“軟傷痛舒靈”擦劑對大鼠急鈍性損傷后血清CK、IL-6的影響

趙 航

（北京體育大學(xué)，北京 100084）

在體育運動過程中發(fā)生的各種損傷稱為運動損傷 。損傷后可出現(xiàn)疼痛、皮溫升高、關(guān)節(jié)活動障礙，甚至關(guān)腫脹、皮下出血等。這時肌纖維的撕裂、水腫，炎性細胞浸潤。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認為，急鈍性損傷屬于“筋傷”的范疇，氣運血行不暢，主要是氣滯血瘀，脈絡(luò)不通 。血瘀則氣滯，氣滯則疼痛，瘀血不散則化熱，故治療以行氣止痛、活血化瘀為主 。本次實驗主要目的是制定并完善“軟傷痛舒靈”擦劑的配方，建立動物損傷模型，研究軟傷痛疏靈對軟組織損傷的修復(fù)作用，為該藥臨床治療急性軟組織損傷提供理論依據(jù)。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

“軟傷痛舒靈”擦劑對大鼠急鈍性損傷后血清CK、IL-6的影響。

1.2 研究材料

1.2.1 主要實驗儀器 軟組織損傷打擊器，G＆G T-500型電子天平，基本手術(shù)操作器械，血清CK全自動生化分析儀，BIO RAD 酶標(biāo)儀，低溫高速離心機，5mL 真空采血管，Axygen 200ul 吸頭，5mL 離心管，500g砝碼。

1.2.2 主要材料和試劑 實驗試劑：5%水合氯醛 300mL，肌酸激酶（CK）試劑盒，IL-6 酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒，軟傷痛舒靈原藥材，云南白藥氣霧劑。

實驗擦劑的配制和選用：本研究采用50%乙醇作為溶劑進行提取。制配流程如圖1。

1.3 研究方法

1.3.1 實驗對象 選用SD大鼠36只，SPF級，雄性，8周齡，體重270±10g，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供。購入后適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動物飼料喂養(yǎng)，自由飲食、飲水。鼠籠18個。造模后，按體重給每只大鼠編號，分為空白對照組、損傷模型組、云南白藥組、軟傷痛舒靈組，共4組，空白對照組6只大鼠，其余每組各10只。

1.3.2 造模方法 空白對照組不做處理，其余3組在造模前一天將右側(cè)后肢脫毛刀脫毛。造模采用自由落體打擊，俯臥固定于鼠板上，使腓腸肌暴露清楚。把500g砝碼從30cm高處自由下落，打擊 1次，造成鈍性損傷，形成模型，造模后右側(cè)后肢明顯腫脹，皮下淤血，可見跛行，無骨折顯示造模成功。

1.3.3 實驗給藥途徑、方法、劑量 造模后遵循RICE原則進行制動、冷敷等，24h后即開始對用藥組進行相應(yīng)干預(yù)，損傷模型組用0.9%生理鹽水進行對照干預(yù)，云南白藥組、軟傷痛舒靈組2組相應(yīng)的局部噴藥，3次/ d，空白對照組不做任何處理。3d后4組一起取材。采用腹腔注射水合氯醛麻醉大鼠，把腹腔靜脈暴露出來，每只分別取靜脈血50mL×2，靜置30min后，等血液凝固，再放入高速離心機內(nèi)，離心以后，血清編號分裝，置于-20℃的冰箱中保存。

1.3.4 指標(biāo)的觀察與監(jiān)測 大鼠血清CK 的檢測：將低溫存放的血清置于常溫下解凍后用Max MAT 儀器，用濕式檢測方法測定。大鼠血清 IL-6 的檢測：采用ELISA 的夾心法測得，將待測樣本加入酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測，標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度已知，同時先溫育生物素標(biāo)記的抗體。大鼠血清白介素-6（IL-6）洗滌后，加入 HRP酶標(biāo)記過的親和素。再將未結(jié)合的酶結(jié)合物清除掉，然后加入底物 A、B 兩種，使其與酶結(jié)合物發(fā)生顯色反應(yīng)。樣品的濃度和顏色的深淺成比。再由 BIORAD 酶標(biāo)儀測得。

1.3.5 統(tǒng)計學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS軟件包進行處理，測定結(jié)果以`x±SD表示。

2 研究結(jié)果

從表1可以看出，損傷模型組是損傷后未作任何處理比空白對照組的血液CK更高，有顯著性差異（P＜0.05）。云南白藥組CK指標(biāo)低于損傷模型組，且有明顯差異（P＜0.05）；軟傷痛舒靈組CK指標(biāo)低于損傷模型組，且有顯著性差異（P＜0.01）；損傷模型組的IL-6數(shù)值均高于空白對照組，且存在顯著性差異（P＜0.01）；云南白藥組、軟傷痛舒靈組IL-6值均低于損傷模型組，且存在顯著性差異（分別為P＜0.01，P＜0.05）。

3 討 論

3.1 軟傷痛舒靈對骨骼肌損傷后血清CK的作用

CK 存在于動物的骨骼肌中，與肌肉收縮有直接關(guān)系。一直以來被作為骨骼肌損傷情況的重要生化指標(biāo)之一 。在大鼠發(fā)生急鈍性損傷3天后，觀察血清CK變化：損傷模型組的CK值明顯高于空白對照組，說明了損傷情況發(fā)生。云南白藥組和軟傷痛舒靈組CK值都是低于損傷模型組，說明在骨骼肌損傷后及時給藥的兩組受到的干預(yù)，使血清CK未能繼續(xù)急劇上升。因此，軟傷痛舒靈可以降低骨骼肌急鈍性損傷后的血清CK水平，對骨骼肌損傷的愈合有一定促進作用。

3.2 軟傷痛舒靈對骨骼肌損傷后IL-6的作用

白細胞介素-6（IL-6）容易在急、慢性炎癥中出現(xiàn)。除了在骨骼肌的損傷中，在修復(fù)中也有重要作用，炎癥細胞、骨骼肌細胞都可以分泌IL-6 。在大鼠發(fā)生急鈍性損傷3d后，觀察到IL-6：損傷模型組的IL-6值明顯高于空白對照組。云南白藥組、軟傷痛舒靈組的血清 IL-6 含量均小于損傷模型組（分別是P＜0.01，P＜0.05），且接近正常水平，說明軟傷痛舒靈能有抑制骨骼肌急性損傷后血清IL-6 的升高。肌肉損傷后，刺激了機體細胞大量分泌和釋放 IL-6 等細胞因子，一定量值的IL-6能促進骨骼肌損傷的修復(fù)，軟傷痛舒靈抑制了炎性細胞，減緩了IL-6的大量釋放，對骨骼肌損傷修復(fù)有積極作用。

表1 血清CK、IL-6的測試結(jié)果 ±s

表1 血清CK、IL-6的測試結(jié)果 ±s

注：#表示與空白對照組相比，P＜0.05，##為P＜0.01；*表示與損傷模型組相比，P＜0.05，*為P＜0.01。

組別 只數(shù)CK（U/L）IL-6（μg/L）空白對照組損傷模型組云南白藥組軟傷痛舒靈組6 10 10 10 780.08±116.07 1154.99.51±299.55#830.79±68.26*843.03±73.54**26.12±4.96 32.17±1.07##27.70±1.35**28.24±1.78*

4 結(jié) 論

在損傷早期及時給予軟傷痛舒靈干預(yù)能加快大鼠急鈍性軟組織損傷的愈合，其原理可能是： 軟傷痛舒靈可以降低骨骼肌急鈍性損傷后的血清CK水平；軟傷痛舒靈抑制了炎性細胞，減緩了IL-6的大量釋放。