表皮生長因子受體、人表皮生長因子受體-2在骨肉瘤組織中的表達及其臨床價值

徐宏輝，岳　煜，宋相建

(鄭州市骨科醫(yī)院小兒骨科,河南 鄭州 450001)

骨肉瘤多發(fā)生在青少年人群，目前無有效根治方法，化療是治療骨肉瘤的主要措施，但因化療時間較長，容易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移及化療抵抗，預后較差，5 a生存率不足30%[1]。臨床研究認為通過骨肉瘤分子標志物檢測能顯著提高預后，指導臨床開展靶向治療[2]。表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor ,EGFR)廣泛參與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移，促使細胞惡變。人表皮生長因子受體-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)是一種基因蛋白，同樣廣泛參與腫瘤的發(fā)展。本文選取我院2016年1月至2017年1月收治的骨肉瘤患者，應用免疫組化技術(shù)檢測EGFR、HER-2表達情況，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料入組我院2016年1月至2017年1月收治的50例骨肉瘤患者作為觀察組，其中男37例，女13例；年齡18～63(25.47±1.47)歲；病程15～21(18.59±1.47)a；病理類型：低級別骨肉瘤10例，普通骨肉瘤40例。另選48例癌旁正常骨組織作為對照組，其中男31例，女17例；年齡19～62(25.47±1.69)歲；病程15～20(17.59±1.54)a。2組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。納入標準：1)知情同意；2)病情穩(wěn)定。排除標準：1)合并其他骨類疾??；2)凝血功能障礙；3)伴有血液感染性疾病。

1.2方法所有患者接受病理活檢，獲得組織接受質(zhì)量分數(shù)4%的中性多聚甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片后進行脫水處理。磷酸鹽緩沖液沖洗，滴加EGFR、HER-2一抗，置于4 ℃恒溫環(huán)境中，過夜處理，而后再次接受沖洗，滴加二抗，37 ℃恒溫下孵育20 min，磷酸鹽緩沖液沖洗，DAB顯色，自來水沖洗，復染，脫水透明，封存。本文所使用測試盒及試劑均購自上海紀寧實業(yè)有限公司。為保證檢測的正確性，需對同一患者的活檢組織進行2次檢查。

1.3結(jié)果判斷EGFR、HER-2陽性表達位置：前者表達于細胞膜或細胞質(zhì)，后者表達于細胞膜。陽性判斷標準：信號呈現(xiàn)淡黃色或棕褐色。結(jié)果判斷使用定量計分法：陽性腫瘤細胞÷總細胞數(shù)×100%。染色強度定量計分標準：細胞呈現(xiàn)弱著色，除低倍視野不清晰外陽性細胞清晰可見，此為1分；細胞呈現(xiàn)中度著色，應用40倍視野可清晰發(fā)生細胞，此為2分；細胞強著色，40倍視野下清晰可見，3分。統(tǒng)計結(jié)束后，按照陽性細胞百分比積分：≤5%計為0分；6%～18%計為1分；19%～45%計為2分；≥46%計為3分。兩者所得積分相乘為總分，表達標準如下：0分為不表達；1～2分為弱表達；3～6分為中度表達；7～9分為強表達。陰性：不表達+弱表達；陽性：中度表達+強表達。

2　結(jié)果

2.1不同骨組織中EGFR表達情況比較觀察組骨肉瘤組織中EGFR陽性表達率為70.00%，而對照組癌旁正常骨組織未見EGFR表達，陽性表達率為 0.00%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見圖1。

2.2不同骨組織中HER-2表達情況比較觀察組骨肉瘤組織中HER-2陽性表達率為22.92%，高于對照組癌旁正常骨組織中的0.00%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見圖1。

3　討論

骨肉瘤多發(fā)生在間葉組織，其主要特點是梭形腫瘤細胞產(chǎn)生的骨樣性基質(zhì)。該病主要發(fā)生在青少年群體，且病灶部位集中在股骨遠端、肱骨近端，臨床癥狀為疼痛、腫脹、局部酥麻、疼痛，少部分患者合并病理性骨折。有研究[3]認為，骨肉瘤的形成、生長與生長因子有密切關(guān)系。不同的生長因子對不同階段的骨肉瘤形成起作用，且相互之間有較好的協(xié)同作用。不同的腫瘤組織受體蛋白或可預示臨床分期。EGFR、HER-2在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中起到至關(guān)重要的作用，兩者在與相應的配體結(jié)合后，能快速形成同源二聚體，發(fā)生自磷酸化[4]，激活細胞內(nèi)的信號傳導通路，調(diào)解細胞增殖及凋亡。有研究[5]認為，約54%的腫瘤發(fā)生與EGFR、HER-2有關(guān)。其中EGFR是原癌基因表達產(chǎn)物，與腫瘤細胞增殖、分化密切相關(guān)。EGFR在結(jié)直腸、肺癌、乳腺癌、骨肉瘤組織中高表達。HER-2與腫瘤患者預后情況有關(guān)，HER-2高表達的患者總生存時間及疾病無進展生存時間較短，大部分腫瘤患者負荷較大，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較高，組織學分級較差，腫瘤增殖指數(shù)較高[6]。HER-2能通過激活信號通路使腫瘤細胞增殖活性增高，凋亡受體得到抑制，從而使腫瘤細胞獲得較強的生長優(yōu)勢。HER-2還可調(diào)控細胞生長分化，影響正常細胞運動及黏附能力，促使腫瘤細胞發(fā)生轉(zhuǎn)移。HER-2表達可促進基質(zhì)金屬蛋白酶分泌，降解細胞外基質(zhì)，增強腫瘤細胞的浸潤能力，誘導血管生成及血管植入，往往預示患者預后不佳。俞華等[7]研究認為，結(jié)直腸癌患者EGFR陽性表達率明顯高于正常人，提示EGFR與結(jié)直腸癌惡性程度有關(guān)。目前，靶向藥物是腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點，分子靶向藥物多集中于上皮來源的腫瘤組織，合理選擇殺傷細胞治療藥物，能提高腫瘤治療效果。靶向藥物與傳統(tǒng)化療藥物相比，具有較高的特異性和較輕的不良反應。EGFR、HER-2可成為治療骨肉瘤的新靶點[8]。

圖1　骨肉瘤組織中EGFR(A)和HER-2(B)的陽性表達情況

本文結(jié)果顯示，觀察組EGFR、HER-2陽性率較高，而對照組未見EGFR、HER-2表達，提示EGFR可作為腫瘤惡性程度判斷指標，HER-2可作為預后判斷指標。潘東升等[9]認為，人體腫瘤的癌基因異常變化影響腫瘤發(fā)生、發(fā)展，癌基因的擴增及蛋白產(chǎn)物異常表達能作為人體腫瘤診斷及治療的重要依據(jù)。而且EGFR表達越高，預示HER-2表達可能性越高。但本文研究樣本量較少，未涉及EGFR、HER-2相關(guān)性，這尚需進一步研究。

綜上所述，骨肉瘤組織中EGFR、HER-2表達較高，與骨肉瘤患者的病情惡化程度及疾病分期有關(guān)，可作為診斷骨肉瘤的重要指標。