藍(lán)孔雀群發(fā)支原體病的診斷與治療

呂 冉 程家球 李俊嫻 余樹培

(南京市紅山森林動(dòng)物園，南京，210028)

支原體(Mycoplasmaspp.)也稱霉形體，是分類上介于細(xì)菌和病毒之間的沒有細(xì)胞壁的原核生物，屬于柔膜菌綱(Mollicutes)，支原體目(Mycoplasmatales)支原體科(Mycoplasmata ceae)。雞毒支原體(MG)和滑液囊支原體(MS)是兩種重要的家禽病原[1]。國內(nèi)有關(guān)禽類支原體病的文章較多，但對(duì)藍(lán)孔雀感染支原體的病例報(bào)道較少。

1 發(fā)病情況

2015年11月27日，該基地3只藍(lán)孔雀出現(xiàn)張口呼吸，咳嗽，流漿液性鼻液等癥狀并發(fā)出“干啰音”，糞便較稀呈黃綠色；11月30日發(fā)現(xiàn)2只藍(lán)孔雀死亡；12月7日發(fā)病數(shù)量孔雀增至十幾只，呼吸音明顯，偶爾發(fā)出啰音，甩頭，單獨(dú)呆立較多，吃食較少，精神狀態(tài)逐漸變差，最終死亡。2015年12月至2016年3月初群養(yǎng)藍(lán)孔雀張口呼吸癥狀較多，隔離藍(lán)孔雀?jìng)€(gè)體食欲情況稍有好轉(zhuǎn)。3月之后，群養(yǎng)藍(lán)孔雀張口呼吸癥狀較少，死亡數(shù)量下降，趨于平穩(wěn)。藍(lán)孔雀發(fā)病過程中的總數(shù)量及死亡率變化如圖1所示。

圖1 藍(lán)孔雀發(fā)病過程中總數(shù)量及死亡率變化Fig.1 The total number of changes and the variationof mortality in blue peacocks

2 病理解剖

對(duì)病死藍(lán)孔雀進(jìn)行剖檢(圖2)，見其龍骨突出，氣管環(huán)嚴(yán)重出血；心臟表面有點(diǎn)狀出血點(diǎn)，肝臟質(zhì)脆，兩側(cè)肺臟大面積化膿、壞死；氣囊壁增厚、發(fā)黃，有干酪樣滲出物；小腸黏膜脫落、糜爛出血。

(A)為2015年11月30日死亡藍(lán)孔雀解剖氣管外觀(A)Shows the trachea of dead blue peacock on November 30,2015

(B)為2015年11月30日死亡藍(lán)孔雀解剖肺臟外觀(B) Dissected lung appearance of blue peacock on November 30,2015

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 病原體分離鑒定

用無菌棉簽采取病死藍(lán)孔雀的氣管或氣囊滲出物、鼻甲骨、鼻竇的滲出物或肺組織等作為病料，置支原體液體培養(yǎng)基(由美國BD公司提供)過濾器除菌之后，37℃培養(yǎng)5～7 d待培養(yǎng)基顏色變黃，立即接種至固體培養(yǎng)基(由美國BD公司提供)上培養(yǎng)3～4 d，如果顏色沒變化，每隔3 d傳1次，及吸取培養(yǎng)液到支原體液體培養(yǎng)基上，共傳3代，培養(yǎng)10 d后接種至固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。可在固體培養(yǎng)基上觀察到中央凸起呈荷包蛋樣的菌落[2]。將初步分離得到的病原菌送至南京天邦生物科技有限公司進(jìn)行進(jìn)一步做血清鑒定。

經(jīng)鑒定確診藍(lán)孔雀為支原體感染。

3.2 藥敏試驗(yàn)

采用MIC發(fā)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，在96空板的每孔加50 μL Frey’s肉湯；在第1孔加50 μL藥，混勻后，吸取50 μL到第2孔，依次稀釋到第11孔，吸去50 μL；每孔加濃度為103～14CFU/mL的細(xì)菌，振蕩混勻，37 ℃培養(yǎng)1周；觀察顏色變化情況，顏色變黃，說明藥沒有作用，不變色則藥有效果，記錄顏色開始變黃的稀釋度，報(bào)告結(jié)果[3]。

藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示支原體對(duì)泰樂菌素、替米考星、諾氟沙星均敏感，對(duì)頭孢菌素、阿莫西林、青霉素類均不敏感。

4 治療

發(fā)病初期，將有明顯臨床癥狀的藍(lán)孔雀及時(shí)隔離到新籠舍，口服復(fù)方新諾明，0.5片/只，連用3日。此后按群養(yǎng)藍(lán)孔雀用藥方式治療。

使用16.0%～23.0%過氧乙酸溶液對(duì)藍(lán)孔雀內(nèi)籠舍消毒，3～4次/周。將藍(lán)孔雀的外籠舍用竹網(wǎng)進(jìn)行圍擋，控制其活動(dòng)范圍；夜晚將內(nèi)籠舍燈光打開，吸引藍(lán)孔雀回內(nèi)籠舍，減少冬季低溫寒冷應(yīng)激。

對(duì)群養(yǎng)藍(lán)孔雀使用復(fù)合維生素預(yù)混劑，按0.1 g/kg水補(bǔ)充維生素，增強(qiáng)抵抗力。混飼的藥物：雙黃連連喂5 d，停藥3 d；泰樂菌素飼喂2個(gè)5 d療程中間停藥3 d；恩諾沙星用藥5 d，停藥3 d；10%多西環(huán)素+20%替米考星和諾氟沙星聯(lián)合用藥5 d為1療程。之后按泰樂菌素、恩諾沙星、10%多西環(huán)素+20%替米考星和諾氟沙星順序輪換交替使用，5 d為1療程，中間停藥3 d。

經(jīng)藥物有效治療，藥物療程持續(xù)近4個(gè)月后，藍(lán)孔雀的死亡率從9.3%下降到2.1%，張口呼吸癥狀的藍(lán)孔雀減少，病情得到控制。

5 討論與小結(jié)

支原體感染多能引起呼吸道臨床癥狀，主要表現(xiàn)為呼吸困難，咳嗽，逐漸消瘦，在長期感染情況下，機(jī)體抵抗力較弱的，最終導(dǎo)致死亡。該病容易與禽類傳染性支氣管炎、傳染性喉氣管炎、新城疫、大腸桿菌病混合感染，并能引起免疫缺陷。

支原體感染發(fā)病季節(jié)常在寒冷的冬季和初春，發(fā)病時(shí)間長，具有傳染性。南京地區(qū)屬于亞熱帶季風(fēng)氣候，四季分明，冬季濕冷天氣較多，容易引起支原體病的感染。另外群養(yǎng)藍(lán)孔雀內(nèi)籠舍面積狹小、通風(fēng)不暢導(dǎo)致氨氣較重，加之天氣寒冷抵抗力變差使動(dòng)物機(jī)體易感染此病。對(duì)此，我們對(duì)飼養(yǎng)結(jié)構(gòu)進(jìn)行調(diào)整，及時(shí)將帶病藍(lán)孔雀隔離治療，縮小外籠舍飼養(yǎng)面積。

支原體病在診斷上有一定難度，國內(nèi)有很多有關(guān)支原體病的報(bào)道，目前該病原的試驗(yàn)診斷方法主要有血清學(xué)(平板凝集、HI和ELISA)、病原分離和PCR法[3]。

該病主要采用長期抗生素治療，補(bǔ)充維生素等營養(yǎng)增強(qiáng)抵抗力，有一定的療效。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示支原體對(duì)供試6種抗菌藥物表現(xiàn)了不同的敏感度，其中對(duì)泰樂菌素、替米考星、諾氟沙星均敏感，對(duì)頭孢菌素、阿莫西林、青霉素類等藥物耐藥。有文章表明60～80 mg / L 劑量組 10% 磷酸替米考星可溶性粉可作為治療雞支原體病的最佳使用劑量，且能夠產(chǎn)生最佳的治療效果[4]。筆者在用藥過程中發(fā)現(xiàn)10%多西環(huán)素+20%替米考星和諾氟沙星聯(lián)合用藥在臨床上起到良好的效果。在藥物聯(lián)合用藥過程中，為避免病原體產(chǎn)生耐藥性和動(dòng)物機(jī)體中毒，采用長期用藥和輪換用藥的原則。

支原體自身的變異特性、免疫逃逸功能決定了禽支原體病難于控制，通過疫苗免疫和藥物治療很難消滅支原體，防控禽支原體病會(huì)是一項(xiàng)長期動(dòng)態(tài)、細(xì)致復(fù)雜的工作，各種措施中，免疫尤其是采用活疫苗免疫依然是綜合控制的核心和重點(diǎn)[5]。

“防重于治”是動(dòng)物疾病的主要防治原則。首先動(dòng)物的飼養(yǎng)管理占主要地位，應(yīng)將飼養(yǎng)密度控制在合適范圍之內(nèi)，冬季采取適當(dāng)措施為動(dòng)物防寒保暖；夏季則應(yīng)注意防暑降溫。其次應(yīng)保持動(dòng)物籠舍衛(wèi)生清潔，定期通風(fēng)和消毒，切斷支原體病的傳染源，仍舊是做好動(dòng)物疾病預(yù)防的重點(diǎn)工作。