梨小性迷向素原藥氣相色譜分析方法研究

徐成辰，唐慧敏，楊淑嫻，王 坤

（江蘇省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測(cè)試中心，南京 210036）

梨小性迷向素是一種昆蟲(chóng)性信息素，有效成分包括(Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯和(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯3個(gè)組分。其為生物防治產(chǎn)品，有效成分與自然界中梨小食心蟲(chóng)分泌的性信息素結(jié)構(gòu)相似，通過(guò)有效阻斷昆蟲(chóng)間的信息交流，影響雄蛾對(duì)雌蛾位置的辨別，從而干擾昆蟲(chóng)雌雄蟲(chóng)的交配，從根本上壓低和控制梨小食心蟲(chóng)的種群發(fā)展，達(dá)到防治梨小食心蟲(chóng)的目的[1]。梨小性迷向素是一種低毒產(chǎn)品，現(xiàn)已在世界多個(gè)國(guó)家和地區(qū)廣泛使用，具有持效期長(zhǎng)，無(wú)防治盲區(qū)，綠色環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。

經(jīng)文獻(xiàn)檢索，國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)梨小性迷向素色譜分析方法的相關(guān)報(bào)道。本文采用氣相色譜法，對(duì)梨小性迷向素原藥中的有效成分進(jìn)行定量測(cè)定。該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速，分離效果較好，可以作為企業(yè)生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)量控制和質(zhì)檢機(jī)構(gòu)分析檢測(cè)的參考方法。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試劑和溶液

三氯甲烷：色譜純；梨小性迷向素標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.2%［(Z)-8-十二碳烯-1-醇0.9%、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯8.0%、(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯90.3%］，常州寧錄生物科技有限公司提供；(Z)-8-十二碳烯-1-醇標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)96.8%；(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%；(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.6%；正十八烷（內(nèi)標(biāo)物）：分析純，不含干擾分析的雜質(zhì)；梨小性迷向素原藥，常州寧錄生物科技有限公司提供。

1.2 儀器

Agilent 7890A氣相色譜儀，具氫火焰離子化檢測(cè)器；進(jìn)樣系統(tǒng)，具有分流裝置和石英內(nèi)襯裝置；色譜工作站；色譜柱：DB-210石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）。

1.3 色譜操作條件

溫度：柱溫80℃，以5℃/min升至180℃，保持2 min，并設(shè)置后運(yùn)行溫度240℃，保持10 min；進(jìn)樣口溫度240℃；檢測(cè)器溫度260℃。氣體流量（mL/min）：載氣（N2）1.0、氫氣35、空氣350、尾吹（N2）25。分流比：30∶1。進(jìn)樣量：1.0 μL。保留時(shí)間：(Z)-8-十二碳烯-1-醇約為11.8 min，內(nèi)標(biāo)物約為14.2 min，(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯約為15.3 min，(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯約為15.6 min。

梨小性迷向素原藥與內(nèi)標(biāo)物氣相色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 梨小性迷向素原藥與內(nèi)標(biāo)物的氣相色譜圖

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 內(nèi)標(biāo)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取3.0 g（精確至0.000 2 g）正十八烷，置于1 000 mL容量瓶中，用三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻備用。

1.4.2 標(biāo)樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取梨小性迷向素標(biāo)樣0.1 g（精確至0.000 2g），置于25 mL容量瓶中，移液管準(zhǔn)確移入10 mL內(nèi)標(biāo)溶液，三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻備用。

1.4.3 試樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取梨小性迷向素原藥0.1 g（精確至0.000 2g），置于25 mL容量瓶中，移液管準(zhǔn)確移入10 mL內(nèi)標(biāo)溶液，三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻備用。

1.4.4 測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針中有效成分與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的相對(duì)變化小于1.5%，按標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液順序進(jìn)行測(cè)定。

1.4.5 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液以及前后2針標(biāo)樣溶液中(Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯、(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比分別進(jìn)行平均。試樣中(Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯和(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）按下式計(jì)算。

式中：γ1—標(biāo)樣中 (Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯、(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的平均值；γ2—試樣中(Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯、(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的平均值；m1—梨小性迷向素標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2—試樣的質(zhì)量，g；P—梨小性迷向素標(biāo)樣中(Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯、(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與分析

2.1 三組分鑒定和內(nèi)標(biāo)物的選擇

配制 (Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯和(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯3種標(biāo)樣溶液，在1.3色譜條件下分別進(jìn)樣，確定3種組分保留時(shí)間。同樣色譜條件下，對(duì)正十七烷、正十八烷、正十九烷和正二十烷等內(nèi)標(biāo)物進(jìn)行選擇，最終選定與梨小性迷向素3個(gè)組分能夠很好分離，且保留時(shí)間適宜的正十八烷為內(nèi)標(biāo)物。

2.2 色譜條件的選擇

根據(jù)梨小性迷向素3個(gè)組分的分子結(jié)構(gòu)和極性，選擇幾種不同極性的毛細(xì)管柱進(jìn)行測(cè)試，最終確定對(duì)順?lè)串悩?gòu)組分分離情況較好的DB-210為色譜柱。根據(jù)組分、雜質(zhì)和內(nèi)標(biāo)物的分離情況以及DB-210色譜柱的特性，優(yōu)化柱溫條件。確定采用初始柱溫80℃，以5℃/min升至180℃，保持2 min，設(shè)置后運(yùn)行溫度為240℃，保持10 min的程序升溫進(jìn)行分離和測(cè)定。因(Z)-8-十二碳烯-1-醇與另2個(gè)組分在DB-210毛細(xì)管柱上響應(yīng)因子不同，所以分別對(duì)3個(gè)組分進(jìn)行線性關(guān)系、精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)。

2.3 分析方法的線性關(guān)系試驗(yàn)

配制系列質(zhì)量濃度的標(biāo)樣溶液。準(zhǔn)確稱取梨小性迷向素標(biāo)樣0.04、0.07、0.1、0.12、0.15 g（精確至0.000 2 g），分別置于25 mL容量瓶中，移液管準(zhǔn)確移入10 mL內(nèi)標(biāo)溶液，三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以(Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯、(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量之比為橫坐標(biāo)，以峰面積之比為縱坐標(biāo)，建立坐標(biāo)系進(jìn)行線性分析。(Z)-8-十二碳烯-1-醇線性方程為y=0.7676x-0.00196，相關(guān)系數(shù)為0.999 7；(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯線性方程為y=0.817 2 x＋0.000 57，相關(guān)系數(shù)為0.999 7；(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯線性方程為y=0.797 1 x＋0.010 31，相關(guān)系數(shù)為0.999 7。結(jié)果表明，梨小性迷向素在1 528～5 813mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 分析方法的精密度試驗(yàn)

從同一產(chǎn)品中準(zhǔn)確稱取5個(gè)試樣，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，其結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析。(Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯和(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.021、0.019和0.130，變異系數(shù)分別為2.58%、0.23%和0.15%（見(jiàn)表1）。

表1 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.5 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)

從已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的梨小性迷向素原藥［(Z)-8-十二碳烯-1-醇0.82%、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯8.19%、(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯87.73%］中稱取5個(gè)試樣，分別添加一定質(zhì)量標(biāo)樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行測(cè)定。測(cè)得(Z)-8-十二碳烯-1-醇的平均回收率為102.61%，(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯的平均回收率為99.01%，(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯的平均回收率為99.55%（見(jiàn)表2）。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

本方法能夠測(cè)定梨小性迷向素原藥中的有效成分。方法線性關(guān)系良好，精密度、準(zhǔn)確度高，分離效果好，且操作簡(jiǎn)便、快速，是產(chǎn)品檢測(cè)較為理想的分析方法。