疏肝解郁法對肝氣郁結(jié)型輕度認(rèn)知功能障礙患者端粒酶活性的影響

詹向紅 丁 瑩 劉 永 侯俊林 孫前明 關(guān)徐濤 潘玉穎

(河南中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450046)

輕度認(rèn)知功能障礙(MCI)是指有主觀、客觀記憶或認(rèn)知損害，但日常生活能力正常的狀態(tài)，是正常衰老與阿爾茨海默病(AD)之間的過渡階段。MCI患者是癡呆的高危人群，MCI患者以每年10%～15%的速度進展為AD，轉(zhuǎn)化率較正常老年人高10倍〔1〕?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明：MCI的危險因素主要包括社會人口因素、疾病、生活方式、基因、精神心理因素(焦慮、抑郁等)五個方面〔2～4〕。由于生活節(jié)奏加快、壓力過大造成的抑郁、焦慮等情緒問題引起的長期心理應(yīng)激會使下丘腦-垂體-腎上腺軸持續(xù)亢進、糖皮質(zhì)激素水平升高〔5〕，損傷海馬〔6〕，使認(rèn)知功能下降。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為，抑郁等情緒問題多屬肝氣郁結(jié)的范疇。而肝主疏泄，調(diào)暢情志及全身氣機，若情志不暢，肝疏泄失司，則全身氣機失調(diào)，血液運行不暢，精血清陽之氣不能上輸于腦，長此以往必然導(dǎo)致認(rèn)知功能的下降。研究發(fā)現(xiàn)長期心理應(yīng)激不僅使認(rèn)知功能損傷〔6〕，還導(dǎo)致端粒酶活性降低〔7〕。本研究從端粒酶活性角度探討疏肝解郁法改善認(rèn)知功能的療效及其可能機制。

1 對象與方法

1.1研究對象 研究方案經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，研究對象年齡40～65歲，在河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院、第三附屬醫(yī)院體檢中心進行體檢的人員及鄭州市大型社區(qū)招募的志愿者。最終符合實驗要求并完成檢測的肝氣郁結(jié)型MCI患者共30例，平均年齡(52.80±5.93)歲，男10例、女20例，受教育程度為大專及以上4例、高中12例、初中7例、小學(xué)7例。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1MCI患者納入標(biāo)準(zhǔn) 符合國際MCI工作組標(biāo)準(zhǔn)(2004年)：①患者或其家庭成員有認(rèn)知損害的主訴；②患者或知情者報告在過去1年中患者認(rèn)知功能出現(xiàn)衰退；③臨床評估證實存在認(rèn)知障礙；④患者基本日常生活能力未受影響；⑤尚未進展為癡呆〔8〕。

1.2.2神經(jīng)心理量表 ①蒙特利爾認(rèn)知評估量表(MoCA)：用以判斷認(rèn)知功能，篩選 MCI 患者，滿分30分，MoCA得分<26分為納入標(biāo)準(zhǔn)，若受教育年限≤12年，則MoCA得分加1分以校正〔9〕。②簡易精神狀態(tài)檢查(MMSE)量表：用以排除癡呆，滿分30分，得分低于下述劃界分者為癡呆狀態(tài)，須排除：文盲組≤17分、小學(xué)組≤20分、中學(xué)或以上組≤24分〔10〕。③全面衰退量表(GDS)：用以判斷患者認(rèn)知功能損害程度，從正常到認(rèn)知下降非常嚴(yán)重分為7 級，納入標(biāo)準(zhǔn)為2～3級〔11〕。④日常生活活動(ADL)量表：對患者日常生活能力進行評估，分值20～80分，納入標(biāo)準(zhǔn)為ADL<26分〔12〕。入組MCI被試需同時符合以上要求。

1.2.3肝氣郁結(jié)證癥狀篩選標(biāo)準(zhǔn) 采用肝氣郁結(jié)證癥狀程度計分表：①胸脅、乳房、少腹脹痛；②抑郁太息；③咽有梗阻感；④痛經(jīng)、閉經(jīng)或月經(jīng)先后不定期；⑤脈弦。5項中1、2必備，具有3項或兼有1項脾虛癥狀(神疲體倦；納差；腹脹；便溏)，計分在6分以上者〔13〕。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn) ①不能配合調(diào)查及檢測者；②腦部腫瘤患者；③存在神經(jīng)系統(tǒng)疾病或精神疾病病史者；④患有可能影響腦功能或影響認(rèn)知功能評價的重要臟器病變者；⑤目前診斷為活動性癲癇者；⑥癡呆患者；⑦服用影響認(rèn)知功能藥物者。

1.4藥物干預(yù) 因肝木易乘脾土，臨床上肝郁常與脾虛并見，“見肝之病，知肝傳脾，當(dāng)先實其脾氣”，故選用疏肝解郁、健脾養(yǎng)血的經(jīng)典方藥逍遙丸進行治療。逍遙丸(河南宛西制藥)，8粒/次，3次/d，口服，持續(xù)用藥12 w，每月定期隨訪。

1.5試驗儀器和試劑 994型-86℃超低溫冰箱(美國熱電)；K30臺式多功能高速冷凍離心機(美國Sigma公司)；全波長自動酶標(biāo)分析儀(美國熱電)；HPS-250生化培養(yǎng)箱(哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司)；1575自動酶標(biāo)洗板機(美國熱電)。端粒酶活性試劑盒(Merck Millipore S7710)。

1.6端粒酶活性檢測 被試空腹肘靜脈采血，用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法對外周血單個核細(xì)胞(PBMC)端粒酶活性進行分析，按照說明書進行檢測。

1.7統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件進行配對t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1MoCA得分 與用藥前相比，患者用藥后的視空間與執(zhí)行、注意、語言、抽象、延遲回憶、命名、總分均顯著改善(P<0.05)；但定向得分差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 肝郁 MCI患者用藥前后MoCA結(jié)果分，n=30)

2.2端粒酶活性檢測結(jié)果 患者用藥后的端粒酶活性〔(12.81±8.86)U/g〕顯著高于用藥前〔(9.64±4.52)U/g,P<0.05〕。

3 討 論

端粒是一種特異結(jié)合蛋白與真核細(xì)胞染色體末端DNA重復(fù)序列形成的復(fù)合體，可維持染色體穩(wěn)定，但端粒會隨著DNA復(fù)制、細(xì)胞分裂而不斷縮短。端粒長度決定細(xì)胞分裂的次數(shù)，超過分裂極限后細(xì)胞就自然衰老死亡。端粒酶是使端粒延伸的反轉(zhuǎn)錄DNA合成酶，是一種由RNA 和蛋白質(zhì)組成的核糖核酸-蛋白的復(fù)合物。端粒酶主要功能是延伸端粒DNA，修復(fù)斷裂的染色體末端，使染色體保持完整。細(xì)胞內(nèi)端粒酶活性降低或缺失會導(dǎo)致端?？s短，引發(fā)細(xì)胞衰老〔14〕，端粒酶活性的下降反映了全身的衰老。

近些年來已有研究發(fā)現(xiàn)外周血端粒酶活性與認(rèn)知衰老之間也存在聯(lián)系。Wolkowitz等〔15〕研究發(fā)現(xiàn)重度抑郁癥患者PBMC端粒酶活性與海馬體積存在顯著正相關(guān)。海馬是學(xué)習(xí)記憶的關(guān)鍵部位，海馬體積縮小通常意味著認(rèn)知功能的下降。因此，可以認(rèn)為嚴(yán)重抑郁癥患者的認(rèn)知功能減退與PBMC端粒酶活性降低關(guān)系密切。其可能機制是當(dāng)PBMC端粒酶活性下降時免疫系統(tǒng)功能衰退〔16〕，而免疫功能下降，可能導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)增加，氧自由基生成增多，攻擊神經(jīng)細(xì)胞致其死亡，使腦老化進程加速，認(rèn)知功能降低。劉江紅等〔17〕對多篇文獻的分析也證明了免疫功能減弱是認(rèn)知功能下降的可能機制。Deng等〔18〕研究顯示體育鍛煉可以提高PBMC端粒酶活性，也有報道顯示，長期適當(dāng)體育鍛煉可以改善認(rèn)知功能〔19〕，由此推測認(rèn)知功能有可能隨著端粒酶活性的升高而改善。MoCA是目前應(yīng)用廣泛的認(rèn)知功能測評量表，其得分改變可以反映認(rèn)知功能變化。本研究結(jié)果顯示認(rèn)知功能改善與PBMC端粒酶活性提高有關(guān)。

氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、心理應(yīng)激等都可降低端粒酶活性〔20〕。Epel等〔7〕研究表明，長期遭受心理應(yīng)激者PBMC端?？s短，端粒酶活性降低，即心理應(yīng)激是導(dǎo)致端粒酶活性下降的原因之一。本研究發(fā)現(xiàn)采用疏肝解郁代表方藥逍遙丸對肝氣郁結(jié)型MCI患者進行干預(yù)后，患者促腎上腺皮質(zhì)激素下降，應(yīng)激狀態(tài)得到改善〔21〕，可以認(rèn)為疏肝解郁方藥可能是通過改善患者應(yīng)激狀態(tài)，從而使端粒酶活性得以提高。