河北省承德市接壩地區(qū)包蟲病疫苗免疫效果評估

包蟲病是棘球蚴病的俗稱，是棘球絳蟲的中絳期，寄生于羊、牛等家畜及多種野生動物和人的肝、肺等器官內引起的人獸共患寄生蟲病，為我國優(yōu)先防治的二類動物疫病。河北省承德市接壩地區(qū)特殊的飼養(yǎng)管理方式及氣候條件為該病的流行提供了有利條件。包蟲病危害嚴重、防治困難。保護易感動物，對中間宿主進行免疫，是防治包蟲病的重要措施[1]。為了評估包蟲病基因工程亞單位疫苗在該地區(qū)應用的安全性和免疫效果，進行了本試驗。

1 材料與方法

1.1 試驗對象

選擇接壩地區(qū)4個牧場（編號A、B、C、D）8周齡左右羔羊，共479只。牧場飼養(yǎng)方式為自然放牧。

1.2 試驗分組

將每場的羔羊隨機分組：免疫組308只、對照組171只（表1）。免疫組除注射疫苗外，其他條件與對照組完全一致。

表1 各牧場試驗羔羊分組情況 單位：只

1.3 試驗疫苗

羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗（主要成分為羊棘球蚴EG95抗原），由重慶澳龍生物制品有限公司生產(chǎn)，批號為2017013-1，生產(chǎn)日期為20171114，有效期為1年。

1.4 免疫程序與方法

8周齡左右進行首次免疫，首次免疫后間隔1個月加免1次。按照疫苗瓶簽注明的頭份，用疫苗專用稀釋液稀釋，頸部皮下注射1 mL/只。

1.5 安全性評價

免疫后對免疫羔羊的精神狀態(tài)及注射部位局部變化等進行仔細觀察，持續(xù)2 d，確定有無疫苗反應及反應的輕重程度。

1.6 抗體檢測

免疫組分別于首次免疫前、加強免疫前，首次免疫后2、6和9個月，對照組分別于試驗前和試驗后9個月，全部采血收集血清，用羊棘球蚴（包蟲）病ELISA抗體檢測試劑盒（批號20180110）進行檢測，按照試劑盒說明書進行操作及陰陽性判定。

2 結果

2.1 疫苗安全性

免疫組個別羊有輕微的疫苗反應，表現(xiàn)為精神萎頓，飲食欲減退，注射部位輕微腫脹，但很快恢復正常。

2.2 免疫效果檢測

免疫組：首次免疫前平均抗體陽性率為2.27%，1個月后（加強免疫前）平均抗體陽性率上升到87.16%；首次免疫后2、6和9個月的抗體陽性率分別為99.32%、93.49%和86.46%。對照組：首次免疫前抗體陽性率（感染抗體）與免疫組近似，為2.34%，9個月后，抗體陽性率上升至7.93%（表2）。4個牧場免疫效果檢測具體結果見表3。

表2 免疫組和對照組抗體檢測結果

采用SPSS 22.0軟件，對試驗開展9個月后4個牧場對照組的羊包蟲病感染抗體陽性率進行卡方檢驗，發(fā)現(xiàn)P值均大于0.05，無顯著性差異。

3 分析與討論

免疫羊雖對本疫苗有輕微的免疫應激反應，但這可能是因抓羊和免疫注射刺激導致的，因此可以認為疫苗的免疫副作用較小。本研究為了驗證疫苗的安全性及免疫效果，選擇了8周齡左右的羔羊。這是因為此階段羔羊感染包蟲病的概率較低，有利于正確評價疫苗的免疫效果[2]。因本級實驗室不具備做蟲卵攻擊試驗的條件，所以本次試驗以抗體滴度來驗證疫苗的保護效果。有報道稱，抗體滴度高低與疫苗保護強弱之間存在明顯正相關關系[3]。因此，抗體滴度能夠反映出疫苗的保護效果。

表3 4個牧場的免疫抗體陽性率檢測結果單位：%

免疫抗體檢測結果顯示，免疫后抗體陽性率快速直線上升，加強免疫后1個月內，仍繼續(xù)上升，但幅度變小，免疫9個月后，仍保持較高的抗體水平（圖1），說明疫苗能快速誘導羊機體產(chǎn)生免疫保護抗體，且加強免疫后，能維持較長時間。根據(jù)試劑盒說明，樣品OD值介于0.3～0.6之間，判為保護力低。免疫組加強免疫前的抗體合格率雖然達到了87.16%，但抗體水平較低的樣品占到55%，所以首免后間隔1個月進行加強免疫十分必要。

圖1 抗體合格率變化趨勢

對照組在試驗開展9個月后，包蟲病感染抗體陽性率上升為7.93%，與前期所做流行病學調查數(shù)據(jù)相符[4]。4個牧場對照組包蟲病感染抗體陽性率無顯著差異，說明本研究做到了試驗對象選定及分組的隨機性。

本研究結果表明羔羊免疫后可以獲得應有的保護，但由于時間有限，未能形成程序化的免疫程序，這有待今后繼續(xù)研究。

4 結論

試驗數(shù)據(jù)顯示，該包蟲病基因工程亞單位疫苗具有良好的安全性和免疫效果，按照疫苗說明書中的免疫程序對羔羊群進行免疫，9個月后動物個體仍維持較高的抗體水平。試驗結果表明，該疫苗對羊包蟲病具有較好保護力，可以在包蟲病流行區(qū)推廣應用。