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    重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活疫苗在肉鵝中的應(yīng)用效果評價

    2018-08-06 07:20:38謝向萌韋顯凱覃小柳梁仕增閉璟珊袁湖業(yè)胡茂快
    中國動物檢疫 2018年8期
    關(guān)鍵詞:肉鵝滴度周齡

    謝向萌,韋顯凱,梁 晟,覃小柳,梁仕增,閉璟珊,袁湖業(yè),胡茂快

    (1.橫縣動物疫病預(yù)防控制中心,廣西橫縣 530300;2. 廣西動物疫病預(yù)防控制中心,廣西南寧 530001;3. 橫縣陶圩鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)站,廣西橫縣 530314)

    禽流感(Avian Influenza,AI)是由禽流感病毒(Avian Influenza virus,AIV)感染禽類及其它易感動物引起的一種烈性、高度接觸性人獸共患傳染病。根據(jù)表面血凝素(HA)基因和神經(jīng)氨酸酶(NA)基因不同,AIV可分為16種H亞型和9種N亞型。其中,可感染人的亞型有H5N1、H5N6、H6N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2、H10N7、H10N8等[1-5]。AIV的傳播擴(kuò)散不僅對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成巨大危害,也對人類健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。

    2013 年2—3月間,我國上海?安徽等長三角區(qū)內(nèi)省份發(fā)生了嚴(yán)重的人急性下呼吸道感染,經(jīng)中國疾病預(yù)防控制中心鑒定,確定病原為H7N9流感病毒[6]。與其他亞型流感病毒一樣,H7N9亞型病毒一直在不斷進(jìn)化,并獲得了在哺乳動物體內(nèi)大量繁殖和毒力增強(qiáng)的能力,導(dǎo)致人感染和死亡[7]。2017 年以前,在家禽中分離的 H7N9 病毒絕大多為弱毒株,對家禽沒有致病力。2017 年后的監(jiān)測結(jié)果顯示,有些地區(qū)的H7N9 病毒已突變?yōu)楦咧虏⌒远局辏瑢﹄u有高致病力,而且流行范圍有擴(kuò)大趨勢,對養(yǎng)禽業(yè)帶來極大威脅[8-9]。

    鑒于人間和禽間H7N9疫情防控形勢的變化,2017年6月農(nóng)業(yè)部要求廣東、廣西先行開展H7N9流感免疫試點(diǎn)工作,采用重組禽流感病毒二價滅活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 Re1株)進(jìn)行免疫注射。為評價該滅活疫苗在商品肉鵝中的安全性和有效性,進(jìn)行了田間免疫試驗(yàn)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 疫苗 重組禽流感病毒二價滅活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 Re1株):哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn),批號為2017002。

    1.1.2 試驗(yàn)動物 來自同一種鵝場、同一批次臨床健康商品代肉雛鵝(獅頭鵝),未經(jīng)H5禽流感病毒疫苗或“H5+H7”重組禽流感病毒疫苗免疫。1.1.3 主要試劑 禽流感病毒血凝抑制抗原H5N1 Re-8株和H7N9 Re-1株:哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。

    1.2 安全性及效力試驗(yàn)

    1.2.1 安全性試驗(yàn) 取2周齡雛鵝400只,平均分為2組,分別進(jìn)行單劑量和大劑量安全試驗(yàn)。每組分別采用肌肉和頸部皮下注射兩種方式,數(shù)量各100只。單劑量安全試驗(yàn)注射劑量為0.5 mL/只,大劑量為1.0 mL/只。另取2周齡雛鵝20只為對照,以相同劑量和方式注射生理鹽水。接種疫苗后,每日觀察各組的采食、飲水及精神狀況,判斷是否有不良臨床反應(yīng)。14 d后,疫苗接種組每組剖殺5只,對照組剖殺2只,觀察注射部位是否有炎癥反應(yīng),以及疫苗吸收情況和臟器病理變化。免疫前及出欄前,每組隨機(jī)取20只鵝稱重,統(tǒng)計接種疫苗組和對照組的增重情況。

    1.2.2 效力試驗(yàn) 取2周齡雛鵝500只,肌肉注射接種疫苗(0.5 mL/只),3周后以相同途徑加強(qiáng)免疫1次(1.5 mL/只)。免疫前和免疫后每周采血分離血清,分別檢測H7N9 Re-1和H5N1 Re-8株抗體,每次隨機(jī)取30只,直至出欄。對每次隨機(jī)選取的30只免疫鵝,全部采集喉/泄殖腔棉拭子,進(jìn)行H7N9病毒分離;若病毒分離陽性,則進(jìn)一步進(jìn)行鑒定。

    1.3 抗體檢測

    按《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T18936-2003)中的血凝(HA)和血凝抑制試驗(yàn)(HI)試驗(yàn)要求,進(jìn)行HI抗體效價測定。采用SPSS statistics 17.0,對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。分析結(jié)果描述:P<0.01表示差異極其顯著,P<0.05表示差異顯著,P>0.05表示無顯著差異。

    2 結(jié)果

    2.1 安全性試驗(yàn)

    觀察發(fā)現(xiàn),單劑量和大劑量肌肉注射、頸部皮下注射,以及對照組的采食、飲水及精神狀況均正常,未見不良臨床反應(yīng)。

    接種后14 d,疫苗接種組每組剖殺5只鵝,對照組剖殺2只,進(jìn)行病理檢查。肌肉注射組:在注射部位均未觀察到炎癥、疫苗殘留現(xiàn)象,疫苗吸收良好(圖1-A、圖1-E);氣囊清凈透明;心、肝、脾、胃、肺、腸管正常;淋巴結(jié)、胰腺正常;喉頭、咽喉、氣管正常(圖1-B、圖1-F)。皮下注射組:注射部位無炎癥,但發(fā)現(xiàn)大劑量接種組有2只出現(xiàn)少量疫苗殘留,疫苗吸收不完全(圖1-C、圖1-G);氣囊清凈透明;心、肝、脾、胃、肺、腸管正常;淋巴結(jié)、胰腺正常;喉頭、咽喉、氣管正常(圖1-D、圖1-H)。對照組:注射部位及器官均正常(圖1-I、圖 1-J)。

    圖1 疫苗接種組和對照組剖檢結(jié)果

    分別在免疫前(2周齡)、免疫后(4周齡),每組隨機(jī)取20只鵝稱重。結(jié)果顯示,各組平均增重最大為2 225 g,最小為2 107 g(表1),無顯著差異(P>0.05)。

    2.2 效力試驗(yàn)

    免疫前后,隨機(jī)取30只鵝采樣檢測H7和H5抗體,共采樣檢測7次。結(jié)果顯示:免疫前,HI抗體滴度均為0;免疫后,H5、H7的HI抗體滴度逐漸上升(表2)。加強(qiáng)免疫后2周,H5、H7的HI抗體滴度平均值分別達(dá)到6.6 log2、6.4 log2,合格率達(dá)到了70%以上,符合國家要求(圖2)。免疫前后,共采集喉頭和泄殖腔棉拭子210個,由國家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室對其進(jìn)行H7N9病毒分離。結(jié)果均為陰性。

    表1 免疫前后鵝的平均體重 單位:g

    圖2 抗體滴度和合格率變化曲線

    3 分析與討論

    3.1 疫苗免疫是必要的

    2017年2月18日,國家衛(wèi)生和計劃生育委員會向世界衛(wèi)生組織(WHO)報告,對從廣東省兩病例分離的H7N9病毒株進(jìn)行核酸序列分析,發(fā)現(xiàn)其在 HA1和 HA2之間的連接肽區(qū)有 4 個氨基酸插入[8];2月21日,我國向世界動物衛(wèi)生組織(OIE)報告,從廣東省活禽市場中分離到這種病毒。研究顯示,該病毒已從對禽低致病性向高致病性轉(zhuǎn)化[10-11]。因此,對家禽接種 H7亞型疫苗,以高滴度抗體,阻止流感病毒在家禽體內(nèi)的復(fù)制以及傳播,進(jìn)而阻斷流感病毒由禽傳染給人,是預(yù)防該亞型流感病毒流行的最有效手段[12]。

    表2 疫苗臨床應(yīng)用檢測結(jié)果

    3.2 疫苗是安全的

    無論是單劑量組,還是大劑量組,不管是肌肉接種,還是皮下接種,肉鵝采食、飲水及精神狀況均正常;剖檢未見淋巴、臟器有病理變化;喉頭和泄殖腔棉拭子樣品沒分離出H7N9病毒。這些均說明該重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活疫苗免疫接種肉鵝是安全的。從肉鵝免疫后增重情況分析,疫苗接種組平均增重2157~2225 g,對照組平均增重2 162 g,各組間無顯著差異,說明疫苗對鵝生長無影響。

    3.3 疫苗是有效的

    肉鵝免疫后3周,H5、H7抗體合格率分別達(dá)到93%、53%;免疫后5周(加強(qiáng)免疫后2周),HI抗體滴度都在5~8 log2之間,抗體整齊度好,而且H5、H7抗體合格率均為100%,說明該重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活疫苗免疫接種肉鵝是有效的。本試驗(yàn)為田間試驗(yàn),沒有進(jìn)行免疫后的攻毒保護(hù)試驗(yàn)。但蔣文明等[13]進(jìn)行的H7N9亞型流感候選疫苗株攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)表明,該疫苗株對H7N9具有很好的攻毒保護(hù)作用。

    3.4 疫苗用法與用量。

    從免疫效果可看出,肌肉或頸部皮下注射免疫接種肉鵝均切實(shí)可行。對2周齡雛鵝進(jìn)行首免,每只注射0.5 mL。5周齡時,以相同途徑加強(qiáng)免疫1次,每只1.5 mL,加強(qiáng)免疫后2周(即7周齡),肉鵝H5、H7抗體整齊度好,抗體合格率均達(dá)到100%。需要指出的是,只進(jìn)行1次免疫,免后3周時的H7抗體平均滴度僅為3.6 log2,抗體合格率為53%,達(dá)不到平均滴度4 log2以上、合格率70%以上的保護(hù)標(biāo)準(zhǔn),因此肉鵝開展兩次免疫是非常必要的。由于疫苗為油苗,沒有進(jìn)行滴鼻免疫實(shí)驗(yàn)??紤]到肌肉注射的普遍性,本試驗(yàn)并沒有進(jìn)行皮下注射試驗(yàn)。

    4 結(jié)論

    本研究使用重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活疫苗免疫商品肉鵝,通過單劑量和大劑量安全試驗(yàn),未見肉鵝有不良臨床反應(yīng)及疫苗副反應(yīng),對生長無影響,說明疫苗安全性較好;效力試驗(yàn)表明,加強(qiáng)免疫后,H5、H7抗體合格率均可達(dá)到100%,疫苗保護(hù)效果較好。建議在2周齡時,對雛鵝進(jìn)行首免,每只注射0.5 mL,5周齡時加強(qiáng)免疫1次,每只1.5 mL,這樣可取得理想的免疫保護(hù)效果。

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