難治性癲癇患兒血清谷氨酸脫羧酶抗體、神經(jīng)節(jié)苷脂抗體水平變化

幸黔魯，白國(guó)輝

(1遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，貴州遵義 563000；2貴州省普通高?？谇患膊⊙芯恐攸c(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

癲癇是指可持續(xù)存在的能夠在未來(lái)引起癲癇發(fā)作的一類(lèi)腦部疾患，并可引發(fā)神經(jīng)生物學(xué)和認(rèn)知改變，以及心理學(xué)及社會(huì)功能的變化[1]。難治性癲癇(RE)是癲癇的一種類(lèi)型，2010年國(guó)際抗癲癇聯(lián)盟將RE的定義制定為選擇2種正確且耐受性強(qiáng)的抗癲癇藥物經(jīng)過(guò)足夠療程和劑量加以治療依舊無(wú)法控制發(fā)作的一類(lèi)癲癇[2]。小兒RE是臨床常見(jiàn)的一種疾病類(lèi)型，此病發(fā)作頻率較高，發(fā)作類(lèi)型較為復(fù)雜，且病因較多，發(fā)病機(jī)制仍然不甚明晰，但臨床大都傾向于認(rèn)為RE可能與神經(jīng)免疫機(jī)制有關(guān)。谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)首次發(fā)現(xiàn)于1型糖尿病患者機(jī)體，被認(rèn)為與小腦共濟(jì)失調(diào)和邊緣性腦炎等遭受免疫攻擊的神經(jīng)類(lèi)疾病發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[3]。神經(jīng)節(jié)苷脂抗體(GM1-A)是一種鞘磷脂，在神經(jīng)系統(tǒng)中分布廣泛，其在神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程中能夠參與細(xì)胞分化和分型以及生長(zhǎng)等過(guò)程，對(duì)于維持神經(jīng)細(xì)胞的常規(guī)生理功能具有重要的意義[4]。本研究觀察了RE患兒血清GADA、GM1-A水平變化，旨在探討RE患兒發(fā)病與GADA、GM1-A的關(guān)系，為以后的靶向治療尋找新的靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年9月～2017年9月遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的RE患兒60例(觀察組)，男28例，女32例；年齡1～14(7.49±3.27)歲；病程1～6(4.21±1.33)a；發(fā)病年齡1～2(1.07±0.48)歲。癲癇患兒40例(對(duì)照組)，男17例，女23例；年齡1～15(8.21±3.48)歲；病程1～8(4.46±1.57)a；發(fā)病年齡1～4(3.32±0.66)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患兒均符合國(guó)際抗癲癇聯(lián)盟關(guān)于癲癇的有關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②經(jīng)頭顱CT或MRI確診；③年齡≤16歲；④患兒的家長(zhǎng)對(duì)于此次研究已經(jīng)知情同意，并已簽署了同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他種類(lèi)的顱內(nèi)占位型病變或遲發(fā)型腦病者；②醫(yī)源性因素導(dǎo)致的RE者；③有免疫系統(tǒng)類(lèi)疾病或感染性疾病者；④有血液疾病者；⑤有惡性腫瘤者。本研究已得到醫(yī)院倫理委員會(huì)評(píng)審?fù)ㄟ^(guò)且患者知情同意。

1.2 血清GADA、GM1-A檢測(cè) 取患兒晨起空腹靜脈血4 mL，以3 000 r/min離心15 min，取血清并分為2份，每份0.5 mL，然后放入-80 ℃的冰箱中保存待測(cè)。采用ELISA法檢測(cè)血清GADA、GM1-A，檢測(cè)450 nm波長(zhǎng)下樣品的吸光度值，操作需嚴(yán)格遵照說(shuō)明書(shū)中描述的步驟逐步實(shí)施。獲得吸光度值后，建立二維坐標(biāo)系，將X軸作為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，將Y軸作為標(biāo)準(zhǔn)品所對(duì)應(yīng)吸光度值，將樣品的吸光度值分別代入方程式，算出樣品濃度，而后乘以稀釋倍數(shù)，即可得樣品實(shí)際濃度。GADA：Y=2.880 8X2+4.392 9X-1.759 9，GM1-A：Y=378.08X2+0.147 4。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清GADA、GM1-A水平比較 血清GADA、GM1-A水平見(jiàn)表1。

表1 兩組血清GADA、GM1-A水平比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05。

2.2 血清GADA、GM1-A對(duì)RE患兒的診斷價(jià)值 結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，AUC為0.842，截?cái)嘀禐?.95 mmol/L，GADA診斷RE患兒的靈敏度和特異度均超過(guò)80%；AUC為0.760，截?cái)嘀禐?.35 ng/mL，GM1-A診斷RE患兒的靈敏度和特異度均超過(guò)70%。

表2 血清GADA、GM1-A對(duì)RE患兒的診斷價(jià)值

3 討論

癲癇是發(fā)生于神經(jīng)系統(tǒng)的一種常見(jiàn)疾病，在人群中的發(fā)病率是0.6%～1.1%，對(duì)人類(lèi)生存健康造成了較大的危害[6～8]。關(guān)于癲癇的治療，藥物療法是首選方案，但據(jù)統(tǒng)計(jì)60%左右的患者常規(guī)服用抗癲癇類(lèi)藥物仍然無(wú)法避免癲癇的發(fā)作，致使部分患者甚至自行停用藥物[9～11]。RE是指通過(guò)抗癲癇類(lèi)藥物進(jìn)行規(guī)范治療后不可終止癲癇的發(fā)作，亦或是已被臨床證實(shí)屬于難治的癲癇以及癲癇綜合征。我國(guó)每年的新發(fā)癲癇病例中，大約有1/4的比例屬于RE，加之RE存在慢性、頑固性以及藥物抵抗性和藥物的不敏感性等特點(diǎn)，對(duì)其進(jìn)行早期診斷顯得十分必要[12～14]。而對(duì)于RE患兒的治療，由于幼兒機(jī)體排毒能力較弱，可能存在較強(qiáng)的藥物毒性反應(yīng)，這就需要更及時(shí)的充分掌握患兒實(shí)際病情，尋找敏感而有效的血清生物學(xué)指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測(cè)對(duì)于患兒的治療及預(yù)后具有十分重要的意義。

本研究顯示，觀察組血清GADA、GM1-A水平高于對(duì)照組，分析原因可能與GADA、GM1-A在RE患兒腦部的作用機(jī)制有關(guān)。谷氨酸脫羧酶作為人體中γ-氨基丁酸所合成的一種限速酶，其主要存在于神經(jīng)系統(tǒng)中，并能夠催化L-谷氨酸成γ-氨基丁酸[15～17]。而在神經(jīng)系統(tǒng)中大約含有40%的突觸屬于γ-氨基丁酸能突觸，其作為腦部的一種抑制型神經(jīng)遞質(zhì)，當(dāng)機(jī)體中GADA高表達(dá)后，會(huì)抑制γ-氨基丁酸有關(guān)受體功能，導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)的興奮性變大，最終誘發(fā)癲癇發(fā)作，而在RE患兒中，此種過(guò)程更加明顯[18～20]。神經(jīng)節(jié)苷酯作為可與唾液酸基相結(jié)合的一種鞘磷脂，也是周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)和脊髓中神經(jīng)細(xì)胞膜以及軸突膜的一個(gè)組成部分，當(dāng)各類(lèi)因素致使神經(jīng)節(jié)苷脂的抗原物質(zhì)發(fā)生暴露之后，可隨之激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，進(jìn)而使得機(jī)體中的淋巴系統(tǒng)形成GM1-A，而GM1-A可將GM1作為攻擊抗原，并在補(bǔ)體和免疫反應(yīng)的作用下?lián)p傷機(jī)體的神經(jīng)細(xì)胞，最終引發(fā)RE。因此，RE患兒的發(fā)病與GM1-A、GADA水平的升高具有十分緊密的關(guān)聯(lián)。文獻(xiàn)[21～23]報(bào)道也指出，GM1-A和GADA水平的升高可能會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的腦部神經(jīng)調(diào)節(jié)作用產(chǎn)生一定程度的異常，并通過(guò)腦網(wǎng)絡(luò)及腦區(qū)間功能的變化而逐漸誘發(fā)RE。

本研究還顯示，血清GADA診斷RE患兒的靈敏度為80.28%、特異度為80.30%，血清GM1-A診斷RE患兒的靈敏度為73.31%、特異度為71.12%。證實(shí)GADA和GM1-A對(duì)于RE患兒的診斷價(jià)值較好，臨床上可將二者用于RE患兒的診治評(píng)估過(guò)程中[24,25]。

總之，RE患兒血清GADA、GM1-A水平升高，其發(fā)病可能與兩指標(biāo)水平升高有關(guān)。目前，臨床上已有針對(duì)RE疾病的明確診斷標(biāo)準(zhǔn)，因此可嘗試額外增加針對(duì)GM1-A、GADA水平的監(jiān)測(cè)，從而更加全面地研判患兒的病情及預(yù)后，并有助于更加科學(xué)而準(zhǔn)確地對(duì)患兒實(shí)施治療。