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    重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗免疫效果評(píng)估

    2018-08-06 07:20:40陳裕華朱建翠楊建宇何日文
    中國動(dòng)物檢疫 2018年8期
    關(guān)鍵詞:二價(jià)母源效價(jià)

    陳裕華,朱建翠,沈 丹,楊建宇,于 飛,何日文

    (廣州市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,廣東廣州 510440)

    禽流感病毒是正粘病毒科流感病毒屬單鏈負(fù)股RNA病毒[1]。禽流感病毒亞型眾多,病毒表面糖蛋白血凝素(HA)有16種(H1-H16),神經(jīng)氨酸酶(NA)有9種(N1-N9)。HA和NA的抗原變異是相互獨(dú)立的,各亞型之間缺乏交叉保護(hù),同一亞型病毒有不同的變異株[2]。高致病性禽流感是A型流感病毒引起的以感染禽類為主的烈性傳染病,世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為必須報(bào)告的動(dòng)物傳染病,我國將其列為一類動(dòng)物疫病。

    目前,各國采取的禽流感預(yù)防和控制措施各不相同。我國采用免疫和撲殺相結(jié)合的防控策略。疫苗免疫仍是我國當(dāng)前預(yù)防高致病性禽流感的重要手段。2005年我國開始實(shí)施H5N1亞型高致病性禽流感全面免疫政策。此后至今,疫苗毒株從Re-1株、Re-4株、Re-5株、Re-6株、Re-8株,更替到現(xiàn)在的Re-10株[3]。2017年1月,對(duì)雞具有高致病性的H7N9變異株被證實(shí),3月24日農(nóng)業(yè)部公布了我國第一起蛋雞H7N9高致病性流感疫情。2017年7月7日,農(nóng)業(yè)部辦公廳下發(fā)《農(nóng)業(yè)部關(guān)于切實(shí)做好全國高致病性禽流感秋季免疫工作的通知》(農(nóng)辦醫(yī)〔2017〕24號(hào)),要求各地在2017年秋季統(tǒng)一用重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)(以下簡(jiǎn)稱“H5+H7”二價(jià)滅活疫苗)替代重組禽流感病毒H5二價(jià)或三價(jià)滅活疫苗,對(duì)家禽實(shí)施免疫[4]。為更好地了解家禽H7N9流感的免疫效果,廣州市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所開展了田間 “H5+H7”二價(jià)滅活疫苗免疫效果評(píng)估。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 肉雞(江村黃雞)、櫻桃谷白鴨、黑棕鵝(以下分別簡(jiǎn)稱雞、鴨、鵝)各120只。在選定的養(yǎng)殖場(chǎng)按常規(guī)方法飼養(yǎng)至出欄。

    1.1.2 試驗(yàn)疫苗 “H5+H7”二價(jià)滅活疫苗(批號(hào)2017014):哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。

    1.1.3 檢測(cè)試劑 禽流感H5N1亞型HI試驗(yàn)抗原和陽性血清:哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn);H7亞型HI試驗(yàn)抗原和陽性血清:哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。

    1.2 方法

    1.2.1 免疫程序 雞9日齡首免,劑量0.3 mL,30日齡二免,劑量0.5 mL;鴨15日齡首免,劑量1.0 mL;鵝15日齡首免,劑量1.0 mL,50日齡二免,劑量1.5 mL(表1)。

    表1 家禽重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗免疫程序

    1.2.2 母源抗體測(cè)定 對(duì)雞、鴨、鵝,分別于9日齡、15日齡和15日齡,各采集血清10份測(cè)定母源抗體。

    1.2.3 采集活禽咽肛拭子及血清 隨機(jī)選取一定數(shù)量的活禽,采集每只家禽咽喉、泄殖腔棉拭子各1個(gè),放入事先加入1 mL PBS液的離心管中,咽肛棉拭子與血清一一對(duì)應(yīng)。采集雞、鴨、鵝咽肛拭子及血清的時(shí)間點(diǎn)和樣品量詳情見表2。咽肛拭子?70 ℃保存待檢,血清?20 ℃保存待檢。

    1.2.4 HI抗體效價(jià)測(cè)定 按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T 18936-2003)中的血凝(HA)和血凝抑制(HI)試驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行。用H5N1亞型HI試驗(yàn)抗原和陽性血清檢測(cè)H5抗體,用H7亞型HI試驗(yàn)抗原和陽性血清檢測(cè)H7抗體。HI效價(jià)≥4 log2判定為合格。

    表2 活禽咽/肛拭子及血清采集情況 單位:份

    1.2.5 填寫“免疫后臨床觀察表” 免疫后需每日填寫禽群的采食量、精神狀況、發(fā)病與死亡情況、注射部位有無異常等信息。

    1.2.6 數(shù)據(jù)整理和分析 對(duì)檢測(cè)結(jié)果用Excel、

    SPSS 20.0等軟件,進(jìn)行數(shù)據(jù)整理、統(tǒng)計(jì)分析。

    2 結(jié)果

    2.1 母源抗體測(cè)定情況

    9日齡雞的H5和H7母源HI抗體效價(jià)幾何平均值(GMT)分別為7.3 log2和1.0 log2,15日齡鴨的H5和H7母源HI抗體效價(jià)GMT分別為3.3 log2和0,15日齡鵝的H5和H7母源HI抗體效價(jià)GMT分別為2.3 log2和0.3 log2(表3)。

    表3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物母源抗體測(cè)定情況

    2.2 免疫效果監(jiān)測(cè)情況

    2.2.1 免疫雞群的HI抗體水平 試驗(yàn)結(jié)果顯示:首免后21 d,免疫雞群H5亞型HI抗體效價(jià)均值為4.2 log2,抗體合格率為66.67%,30日齡加強(qiáng)免疫后14~70 d(出 欄),HI效價(jià)平均值為8.0~9.0 log2,抗體合格率為100%;首免后21 d,免疫雞群H7亞型HI抗體效價(jià)平均值為7.5 log2,抗體合格率為100%,30日齡加強(qiáng)免疫后14~70 d(出欄),HI效價(jià)平均值為8.2~9.0 log2,抗體合格率為100%(圖1)。

    圖1 雞免疫抗體HI效價(jià)變化

    2.2.2 免疫鴨群的HI抗體水平 試驗(yàn)結(jié)果顯示:首免后21 d,免疫鴨群H5亞型HI抗體效價(jià)平均值為5.1 log2,抗體合格率為86.67%,首免后32 d,HI效價(jià)平均值為6.1 log2,抗體合格率為100%;首免后21 d,免疫鴨群H7亞型HI抗體效價(jià)平均值為5.6 log2,抗體合格率為100%,首免后32 d,HI效價(jià)平均值為6.4 log2,抗體合格率為100%(圖2)。

    圖2 鴨免疫抗體HI效價(jià)變化

    2.2.3 免疫鵝群的HI抗體水平 試驗(yàn)結(jié)果顯示,首免后21 d,免疫鵝群H5亞型HI抗體效價(jià)平均值為3.9 log2,抗體合格率為53.33%,50日齡加強(qiáng)免疫后14~70 d(出欄),HI效價(jià)平均值為7.6~8.5 log2,抗體合格率為100%;首免后21 d,免疫鵝群H7亞型HI抗體效價(jià)平均值為5.2 log2,抗體合格率為100%,50日齡加強(qiáng)免疫后14~ d至70 d(出欄),HI效價(jià)均值為7.7~9.3 log2,抗體合格率為100%(圖3)。

    圖3 鵝免疫抗體HI效價(jià)變化

    2.3 病原檢測(cè)情況

    采集的所有咽肛拭子樣品中,均未檢出H5、H7亞型流感病毒核酸陽性。

    2.4 免疫禽群臨床情況

    免疫后所有禽群采食量均正常,精神狀況良好,注射部位無異常,沒有出現(xiàn)發(fā)病死亡情況。

    3 分析與討論

    “H5+H7”二價(jià)滅活疫苗的全面免疫是當(dāng)前防控H7N9流感的主要措施和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。2017年3月以來,湖南、陜西、天津、內(nèi)蒙古等地相繼發(fā)生了家禽H7N9流感疫情。為有效控制疫情發(fā)生,農(nóng)業(yè)部決定開展H7N9流感全面免疫。本研究表明,“H5+H7”二價(jià)滅活疫苗能夠?qū)Ξ?dāng)前流行毒株產(chǎn)生良好的抗體反應(yīng),具有較強(qiáng)的抗原針對(duì)性,能抵御病毒攻擊,具有較好的免疫保護(hù)效果,同時(shí)無免疫副反應(yīng),疫苗安全有效。

    母源抗體的作用具有特異性和選擇性,可以保護(hù)雛雞免受特定病原體的攻擊。但過高的母源抗體對(duì)雛雞初次免疫反應(yīng)的影響也很大。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),9日齡(首免日齡)肉雞的H5母源抗體效價(jià)較高,其幾何均值為7.3 log2,免疫后H5抗體效價(jià)均值急劇下降,其原因可能是母源抗體中和了疫苗中的抗原,因而可能造成H5N1保護(hù)的真空期。為盡量減少或避免母源抗體影響,建議定期檢測(cè)雛雞母源抗體,根據(jù)雛雞體內(nèi)母源抗體水平確定首免時(shí)間,優(yōu)化免疫程序。

    本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),雞群在首免后21d均達(dá)到了較高的抗體效價(jià)(H5N1 Re-8株、H7N9 Re-1株抗體效價(jià)平均值均大于4 log2),到達(dá)了農(nóng)業(yè)部要求的標(biāo)準(zhǔn)。二次免疫后抗體平均值均明顯高于一次免疫,說明加強(qiáng)免疫效果明顯。鵝群首免后21 d 的H7抗體效價(jià)平均值大于4 log2,達(dá)到了農(nóng)業(yè)部的標(biāo)準(zhǔn),但H5抗體效價(jià)平均值小于4 log2,未達(dá)到農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)。二次免疫后的H5和H7抗體平均值均明顯高于一次免疫,且均有較高的抗體效價(jià)(抗體效價(jià)平均值大于4 log2),說明加強(qiáng)免疫效果明顯。這與金大春等[5]、張濟(jì)培等[6]研究的“禽流感疫苗2次免疫的免疫效果較好”的結(jié)論一致。

    群體免疫抗體合格率是衡量免疫質(zhì)量、預(yù)警重大疫病的指標(biāo)之一。研究表明,雞、鵝首免后21 d,群體H5亞型免疫抗體合格率低于70%的農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn),群體免疫不合格,達(dá)不到免疫保護(hù)要求,應(yīng)加強(qiáng)免疫。這也與楊澤林[7]的研究結(jié)論一致。

    4 結(jié)論

    本研究以田間試驗(yàn)方式,對(duì)常規(guī)養(yǎng)殖的肉雞(江村黃雞)、櫻桃谷白鴨、黑棕鵝各120只,按照預(yù)定的免疫程序進(jìn)行“H5+H7”二價(jià)滅活疫苗免疫,定期采集血清測(cè)定抗體效價(jià),評(píng)估該疫苗的免疫效果。試驗(yàn)結(jié)果顯示:首免后21 d,雞群和鵝群的H7亞型抗體合格率均大于70%,H5抗體合格率均低于70%,但二免后的H5和H7抗體合格率均大于70%;鴨群首免后21d的H5和H7抗體合格率均大于70%。本試驗(yàn)結(jié)果表明,“H5+H7”二價(jià)滅活疫苗的安全性和免疫效果較好,但對(duì)于生長(zhǎng)周期超過70 d的家禽,一次免疫,不能對(duì)這兩種病毒同時(shí)提供保護(hù),應(yīng)免疫兩次。

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