馬齒筧多糖對(duì)糖尿病腎病大鼠腎纖維化因子的影響

王苑蓉 葉大杰

（玉林市中西醫(yī)結(jié)合骨科醫(yī)院 廣西 玉林 537000）

糖尿病腎病（DN）是因腎臟長(zhǎng)期受高血糖損傷影響，導(dǎo)致微血管病變的一種糖尿病并發(fā)癥，是全球慢性腎衰竭的第一位原發(fā)病。近年隨著糖尿?。―M）人群不斷增加，DN的發(fā)病率也隨之上升[1]。DN的出現(xiàn)一般出現(xiàn)在糖尿病病程的后期，由于目前尚無(wú)對(duì)DN有特異性療效的藥物，故DM患者一旦進(jìn)入臨床期DN，大多數(shù)均會(huì)進(jìn)展為終末期腎功能衰竭，進(jìn)而導(dǎo)致死亡。DN臨床治療較為復(fù)雜，目前多采用控制血糖、抗氧化、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑等綜合治療，但仍難以阻止腎功能的持續(xù)減退[2]。因此，尋找開發(fā)對(duì)DN有特異性的治療藥物對(duì)DN的治療有著重要的意義。馬齒筧（Portulaca oleracea L.）為馬齒莧科一年生草本植物，是我國(guó)各地常見的野生植物，主要用于熱痢膿血、腸炎、菌痢、糖尿病等多種疾病的治療[3]。本研究通過(guò)建立DN大鼠模型，旨在考察馬齒筧多糖對(duì)DN大鼠腎纖維化因子的影響，為馬齒筧的開發(fā)和利用提供科學(xué)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1.材料

1.1 動(dòng)物

SD大鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，體重200±20g，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK（桂）2013-0023。

1.2 藥物及試劑

鏈脲佐菌素（STZ），sigma公司分裝，批號(hào)：SQ171；纈沙坦，杭州中美華東制藥有限公司，批號(hào)：160818；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子- β1（TGF-β1） ELISA試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號(hào)：B1710）；纖維連接蛋白（FN） ELISA試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號(hào)：B1708）。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

羅氏卓越型血糖儀（ACCU-CHEK Performa）；全自動(dòng)血生化分析儀（日立7100）；128C型酶標(biāo)儀（奧地利CliniBio公司）。

2.方法

2.1 DN模型的建立[4]

大鼠造模前12h禁食不禁水，尾靜脈注射STZ（130 mg?kg-1），注射72h后檢測(cè)其空腹血糖（FBG），F(xiàn)BG≥11.1 mol?L-1的大鼠可作為糖尿病模型。將成糖尿病模型的大鼠給予高脂飼料進(jìn)行喂養(yǎng)90 d建立DN模型。

2.2 分組及給藥

將DN大鼠隨機(jī)分為模型組、纈沙坦組（20mg?kg-1）、馬齒筧多糖（100mg?kg-1、200mg?kg-1、400mg?kg-1），每組 10 只，普通飲食喂養(yǎng)，連續(xù)灌胃給藥30d。另設(shè)空白組大鼠10只，普通飼料喂養(yǎng)，連續(xù)灌胃給與等體積生理鹽水30d。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)

于灌胃給藥d31腹主動(dòng)脈取血，使用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定大鼠血清中肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的含量。剝離腎臟，勻漿。ELISA試劑盒檢測(cè)腎臟中FN、TGF-β1的含量。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)均以±s表示，經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)，方差齊者采用t檢驗(yàn)，方差不齊者采用矯正t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.結(jié)果

3.1 馬齒筧多糖對(duì)DN大鼠血清肌酐、尿素氮的影響

與模型組相比，纈沙坦組和馬齒筧多糖給藥組大鼠血清中肌酐、尿素氮、尿蛋白的含量均有所降低（P＜0.05）。結(jié)果見表1。

表1 馬齒筧多糖對(duì)DN大鼠血清肌酐、尿素氮、尿蛋白的影響（±s，n=10）

注：*與模型比較，P＜0.05。

組別 劑量（mg?kg-1） 肌酐（mg?dl-1） 尿素氮（mg?dl-1）尿蛋白（mg?24h-1）正常 - 0.22±0.03* 13.27±1.85* 1.72±0.18*模型 - 0.61±0.08 40.49±3.41 7.94±1.22纈沙坦 20 0.29±0.04* 22.52±3.36* 2.53±0.75*馬齒筧多糖 100 0.42±0.03* 28.34±4.19* 5.36±1.07*200 0.32±0.03* 23.75±5.67* 3.98±0.23*400 0.26±0.04* 18.59±2.18* 2.74±0.25*

3.2 馬齒筧多糖對(duì)DN大鼠腎組織FN、TGF-β1的影響

與模型組相比，馬齒筧多糖各給藥組小鼠腎組織中FN、TGF-β1的含量降低（P＜0.05）。結(jié)果見表2。

表2 馬齒筧多糖對(duì)DN大鼠腎組織FN、TGF-β1的影響(±s，n=10)

表2 馬齒筧多糖對(duì)DN大鼠腎組織FN、TGF-β1的影響(±s，n=10)

注：與模型組比較，*P＜0.05。

組別 劑量（g·kg-1） FN（ng?ml-1） TGF-β1（ng?ml-1）空白 - 4.26±0.75* 1.64±0.22*模型 - 7.21±0.94 5.72±0.96纈沙坦 20 4.12±1.07* 2.29±0.84*馬齒筧多糖 100 5.83±1.29* 5.04±1.21*200 5.04±1.72* 4.52±1.02*400 4.56±1.14* 3.41±0.67*

4.討論

腎纖維化是一種以細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的異常沉積為特征的病理性病變，由炎癥反應(yīng)期、纖維化形成期、瘢痕形成期所構(gòu)成腎纖維化過(guò)程[5]。DN的臨床表現(xiàn)主要是蛋白尿的出現(xiàn)，免疫復(fù)合物沉積在腎臟，導(dǎo)致腎臟局部微循環(huán)障礙，進(jìn)而導(dǎo)致腎纖維化的形成。腎纖維化程度能反應(yīng)腎功能減退的程度，也決定患者的預(yù)后[6]。TGF-β1是致纖維化因子中最強(qiáng)的，其可通過(guò)自分泌和旁分泌兩種途徑誘導(dǎo)腎臟細(xì)胞肥大，參與成纖維細(xì)胞的活化、增生、轉(zhuǎn)化，降低基質(zhì)金屬蛋白酶的活性，減少其對(duì)ECM的降解，促進(jìn)ECM的積聚[7]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，馬齒筧多糖能改善DN大鼠的腎功能，減少尿蛋白，并減少纖維化因子FN、TGF-β1的含量，對(duì)DN大鼠腎臟有一定的保護(hù)作用。

[1]郭福團(tuán)，許雄偉，潘建峰，等.桑枝多糖對(duì)糖尿病腎病小鼠腎皮質(zhì)氧化應(yīng)激作用的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2016，32(8):1148-1152.

[2]陳關(guān)芬，辛麗芹.糖尿病腎病與合并糖尿病的非糖尿病腎病患者臨床特征及預(yù)后比較[J].山東醫(yī)藥，2016，56(46):59-61.

[3]丁懷偉，姚佳琪，宋少江.馬齒莧的化學(xué)成分和藥理活性研究進(jìn)展[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，25(10):831-838.

[4]Xiaohui Xu,Ni Zheng,Zhaoni Chen,et al.Puerarin,isolated from Pueraria lobata,(Willd.),protects against diabetic nephropathy by attenuating oxidative stress[J].Gene,2016,591(2):411-416.

[5]呂春燕，丁維俊.尿外泌體作為腎纖維化標(biāo)志物的進(jìn)展[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2017，33(16):2799-2801.

[6]邱丹丹，蔣松，潘瑜，等.血磷水平與糖尿病腎病患者腎臟損傷及遠(yuǎn)期預(yù)后的關(guān)系[J].腎臟病與透析腎移植雜志，2016，25(3):208-213.

[7]曾奇虎，楊萍，翁靜飛，等.外源性硫化氫對(duì)糖尿病腎病大鼠腎纖維化的影響及機(jī)制[J].山東醫(yī)藥，2017，57(46):34-37.