食品微生物檢驗菌落總數(shù)測定方法的效果觀察

馬國善

（遼寧省遼陽縣衛(wèi)生計生監(jiān)督局，遼寧 遼陽 111200）

近年來，食品安全問題層出不窮，國家相關(guān)部門開始加大對食品安全的監(jiān)管力度，食品微生物檢驗是保證食品安全工作的重要內(nèi)容之一[1]。以往對于食品中細菌總數(shù)的檢驗常使用測試紙片法和計數(shù)瓊脂傾注皿培養(yǎng)計數(shù)法，但在實際應用中，易出現(xiàn)細菌菌落混淆的情況，不利于檢測菌落總數(shù)，其檢測結(jié)果會出現(xiàn)一定的偏差。本次研究分別采用平板菌落計數(shù)法、菌落總數(shù)測定法、TTC培養(yǎng)基法對110份樣品進行檢測，現(xiàn)報道分析如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：2016年1月至2017年1月，選取疾控中心接收的食品樣品110份進行研究，110份食品樣品均來自于疾控中心接收到的食品樣品，分別采用平板菌落計數(shù)法、菌落總數(shù)測定法、TTC培養(yǎng)基法3種方法進行檢測。平板菌落計數(shù)法采用北京陸橋計數(shù)有限責任公司的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基進行檢驗；菌落總數(shù)測定采用美國3M公司生產(chǎn)的細菌總數(shù)測試片進行檢驗；TTC培養(yǎng)基法由北京陸橋計數(shù)有限責任公司提供，TTC瓊脂按照體積比100∶1的比例在瓊脂中加入0.5%的氯化三苯四氮唑，濃度為0.005%。

1.2 方法

1.2.1 平板菌落計數(shù)法：采用國家標準方法GB4789.2-2010 進行檢測，無菌狀態(tài)下取25 g食品樣品放入裝有225 mL生理鹽水的錐形瓶中，輕輕搖晃使其混勻，采用無菌吸管抽取1∶10樣品勻液1 mL慢慢注入到裝有9 mL生理鹽水的試管內(nèi)，輕輕搖晃使其混勻，并按照上述方法取1∶1000和1∶10000的樣品勻液。采用吸管吸取適宜稀釋度的樣品勻液分別注入到2個無菌平皿中，同時取1 mL空白稀釋液作為空白對照，然后將溫度為46℃的計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基15 mL注入到平皿中，輕輕搖晃使其混勻，待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，放入到恒溫（36±1） ℃中進行（48±2）h的培養(yǎng)。

1.2.2 菌落綜述測定方法：將測試片放于水平臺面上，去除附著的薄膜，采用與平板菌落計數(shù)法相同的方法制作不同稀釋度的樣品液放置于測試片中央位置，食品樣品各取1 mL，然后將蓋膜蓋好，待培養(yǎng)基凝固后，壓緊紙片，使樣品均勻分布在測試片上，每個稀釋度樣品均進行2片接種，放置于恒溫（36±1） ℃中進行（48±2）h的培養(yǎng)。

1.2.3 TTC培養(yǎng)基法：將1 mL濃度為0.5%的TTC溶液放入到100 mL瓊脂培養(yǎng)基中，制備TTC瓊脂培養(yǎng)基濃度為0.005%，接種與培養(yǎng)方法與菌落總數(shù)測定方法相同。

1.3 統(tǒng)計學分析：數(shù)據(jù)資料用SPSS19.5進行統(tǒng)計分析，計量資料用（±s）表示，用t檢驗；計數(shù)資料用（%）表示，用χ2檢驗，P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

平板菌落計數(shù)法、菌落總數(shù)測定法、TTC培養(yǎng)基法3種檢驗方法測定出的不合格率分別為9.09%、8.18%、10.00%，3種結(jié)果對比無明顯差異（P＞0.05）。見表1。

表1 對比3種不同檢測方法的不合格率

3 討 論

食品安全一直是我國民生關(guān)注的重點，近來年，食品安全問題頻繁出現(xiàn)，嚴重威脅了人們的飲食健康。食品在加工、運輸、儲存中會接觸到各種微生物，導致食品變質(zhì)，是威脅人們健康的重要因素之一。相關(guān)部門指出，將采用平板計數(shù)瓊脂代替營養(yǎng)瓊脂，同時對可能存在受損生物細胞存在的食品進行抽樣檢測，以此來保證食品安全[2]。

目前對食品中微生物菌落總數(shù)檢測中，常使用平板菌落計數(shù)法、菌落總數(shù)測定法、TTC培養(yǎng)基法3種檢驗方法，3種方法在本次研究中，其結(jié)果沒有太大差異，從應用價值上來說，3種檢驗方法都可推廣使用。本次研究中，平板菌落計數(shù)法、菌落總數(shù)測定法、TTC培養(yǎng)基法3種檢驗方法測定出的不合格率分別為9.09%、8.18%、10.00%，數(shù)據(jù)對比無統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。在實際操作中，TTC培養(yǎng)基法菌落、平板菌落計數(shù)法、菌落總數(shù)測定方法都具有較高的檢出率。由于部分細菌體積小，生長在瓊脂內(nèi)部，很難用肉眼觀察到，所以在計數(shù)中，往往不準確。大多數(shù)菌類都含有脫氫酶，TTC可以檢測脫氫酶脫下的氫，出現(xiàn)顏色由白變紅的現(xiàn)象，起到對細菌染色的目的，以便檢驗人員進行仔細觀察并計數(shù)[3]。另外，為了進一步提高檢測結(jié)果的準確性，可從以下幾個方面入手：①提高檢驗人員操作水平，規(guī)范檢驗操作，保證檢驗工作的有效性。②嚴格控制檢驗室內(nèi)環(huán)境，注重培養(yǎng)皿溫度與濕度，定期對檢驗儀器進行校對，保證檢驗工作的準確性。③嚴格把控檢驗樣品劑量與質(zhì)量，將配置好的樣品勻液妥善保存，放置于通風、干燥的環(huán)境中，對于需要冷藏的樣品，控制其溫度。④對于所有檢驗樣品，注明其使用的有效時間，超出使用期限的樣品不得參與檢驗。

綜上所述，平板菌落計數(shù)法、菌落總數(shù)測定法、TTC培養(yǎng)基法3種檢驗方法均具有較高的準確性和可行性，可根據(jù)環(huán)境要求選擇合適的檢驗方法。