外周注射Ghrelin對非洲雛鴕鳥大腸中纖維素酶活性的影響

陳迪杰　楊杰　王家鄉(xiāng)

摘要：為了研究Ghrelin對非洲雛鴕鳥大腸中纖維素酶活性的影響，為非洲雛鴕鳥的生長發(fā)育及飼養(yǎng)管理提供理論依據(jù)，試驗選取16羽45日齡非洲雛鴕鳥，平均體重（5.5±0.8） kg，按照雌雄各半的原則隨機(jī)分成4組（每組2個重復(fù)，每個重復(fù)2羽）。采用頸部皮下注射不同濃度Ghrelin（0、10、50、100 μg/kg，生理鹽水稀釋，注射劑量為1 μL/羽）后，檢測大腸中纖維素酶的活性變化，試驗期7 d。結(jié)果顯示，一定劑量的Ghrelin能夠促進(jìn)雛鴕鳥大腸中纖維素酶的活性，從而增強(qiáng)其消化吸收能力，促進(jìn)雛鴕鳥的生長。

關(guān)鍵詞：非洲雛鴕鳥；Ghrelin；纖維素酶；大腸

中圖分類號：S829.9 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1007-273X（2018）05-0008-02

非洲鴕鳥（African ostrich）原產(chǎn)于非洲草原和阿拉伯沙漠地帶，屬鳥綱鴕鳥目的食草性鳥類，也是目前現(xiàn)存鳥類中的惟一的二趾鳥類。人工飼養(yǎng)的鴕鳥主要有3種類型：紅頸鴕鳥、藍(lán)頸鴕鳥、黑頸鴕鳥，其中黑頸鴕鳥即南非選育的非洲鴕鳥[1]。非洲鴕鳥的消化道具有很強(qiáng)的酵解作用，特別是對粗纖維具有極強(qiáng)的消化分解能力，因此本研究通過采用頸部皮下注射不同濃度Ghrelin后，檢測其盲腸和結(jié)腸腸中纖維素酶的活性變化，探明Ghrelin對非洲雛鴕鳥消化能力的影響，從而為非洲雛鴕鳥的生長發(fā)育及飼養(yǎng)管理提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物 選取健康的45 d非洲雛鴕鳥16羽，平均體重（5.5±0.8） kg，隨機(jī)分為4組，每組4羽，雌雄不限，均來自于長江大學(xué)鴕鳥研究所。

1.1.2 試驗基礎(chǔ)日糧 試驗過程使用自配育雛料，主要是由青菜配合肉用仔雞前期配合飼料，飼料使用荊州海大飼料有限公司的產(chǎn)品。

1.1.3 試劑 非洲鴕鳥Ghrelin，GSS（Octanoyl）FLSPEYKKIQKQKDPKKPTTKLHC由上海強(qiáng)耀生物科技有限公司合成。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗設(shè)計 頸部皮下注射不同濃度外源性Ghrelin，其濃度分別為0（對照組）、10、50、100 μg/kg，用生理鹽水稀釋，注射劑量為1 μL/羽，注射時間為每天上午8：00，連續(xù)注射6 d，于第7天上午8：00取材。

1.2.2 飼養(yǎng)管理 整個飼養(yǎng)階段在長江大學(xué)鴕鳥研究所進(jìn)行，為避免影響試驗效果，雛鴕鳥采用分欄飼養(yǎng)。每天定時給料，具體時間為8：00、11：00、14：00、17：00四個時間段各喂一次，記錄每天總采食量。在試驗開始前，對鴕鳥舍全場進(jìn)行全面徹底噴霧式消毒，在飼喂試驗期間，嚴(yán)格按照長江大學(xué)鴕鳥研究所消毒程序進(jìn)行消毒。

1.2.3 樣品的采集與處理 飼養(yǎng)至第7天的非洲雛鴕鳥稱重。經(jīng)跖靜脈注射10%的烏拉坦（1 g/kg）稀釋液進(jìn)行全身麻醉，打開腹腔迅速取部分盲腸和結(jié)腸食糜放入10 mL帶蓋離心管中，立即放入液氮罐中速凍20 min后取出放入-80 ℃冰箱中冷凍保存，供測定酶活性用。

1.2.4 纖維素酶活的測定 準(zhǔn)確稱取食糜質(zhì)量，按質(zhì)量（g）∶試劑一（mL）=1∶9的比例加入9倍體積的試劑一，冰水浴勻漿，4 000 r/min常溫離心10 min，取勻漿上清液一部分待測，另一部分沸水浴5 min（使酶失活）后取出冷卻，制成煮沸的勻漿上清液。向測定管加入勻漿上清液50 μL，對照管加入煮沸的勻漿上清液50 μL。再分別向上述測定管、對照管加入試劑一50 μL、試劑二200 μL、蒸餾水50 μL，混勻，37 ℃孵育30 min后，立即取出放入沸水浴中煮沸15 min，取出流水冷卻，4 000 r/min常溫離心10 min，制備糖化液上清液。另取兩支試管，作為測定管和對照管。分別向測定管和對照管加入糖化液上清液50 μL，空白管加入蒸餾水50 μL，標(biāo)準(zhǔn)管加入2 mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液50 μL，再向上述測定管、對照管、空白管及標(biāo)準(zhǔn)管分別加入試劑三150 μL，混勻，沸水浴反應(yīng)15 min，取出流水冷卻。再向上述各管加入蒸餾水1 000 μL，混勻，波長550 nm，1 cm光徑，去離子水調(diào)零，測定各管OD值（南京建成，貨號：A138）。

1.3 統(tǒng)計分析

獲得的全部數(shù)據(jù)用SAS數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。所得數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，通過t檢驗法比較各組間的差異顯著性。P<0.05為差異顯著，P>0.05為差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

從表1中可以看出，當(dāng)Ghrelin濃度為10 μg/kg時，雛鴕鳥盲腸中纖維素酶的活性增加，且與對照相比差異顯著（P<0.05），結(jié)腸中纖維素酶的活性雖然有所降低，但與對照相比差異不顯著（P<0.05）；當(dāng)Ghrelin濃度為50 μg/kg時，盲腸和結(jié)腸中纖維素酶的活性都降低，且與對照相比差異均顯著（P<0.05）；當(dāng)Ghrelin濃度為100 μg/kg時，盲腸和結(jié)腸中纖維素酶的活性都增加，且與各組差異均達(dá)顯著水平（P<0.05）。以上結(jié)果說明， 一定劑量的Ghrelin能夠促進(jìn)雛鴕鳥大腸中纖維素酶的活性，從而增強(qiáng)其消化吸收能力，促進(jìn)雛鴕鳥的生長。

3 小結(jié)與討論

纖維素酶是起協(xié)同作用的多組分酶系，有研究認(rèn)為該酶系中的組分可分為兩類，I類水解可溶性纖維素較水解不溶性纖維素更為容易，Ⅱ類則相反[2]。雞、鴨、鵝等動物的粗纖維幾乎全部是在盲腸內(nèi)被消化的，這種消化依賴于盲腸微生物產(chǎn)生的纖維素酶，并且纖維素底物對酶解的敏感度受其結(jié)構(gòu)的影響很大，包括纖維中木質(zhì)素的含量、比表面積、結(jié)晶度及聚合度等[3]。已有研究表明不同品種的雞盲腸纖維素酶活力不同[4]，本研究結(jié)果表明，鴕鳥的纖維素酶在結(jié)腸和盲腸中都存在，盲腸中的活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于結(jié)腸，這就從理論上解釋了為什么鴕鳥能夠消化纖維素，且進(jìn)一步說明鴕鳥的粗纖維除在盲腸內(nèi)被消化外，在結(jié)腸中也有部分被消化，且高劑量的Ghrelin能夠增加盲腸和結(jié)腸中纖維素酶的活性，從而提高雛鴕鳥的消化能力。

參考文獻(xiàn)：

[1] 王益民，任戰(zhàn)軍，石芳萍.非洲黑頸鴕鳥原種繁殖性能研究[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報，2007，16（1）：43-44.

[2] 王 璋.食品酶學(xué)[M].北京：輕工業(yè)出版社，1990.

[3] 那 安，崔福綿，馬建華，等.康氏木霉AS3.4001纖維素酶系的研究[J].微生物學(xué)報，1985，25（1）：31-37.

[4] 王 娟，臧素敏，元 娜，等.太行雞、海蘭灰蛋雞生長期消化道主要酶系變化規(guī)律比較[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報，2010，19（6）：38-43.