130116）。丹參對(duì)照藥材：批號(hào)120923-201113；丹酚酸B：批號(hào)111562-201212；陳皮對(duì)照藥材：批號(hào)120969-201109；橙皮苷：批號(hào)110721-201115；決明子對(duì)照藥材：批號(hào)111623-201207；橙黃決明素：批號(hào)111900-201202；以上均來自中國藥品生物制品檢定所。

2 穩(wěn)定性考察-長(zhǎng)期試驗(yàn)方法

長(zhǎng)期試驗(yàn)是在接近藥品的實(shí)際貯存條件下進(jìn)行，為制訂藥品的有效期提供依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)主要考察丹桔合劑長(zhǎng)期試驗(yàn)中第3個(gè)月的穩(wěn)定性。

3 丹桔合劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)應(yīng)該對(duì)下面項(xiàng)目進(jìn)行考察[1 ]：

3.1 性狀：

成品合劑為棕色澄清液體，貯存有搖之易散的沉淀。

3.2 鑒別：

3.2.1 丹參的薄層鑒別：

取本品3ml于離心管中，加6ml甲醇后混勻，超聲提取15分鐘后，以4500r/min離心10分鐘，上清液作供試品溶液；取丹酚酸B對(duì)照品，加75%甲醇制成每2g/L的對(duì)照品溶液；取丹參對(duì)照藥材0.2g，加25ml的75%甲醇，加熱回流1h，濾過得濾液濃縮至1ml，作丹參對(duì)照藥材溶液；取3ml丹參的陰性合劑，按供試品法制備法制成陰性溶液。分別吸取以上三種溶液5μl，點(diǎn)在硅膠GF254板上，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2：3：4：0.5：2）為展開劑展開，于紫外光燈（254m）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，斑點(diǎn)顯相同顏色，陰性制劑無干擾。如圖1。

3.2.2 陳皮的薄層鑒別：

取以上供試品溶液作陳皮供試品溶液；取橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成飽和溶液，作對(duì)照品溶液；取0.3g陳皮對(duì)照藥材，加10ml甲醇，加熱回流20分鐘后濾過，取濾液5ml濃縮至1ml，作陳皮對(duì)照藥材溶液；取3ml陳皮的陰性合劑，按丹參供試品溶液的制備方法制成陰性溶液。分別吸取2μl上述三種溶液，點(diǎn)在硅膠G板上，以乙酸乙酯-甲醇-水-濃氨水（30：5：1：2）為展開劑展開，于紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，斑點(diǎn)顯相同顏色，陰性制劑無干擾。如圖2。

3.2.3 決明子的薄層鑒別：

取本品12.5ml于錐形瓶中，加25ml甲醇后混勻，超聲提取15分鐘后，以4500 r/min離心15分鐘，取上清液，置水浴上蒸干后，加20ml水使殘?jiān)芙夂蠹欲}酸2ml，置水浴上加熱半小時(shí)，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次40ml，合并乙醚液并蒸干，加1ml三氯甲烷使殘?jiān)芙?，作供試品溶液；取橙黃決明素對(duì)照品，加無水乙醇-乙酸乙酯（2：1）制成1g/L對(duì)照品溶液；另取1g決明子對(duì)照藥材，同法制得對(duì)照藥材溶液；取12.5ml決明子的陰性合劑，按供試品溶液的制備方法制成陰性溶液。分別吸取2μl上述三種溶液，點(diǎn)在硅膠H板上，以石油醚（30～60℃）-丙酮（2：1）為展開劑展開，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，斑點(diǎn)顯相同顏色，陰性制劑無干擾，如圖3；置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榱咙S色，陰性制劑無干擾。如圖4

3.3 檢查

3.3.1 相對(duì)密度 用韋氏比重秤法測(cè)丹桔合劑的相對(duì)密度[2]，結(jié)果見表1。

3.3.2 PH值 用酸度計(jì)測(cè)丹桔合劑的PH。

3.4.含量測(cè)定：

3.4.1 橙皮苷的含量測(cè)定：用高效液相色譜法測(cè)定。

3.4.2 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相如表2；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：284nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μl。

3.4.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取4.989mg橙皮苷對(duì)照品到10ml容量瓶中，以甲醇定容刻度，搖勻，得橙皮苷對(duì)照品溶液。

3.4.4 供試品溶液的制備 精密量取0.5ml丹桔合劑后加4.5ml水，再精密加甲醇5ml，混勻；超聲15分鐘后混勻；以5000r/min離心15分鐘，得上清液作供試品溶液。

3.4.5 測(cè)定法 分別精密吸取10μl對(duì)照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測(cè)得結(jié)果見表3。

3.5 線性關(guān)系考察 取上述對(duì)照品溶液，分別稀釋成0.01996mg/ml、0.04989mg/ml、0.09978mg/ml、0.24945mg/ml、0.4989mg/ml對(duì)照品溶液，分別精密吸取上述濃度的橙皮苷對(duì)照品溶液10μl，在以上色譜條件下測(cè)定峰面積，結(jié)果見表4。

以各對(duì)照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性回歸，得：Y=16655X+89.954，R≈0.9993，橙皮苷在0.01996mg/ml～0.4989mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，見圖5：

3.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取10ul橙皮苷對(duì)照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6針，測(cè)定峰面積，得橙皮苷的RSD=0.35%（<3%），結(jié)果表明在此條件下精密度良好。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn)

制備供試品液5份，吸取已制備的供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定橙皮苷峰面積，得RSD=1.9%（<3%），結(jié)果表明此測(cè)定方法重復(fù)性良好。

3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

吸取已制備的供試品溶液，在0、2、4、6、12、18、24h分別進(jìn)樣，測(cè)定橙皮苷峰面積，得RSD=0.39%（<3%），結(jié)果表明在此條件下樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定。

3.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取已知橙皮苷含量的同一批合劑5份，精密加入等量的橙皮苷對(duì)照品，測(cè)定橙皮苷峰面積，計(jì)算橙皮苷的含量，按以下公式分別計(jì)算回收率（應(yīng)為95%～105%）和平均回收率，結(jié)果如表5（橙皮苷），表明此測(cè)定方法回收率良好?；厥章?（測(cè)得量-已知樣品量）/加入的標(biāo)準(zhǔn)品量

結(jié)論：由以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，在長(zhǎng)期試驗(yàn)中，丹桔合劑的性狀，相對(duì)密度，PH值，有效成分含量（以橙皮苷計(jì)算）都有變化，但是都在規(guī)定限度以內(nèi)，因此均符合要求，結(jié)果見表6。

5 討論

薄層色譜在展開過程中也需要注意溶劑的飽和度、溫度、濕度。溶劑的飽和度對(duì)分離效果影響較大，在飽和情況下，展開時(shí)間要比不飽和時(shí)的時(shí)間短，分離效果好，且可消除邊緣效應(yīng)。

在展開過程中最好保持溫度和濕度的恒定，因?yàn)檫@兩種因素的改變會(huì)影響Rf值和分離效果，降低重現(xiàn)性。

在薄層鑒別中，根據(jù)2015版《中國藥典》陳皮藥材項(xiàng)下鑒別方法選擇展開劑，但是結(jié)果不是太理想，斑點(diǎn)不是很清晰。后來依據(jù)溶劑的極性、溶劑對(duì)被分析物的溶解性，以及被分析物的結(jié)構(gòu)，通過查閱大量文獻(xiàn)和反復(fù)實(shí)驗(yàn)，重新選擇了展開劑。

確定以乙酸乙酯-甲醇-水-濃氨水（30：5：1：2）為展開劑，結(jié)果薄層板上的斑點(diǎn)清晰，陰性制劑無干擾。

參考文獻(xiàn)

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