我國(guó)東北與西部地區(qū)乳房炎牛奶中鏈球菌的鑒定及耐藥性比對(duì)

于忠娜，于雷，甄天元，王軍，韓榮偉

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)海都學(xué)院，山東萊陽(yáng) 265200）（2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東青島 266109）

抗生素治療費(fèi)用的提高、奶牛生產(chǎn)性能的下降以及牛奶中獸藥殘留風(fēng)險(xiǎn)的提升等使得牛乳腺炎成為奶牛行業(yè)中最具經(jīng)濟(jì)意義的疾病[1]。據(jù)世界糧農(nóng)組織統(tǒng)計(jì)，2017年1～7月份歐盟28國(guó)累計(jì)生產(chǎn)原料奶9,262.4萬(wàn)噸，1～9月份我國(guó)乳制品累計(jì)產(chǎn)量為2,282.8萬(wàn)噸，我國(guó)累計(jì)進(jìn)口液奶468,174噸[2]，2016年我國(guó)全年牛奶產(chǎn)量為3,602.2萬(wàn)噸[3]。但是牛奶生產(chǎn)受到眾多因素的影響，例如疾病等等，其中最主要的是乳腺炎。

乳鏈球菌是最常分離到的乳腺炎致病菌之一[4]，分為致病性和非致病性?xún)纱箢?lèi)。致病性鏈球菌主要分為無(wú)乳鏈球菌，停乳鏈球菌和乳房鏈球菌三大類(lèi)，其中無(wú)乳鏈球菌的致病性最高[5,6]，Z. Zhang等[7]從全國(guó)30個(gè)城市分離到的無(wú)乳鏈球菌占所有乳房炎致病菌的 38.6%。甚至在牛奶產(chǎn)量全球第四的巴西，也已在60.0%的奶牛群中發(fā)現(xiàn)無(wú)乳鏈球菌[8～10]。

因?yàn)榧?xì)菌自身具有抗藥性，另外生物在進(jìn)化中為抵御外來(lái)侵害，在復(fù)制過(guò)程中不斷經(jīng)歷基因突變，從而衍生出不受抗生素作用的下一代，產(chǎn)生耐藥菌。當(dāng)今抗生素的廣泛應(yīng)用及濫用，擴(kuò)大和加速了這一過(guò)程，“超級(jí)細(xì)菌”的出現(xiàn)就是明證。目前日益嚴(yán)重的細(xì)菌耐藥性已成為一個(gè)非常棘手的問(wèn)題[11]，尤其跟人類(lèi)密切相關(guān)的食品方面，耐藥性直接影響到了人類(lèi)健康。

我國(guó)對(duì)奶牛乳房炎的研究起步較晚，查閱資料發(fā)現(xiàn)，針對(duì)奶牛乳房炎致病菌的研究，目前較為深入的是金黃色葡萄球菌和大腸桿菌，而關(guān)于鏈球菌的研究較少而且不透徹。目前乳腺炎是用抗生素治療，當(dāng)不加選擇地使用抗生素時(shí)，可導(dǎo)致細(xì)菌出現(xiàn)耐藥性，同時(shí)牛奶中也會(huì)有獸藥殘留等安全隱患。本研究主要對(duì)我國(guó)東北地區(qū)（黑龍江內(nèi)蒙古）和西部（新疆）地區(qū)的乳房炎奶樣進(jìn)行鏈球菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)，對(duì)其耐藥性進(jìn)行比對(duì)，得出東北與西部地區(qū)耐藥菌分離情況及耐藥性的差異，從而為鏈球菌性乳房炎的防治和控制獸藥殘留提供依據(jù)，同時(shí)為患鏈球菌性乳房炎的牛奶收集者提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要材料

5.0%無(wú)菌脫纖維羊血培養(yǎng)基：取1 L蒸餾水加入33.0 g普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA）粉末中，加熱溶解沸騰三次后，分裝到三角瓶中，加幾粒玻璃珠，121 ℃滅菌15 min。待培養(yǎng)基溫度降至50 ℃左右，加入5.0%無(wú)菌脫纖維羊血，充分混勻后倒入滅菌的平板內(nèi)，現(xiàn)配現(xiàn)用。6.5% NaCl瓊脂培養(yǎng)基：將蒸餾水加入普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA）和6.5% NaCl中于電爐上加熱融化，煮沸3次后分裝，121 ℃滅菌15 min，等溫度降到約50 ℃倒入滅菌的平板中，現(xiàn)用現(xiàn)配。5.0%綿羊鮮血Mueller-Hinton瓊脂（MHA）培養(yǎng)基：取1 L蒸餾水加入42.0 g MHA培養(yǎng)基粉末中，加熱溶解，沸騰三次后，分裝到三角瓶中，加入幾粒玻璃珠，121 ℃滅菌15 min。待培養(yǎng)基溫度降至約50 ℃時(shí)無(wú)菌加入5.0%的無(wú)菌脫纖維羊血，充分混勻倒入滅菌的平板內(nèi)，現(xiàn)配現(xiàn)用。胰蛋白胨大豆肉湯（TSB液體培養(yǎng)基）：取1 L蒸餾水加入30.0 g TSB粉末中，加熱攪拌至完全溶解后分裝到三角瓶裝中置于高壓滅菌鍋內(nèi)121 ℃滅菌15 min，分裝到試管（20 mL/個(gè)）中備用。

HB4117-4凍干兔血漿，GB124 1%馬尿酸鈉細(xì)菌微量生化鑒定管，SN012七葉苷細(xì)菌微量生化鑒定管，抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)試紙片。試驗(yàn)所用生化試劑材料和藥敏片均購(gòu)自青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司。

1.2 主要儀器及設(shè)備

SW-CJ-1F（標(biāo)準(zhǔn)型）單人雙面垂直凈化工作臺(tái)，蘇州智凈凈化設(shè)備有限公司；QL-866旋渦混合器，海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司；BXM-30R立式壓力蒸汽滅菌器，上海博訊事業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；FCD-211XZ海爾電冰柜，青島海爾特種電器有限公司；DHP-9082型電熱恒溫培養(yǎng)箱，龍口市先科儀器公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品采集

采集患乳房炎奶牛乳樣，其中黑龍江地區(qū)50個(gè)，內(nèi)蒙古地區(qū)50個(gè)，新疆地區(qū)70個(gè)。采樣時(shí)，用溫水拭凈乳房，用75.0%酒精對(duì)乳頭消毒，無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)操作擠奶，棄去前兩把奶，收集樣品于滅菌試管中 40～50 mL，密封，標(biāo)明樣品編號(hào)，放置于冰盒中冷藏，待驗(yàn)。

1.3.2 鏈球菌的分離和純化

無(wú)菌吸取2 mL奶樣于20 mL TSB液體培養(yǎng)基中，振蕩均勻，36 ℃±1 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h增菌。挑取增菌液劃線接種于5.0%綿羊鮮血瓊脂培養(yǎng)基上，36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h。觀察血平板上菌落的生長(zhǎng)情況和形態(tài)特征，根據(jù)菌落的形態(tài)和溶血情況初步判斷有無(wú)鏈球菌。挑取表面濕潤(rùn)光滑，灰色并且有溶血現(xiàn)象的單個(gè)菌落進(jìn)行增菌并純化培養(yǎng)，36 ℃±1 ℃下培養(yǎng)18 h～24 h后進(jìn)行觸酶試驗(yàn)。

1.3.3 生化鑒定

1.3.3.1 觸酶試驗(yàn)

從純化后的TSB液體培養(yǎng)基中無(wú)菌吸取1 mL菌液于無(wú)菌離心管中，10,000 r/min離心5 min。用一次性滴管向離心管中滴加3.0% H2O22滴，立即觀察結(jié)果。若立即出現(xiàn)大量氣泡則觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，若無(wú)氣泡則為陰性。試驗(yàn)過(guò)程中以金黃色葡萄球菌作為對(duì)照。

1.3.3.2 血漿凝固酶試驗(yàn)

排除金黃色葡萄球菌對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，用凍干兔血漿進(jìn)行檢驗(yàn)。每支西林瓶中加入0.8 mL觸酶試驗(yàn)陰性的菌懸液輕微搖晃至完全溶解，置36 ℃±1 ℃下培養(yǎng)，6 h或12 h后觀察，若凝固則被判定為陽(yáng)性。

1.3.3.3 6.5% NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)

將血漿凝固酶試驗(yàn)陰性的菌懸液劃線接種于事先配置好的6.5% NaCl瓊脂培養(yǎng)基上，36 ℃±1 ℃下，培養(yǎng)24 h后觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。注意：本試驗(yàn)是排除腸球菌的干擾，腸球菌能在血平板上生長(zhǎng)良好，觸酶試驗(yàn)和凝固酶試驗(yàn)均為陰性，耐高濃度鹽，而鏈球菌在高濃度鹽環(huán)境中不生長(zhǎng)。

1.3.3.4 Christie-Atkins-Munch- Petersen (CAMP)試驗(yàn)

經(jīng)過(guò)篩選的觸酶試驗(yàn)陰性、血漿凝固酶試驗(yàn)陰性以及6.5% NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)陰性的菌懸液確定是鏈球菌屬。用接種環(huán)將金黃色葡萄球菌（ATCC25923）培養(yǎng)物在血瓊脂培養(yǎng)基上劃一條直線，將被檢菌菌懸液在垂直于金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物的方向劃一條線，二者相距3～5 mm，各鏈球菌劃線間距10～20 mm；37 ℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果。能在兩菌種垂直處出現(xiàn)箭頭狀溶血者為陽(yáng)性，否則為陰性。

1.3.3.5 生化鑒定管鑒定

純化培養(yǎng)物經(jīng)觸酶試驗(yàn)、凝固酶試驗(yàn)、6.5% NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)初步鑒定為鏈球菌后，進(jìn)一步進(jìn)行生化鑒定。若結(jié)果符合觸酶試驗(yàn)陰性，血漿凝固酶試驗(yàn)陰性和6.5% NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)陰性，即鑒定為鏈球菌屬。無(wú)乳鏈球菌為CAMP陽(yáng)性，不水解七葉苷和1.0%馬尿酸鈉；停乳鏈球菌為CAMP陰性，不水解七葉苷和1.0%馬尿酸鈉；乳房鏈球菌為CAMP陰性，水解七葉苷和1.0%馬尿酸鈉。

表1 藥敏試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Drug susceptibility test to determine the standard

1.3.4 藥敏試驗(yàn)

藥敏試驗(yàn)采用方法是紙片擴(kuò)散法。根據(jù)抗菌藥物抑菌圈直徑的大小來(lái)推斷細(xì)菌的耐藥性。藥物抑菌圈直徑的判定如表1所示。

2 結(jié)果與分析

2.1 鏈球菌的分離結(jié)果與分析

圖1 鏈球菌的α溶血現(xiàn)象和β溶血現(xiàn)象Fig.1 alpha-hemolysis and β-hemolysis of streptococcus

綿羊鮮血瓊脂培養(yǎng)基結(jié)果見(jiàn)圖1。

挑取表面濕潤(rùn)光滑，灰色并且有溶血現(xiàn)象的單個(gè)菌落進(jìn)行增菌并純化培養(yǎng)，利用觸酶試驗(yàn)和血漿凝固酶試驗(yàn)排除了金黃色葡萄球菌，用6.5% NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)排除腸球菌。去除雜菌后試驗(yàn)結(jié)果如下。

2.1.1 東北地區(qū)鏈球菌分離結(jié)果與分析

經(jīng)過(guò)增菌分離純化試驗(yàn)后，黑龍江地區(qū)50個(gè)患病乳樣樣品共分離出5株鏈球菌，分離率為10.0%，明顯低于沈陽(yáng)地區(qū)的23.1%[12]。內(nèi)蒙古地區(qū)50個(gè)患病乳樣共分離出13株鏈球菌，分離率為26.0%，比丁月霞等[13]報(bào)道的該地區(qū)鏈球菌分離率22.5%要稍高。

2016年下半年?yáng)|北地區(qū)共采集100個(gè)患乳房炎奶牛乳樣，分離出18株鏈球菌，平均分離率為18.0%。

2.1.2 西部地區(qū)鏈球菌分離結(jié)果與分析

2016年下半年西部地區(qū)共采集70個(gè)患病乳樣，分離出11株鏈球菌，分離率為15.7%，高于傅江濤等[14]報(bào)道的昌吉地區(qū)4.8%的分離率。

2.2 生化鑒定結(jié)果與分析

2.2.1 6.5% NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)果與分析

6.5%NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。有細(xì)菌生長(zhǎng)為陽(yáng)性，沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)為陰性。

圖2 6.5% NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)Fig.2 6.5% NaCl growth test

2.2.2 CAMP試驗(yàn)結(jié)果與分析

CAMP試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 CAMP試驗(yàn)Fig.3 CAMP test

2.2.3 鏈球菌生化鑒定結(jié)果與分析

鏈球菌生化鑒定結(jié)果比對(duì)見(jiàn)表2。

表2 鏈球菌生化鑒定結(jié)果比對(duì)表Table 2 Comparison of biochemical identification results of Streptococcus

東北（黑龍江、內(nèi)蒙古）與西部（新疆）兩個(gè)地區(qū)三個(gè)省份共分離出29株鏈球菌，具體鑒定結(jié)果見(jiàn)表3、表4和表5。

2.2.3.1 東北地區(qū)鏈球菌生化鑒定結(jié)果與分析

（1）黑龍江地區(qū)鏈球菌生化鑒定結(jié)果與分析

分離的5株鏈球菌菌株，與無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌和乳房鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比得出，5株試驗(yàn)結(jié)果不符合以上三種鏈球菌，均為其他鏈球菌。生化鑒定試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

（2）內(nèi)蒙古地區(qū)鏈球菌生化鑒定結(jié)果與分析

內(nèi)蒙古地區(qū)鏈球菌菌株生化鑒定結(jié)果見(jiàn)表 4。13株鏈球菌菌株中，1株乳房鏈球菌，12株其他鏈球菌。而丁月霞等[13]2015年報(bào)道該地區(qū)無(wú)乳鏈球菌占70.4%，停乳鏈球菌占11.1%，乳房鏈球菌占18.5%?？紤]到在乳房炎奶樣中鏈球菌發(fā)生一定類(lèi)型的改變，也有可能在不同牧場(chǎng)致病性菌株有一定差異。

表3 黑龍江地區(qū)鏈球菌菌株生化鑒定結(jié)果Table 3 Biochemical identification results of Streptococcus strains in Heilongjiang

表4 內(nèi)蒙古地區(qū)鏈球菌菌株生化鑒定結(jié)果Table 4 Biochemical identification of Streptococcus strains in Inner Mongolia

由表3和表4可知，東部地區(qū)兩省份共分離18株鏈球菌，其中乳房鏈球菌1株，平均分離率5.6%，無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌為0，其他鏈球菌17株，平均分離率94.4%。而Z. Zhang等[7]報(bào)道的無(wú)乳鏈球菌分離率為38.6%，與本文相差較大，考慮跟檢測(cè)、管理、預(yù)防，甚至其他病原體的存在有關(guān)[15]。

2.2.3.2 西部地區(qū)鏈球菌生化鑒定結(jié)果與分析

生化鑒定結(jié)果見(jiàn)表5。11株鏈球菌菌株中，4株乳房鏈球菌，平均分離率為 36.4%；無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌為0；7株其他鏈球菌，分離率63.6%。而傅江濤等[14]2015年報(bào)道分離的分別為無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌和乳房鏈球菌，考慮到致病性方面，可能鏈球菌發(fā)生一定類(lèi)型的轉(zhuǎn)化或者有新的致病類(lèi)型出現(xiàn)。

綜合表3～表5，我國(guó)東北部和西部地區(qū)致病性鏈球菌的分離率普遍較低。在分離的鏈球菌中，79.0%以上是除了無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌和乳房鏈球菌之外其他鏈球菌，無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌鑒定均為0。

2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.3.1 東北地區(qū)（黑龍江、內(nèi)蒙古）藥敏試驗(yàn)結(jié)果與分析黑龍江地區(qū)分離的5株鏈球菌和內(nèi)蒙古地區(qū)分離的13株鏈球菌分別進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，對(duì)29種常用獸藥的藥敏結(jié)果見(jiàn)表6。

表5 西部地區(qū)鏈球菌菌株生化鑒定結(jié)果Table 5 Biochemical identification results of Streptococcus strains in the western region

黑龍江地區(qū)平均耐藥率最高的是林可酰胺類(lèi)（80.0%），其中林可霉素、克林霉素耐藥率均為80.0%；其次是磺胺類(lèi)藥物（70.0%），其中甲氧芐啶耐藥率最高，為80.0%；氨基糖苷類(lèi)耐藥率為22.9%，其中阿米卡星耐藥率最高為 60.0%；β-內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥率22.5%，其中苯唑西林耐藥率為80.0%；四環(huán)素類(lèi)和氯霉素類(lèi)平均耐藥性均為 20.0%；對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)耐藥性較低為6.7%，而對(duì)氨芐西林和喹諾酮類(lèi)沒(méi)有耐藥性。引起內(nèi)蒙古地區(qū)奶牛乳房炎的鏈球菌全部具有不同程度的耐藥性，該地區(qū)菌株對(duì)磺胺類(lèi)藥物平均耐藥性最高，兩種藥物均 100%耐藥；其次對(duì)林可酰胺類(lèi)（61.5%）和四環(huán)素類(lèi)（57.7%）耐藥性都很高，兩大類(lèi)四種藥物的耐藥性都在50.0%以上，林可霉素的耐藥性甚至接近 70.0%；大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)平均耐藥性為51.3%，乙酰螺旋霉素耐藥性最高為69.3%；β-內(nèi)酰胺類(lèi)（41.4%）和氨基糖苷類(lèi)（39.6%）平均耐藥性相差不大，兩大類(lèi)藥中耐藥性最高的是頭孢西?。?4.6%）；氯霉素類(lèi)耐藥性為23.1%；喹諾酮類(lèi)平均耐藥性最低，為9.6%。眾多藥物中氨芐西林、阿莫西林、環(huán)丙沙星、恩諾沙星和氧氟沙星均無(wú)耐藥性檢出。而Yuexia Ding等[16]報(bào)道β-內(nèi)酰胺類(lèi)的耐藥率最高，在80.0%以上，與本文檢測(cè)結(jié)果（41.4%）相差較大；丁月霞等[13]檢測(cè)對(duì)氟喹諾酮類(lèi)的耐藥率相對(duì)較低，這與本文檢測(cè)值較接近。而劉琪等[17]報(bào)道分離菌對(duì)林可霉素耐藥率（68.8%）與本文接近。考慮到不同牛場(chǎng)因?yàn)橛盟幜?xí)慣的差異，菌株對(duì)不同藥物耐藥性并不相同，每個(gè)牛場(chǎng)實(shí)際用藥前都應(yīng)該進(jìn)行細(xì)菌藥物敏感性檢測(cè)。

數(shù)據(jù)分析顯示，東北地區(qū)鏈球菌對(duì)甲氧芐啶耐藥菌最多（94.4%）、磺胺異噁唑耐藥菌（88.9%）、苯唑西林耐藥菌（77.8%）、林可霉素耐藥菌（72.2%）和頭孢西丁耐藥菌（72.2%）、克林霉素和鏈霉素、克林霉素耐藥菌（61.1%）檢出率較高。

表6 東北地區(qū)乳房炎奶樣中鏈球菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果Table 6 Sensitivity of Streptococcus from Northeast China to antibacterial drugs

注：S-敏感；I-中介；R-耐藥。

表6可見(jiàn)，黑龍江地區(qū)奶牛乳房炎乳中所分離的5株鏈球菌，全部具有不同程度的耐藥性，且均為多重耐藥菌，最少的同時(shí)耐受3種藥物，最多的能耐受13種藥物，具體所耐受獸藥組合形式及對(duì)應(yīng)菌株數(shù)見(jiàn)表 7。內(nèi)蒙古地區(qū)耐藥情況中，本文中所分離鏈球菌與Yuexia Ding、劉琪等所分菌均為多重耐藥菌；在多重耐藥數(shù)上，本文所測(cè)菌株最少的耐受7種藥物，最多的耐受19種藥物，Yuexia Ding等[16]報(bào)道最少的耐兩種藥物，最多的耐7種藥物；劉琪等[17]報(bào)道最少的耐1種，最多的耐5種藥物。所有結(jié)果表明奶牛場(chǎng)中病原菌的多重耐藥性問(wèn)題非常嚴(yán)峻。具體結(jié)果見(jiàn)表8。

表7 黑龍江地區(qū)患乳房炎奶牛乳中鏈球菌多重耐藥情況Table 7 Multiple drug resistance of Streptococcus in milk mellitus in Heilongjiang Province

表8 內(nèi)蒙古地區(qū)患乳房炎奶牛乳中鏈球菌多重耐藥情況Table 8 Multiple drug resistance of Streptococcus in milk mellitus in Inner Mongolia

2.3.2 西部地區(qū)（新疆）藥敏試驗(yàn)結(jié)果與分析

圖4 西部地區(qū)與東北地區(qū)乳房炎奶樣中鏈球菌對(duì)八大類(lèi)藥物耐藥情況比較Fig.4 Comparison of resistance of Streptococcus to eight major drugs in mellitus milk in western China and Northeast China

西部地區(qū)乳房炎奶樣中所分離 11株鏈球菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表 9。數(shù)據(jù)分析表明，西部地區(qū)鏈球菌檢出菌對(duì)青霉素G（72.7%）、甲氧芐啶（90.9%）、苯唑西林（81.8%）、磺胺異噁唑（72.7%）耐藥性較高。而傅江濤等[12]報(bào)道昌吉地區(qū)某牛場(chǎng)的耐藥性對(duì)頭孢唑啉敏感率最高(50.0%)，慶大霉素敏感率最低(31.3%)，本試驗(yàn)顯示耐藥性最高的是甲氧芐啶（90.9%），耐藥性最低的是頭孢哌酮、氨芐西林、頭孢噻肟、多西環(huán)素、大觀霉素和新霉素，均未有耐藥性檢出。該地區(qū)所測(cè)菌株最少的耐受3種藥物，最多的耐受12種藥物，具體結(jié)果見(jiàn)表10。

大類(lèi)藥物藥敏結(jié)果見(jiàn)圖 4。東北地區(qū)分離得到的鏈球菌除了對(duì)磺胺類(lèi)（85.0%）和林可酰胺類(lèi)（70.8%）藥物耐藥性非常高外，對(duì)其他類(lèi)別藥物都有不同程度耐藥性，均在15.0%～32.0%之間，而喹諾酮類(lèi)耐藥性相對(duì)較低（9.6%）。西部地區(qū)檢出率較高的耐藥菌主要是磺胺類(lèi)耐藥菌（81.8%），其次是林可酰胺類(lèi)耐藥菌（70.8%），其他種類(lèi)均在16.0%～37.0%之間，四環(huán)素類(lèi)和氯霉素類(lèi)相對(duì)較低（9.1%）。然而，分離得到的耐藥菌對(duì)氨基糖苷類(lèi)（15.6%）、四環(huán)素類(lèi)（9.7%）、喹諾酮類(lèi)（15.9%）和氯霉素類(lèi)（9.1%）等藥物卻較為敏感。

表9 西部地區(qū)乳房炎奶樣中鏈球菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果Table 9 Sensitivity of Streptococcus from western region of China to antibacterial drugs

表10 西部地區(qū)患乳房炎奶牛乳中鏈球菌多重耐藥情況Table 10 Multiple drug resistance of Streptococcus in milk mellitus in western region of China

5 AMOX,CIP,ENR,NOR,OFX 1(9. 1)6 PEN G,OXAC,TMP,SF,CLI,CHP PEN G,OXAC,TMP,SF,LIN,CLI 2(18.2)7 PEN G,OXAC,ASP,TMP,SF,KAN,CLI 1(9. 1)8 OXAC,ERY,ASP,AZM,TMP,SF,STR,AK 1(9. 1)9 PEN G,FOX,OXAC,ERY,AZM,NOR,TET,TMP,SF 1(9. 1)10 PEN G,OXAC,TMP,SF,GEN,STR,TOB,AK,LIN,CLI 1(9.1)12 PEN G,FOX,AMOX,CEF,ERY,ASP,TET,TMP,SF,GEN,TOB,LIN FOX,AMOX,OXAC,ERY,CIP,OFX,TMP,SF,STR,TOB,KAN,CLI 2(18. 2)

3 結(jié)論

3.1 綜上研究可見(jiàn)，我國(guó)東北地區(qū)與西部地區(qū)170批患乳房炎奶樣中總共分離出29株（17.1%）鏈球菌，分離率較高，東北地區(qū)分離率（18.0%）略高于西部地區(qū)；所分離菌株呈現(xiàn)高耐藥性和多重耐藥性特點(diǎn)，最高可同時(shí)耐受19種獸藥，東北地區(qū)鏈球菌平均耐藥性高于西部地區(qū)；兩個(gè)地區(qū)對(duì)磺胺類(lèi)藥物和林可酰胺類(lèi)藥物耐藥性最高，同時(shí)對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)和大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)也保持較高的耐藥性。乳房炎奶樣中鏈球菌的高分離率、強(qiáng)耐藥性和多重耐藥等問(wèn)題，給我國(guó)西部地區(qū)和東北地區(qū)奶牛健康養(yǎng)殖和生鮮乳中獸藥殘留帶來(lái)了安全隱患。針對(duì)這些問(wèn)題，提出如下建議：

3.2 針對(duì)患乳房炎奶牛金黃色葡萄球菌感染率高的問(wèn)題，有針對(duì)性開(kāi)展奶牛養(yǎng)殖和管理培訓(xùn)，使飼養(yǎng)者和管理者的認(rèn)識(shí)和技術(shù)得到提升，避免因飼養(yǎng)管理不當(dāng)造成感染；對(duì)奶牛進(jìn)行定期體檢，避免因隱性乳房炎或感染初期的乳房炎未被發(fā)現(xiàn)，而造成群體之間的感染。邀請(qǐng)專(zhuān)業(yè)機(jī)構(gòu)對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)的衛(wèi)生環(huán)境進(jìn)行評(píng)估，嚴(yán)格消毒制度，從根本上消滅潛在的污染源。依據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果，對(duì)奶牛乳房炎易發(fā)季節(jié)和易感染地區(qū)加大對(duì)鏈球菌的預(yù)警和防控，逐步降低鏈球菌的感染率。3.3 針對(duì)耐藥性強(qiáng)，且均為多重耐藥菌的問(wèn)題，建議采用新型的抗生素，解決鏈球球菌對(duì)原抗生素產(chǎn)生的耐藥性；在對(duì)患病奶牛進(jìn)行用藥之前，請(qǐng)專(zhuān)業(yè)機(jī)構(gòu)對(duì)奶牛感染的致病菌進(jìn)行分析鑒定，做到有的放矢，科學(xué)用藥；邀請(qǐng)科研單位對(duì)奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)鏈球菌耐藥性情況研究，為防止耐藥基因產(chǎn)生和轉(zhuǎn)移提供科學(xué)指導(dǎo)。