中藥清痤方干預(yù)痤瘡動(dòng)物模型金黃地鼠皮脂腺斑的實(shí)驗(yàn)研究

李思琪， 俞若熙， 肖連宇， 姜厚望， 王 琦

(北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院， 北京 100029)

痤瘡是青春期常見的慢性毛囊皮脂腺炎癥，常發(fā)生于人體面、胸、背等部位，屬中醫(yī)“肺風(fēng)粉刺”，常變現(xiàn)為粉刺、丘疹、結(jié)節(jié)、膿皰等癥狀[1]。目前學(xué)者多認(rèn)為病菌、微生物以及雄激素等對皮脂腺細(xì)胞產(chǎn)生刺激，使皮脂腺增生并分泌過多的皮脂使毛囊管角質(zhì)化，最終導(dǎo)致了痤瘡的形成[2]。清痤方是國醫(yī)大師王琦在治療痤瘡中常用的經(jīng)驗(yàn)方，前期對28例濕熱體質(zhì)的痤瘡患者通過清痤方加減調(diào)體治療痤瘡進(jìn)行觀察，結(jié)果表明總有效率為85.71%，隨訪發(fā)現(xiàn)大部分患者預(yù)后良好[3-4]。本研究以金黃地鼠雙側(cè)背部皮脂腺斑為痤瘡模型，研究中藥清痤方治療痤瘡的效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物成年SPF級雄性金黃地鼠60只，體質(zhì)量(120±10)g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物許可證號SCXK(京)2012-0001。

1.2試藥中醫(yī)清痤方購自北京中醫(yī)藥大學(xué)國醫(yī)堂中醫(yī)門診部；螺內(nèi)酯片(杭州民生藥業(yè)有限公司，批號T16E017)。

1.3儀器FA1004型電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)，605A型電子游標(biāo)卡尺(哈爾濱量具集團(tuán)有限責(zé)任公司)，NIKON ECLIPSE CI型正置光學(xué)顯微鏡(日本尼康)，NIKON DS-U3型成像系統(tǒng)(日本尼康)。

2 方法

2.1動(dòng)物的分組與給藥將60只金黃地鼠隨機(jī)分為5組，即空白組(生理鹽水)、陽性對照組(螺內(nèi)酯0.7 mg/mL)、清痤方低劑量組(清痤方1.14 g/mL)、清痤方中劑量組(清痤方2.28 g/mL)、清痤方高劑量組(清痤方4.56 g/mL)，每組12只，給予全價(jià)營養(yǎng)顆粒飼料，自由飲水，室溫(22±2)℃，濕度59%～65%，單籠飼養(yǎng)，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后,按照上述劑量給藥，給藥量為10 mL/kg, 每天灌胃給藥1次,連續(xù)30 d。

2.2標(biāo)本采集的方法適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后，稱量各組金黃地鼠體質(zhì)量，用剃毛器將金黃地鼠雙側(cè)背部的毛剃除，使皮膚表面的皮脂腺斑露出，在強(qiáng)光下測量斑塊的最大橫徑和最大縱徑，拍照記錄。給藥30 d后采集標(biāo)本，采集前禁食，自由飲水，稱量體質(zhì)量，再次測量皮脂腺斑的面積，進(jìn)行拍照記錄,切取1 cm×1 cm皮脂腺斑皮膚組織，置于10%甲醛溶液中進(jìn)行固定。

2.3指標(biāo)檢測方法

2.3.1 皮脂腺斑面積的變化 以最大縱徑×最大橫徑計(jì)算皮脂腺斑面積，分別計(jì)算實(shí)驗(yàn)前后金黃地鼠雙側(cè)皮脂腺斑的面積，進(jìn)行觀察比較。

2.3.2 皮脂腺斑組織結(jié)構(gòu)的變化 將切取的金黃地鼠雙側(cè)皮脂腺斑皮膚組織用石蠟包埋、切片、HE染色，觀察皮脂腺組織的厚度和松散程度。皮脂腺厚度計(jì)算：(+++)重疊腺葉數(shù)≥4葉；(++)重疊腺葉數(shù)2～3葉；(+)重疊腺葉數(shù)1葉；(-)重疊腺葉數(shù)為0。皮脂腺松散程度：密(1個(gè)視野中連續(xù)腺葉數(shù)≥3)；松(1個(gè)視野中連續(xù)腺葉數(shù)約<3)。

3 結(jié)果

3.1給藥前后金黃地鼠體質(zhì)量的變化與給藥前比較，給藥后各組金黃地鼠體質(zhì)量均增長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與空白組比較，給藥后陽性對照組、清痤方低劑量組和中劑量組金黃地鼠體質(zhì)量變化不大，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與空白組及陽性對照組比較，給藥后清痤方中、高劑量組金黃地鼠體質(zhì)量增長程度較小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

3.2給藥前后金黃地鼠皮脂腺斑面積的變化與空白組比較，給藥后各組金黃地鼠皮脂腺斑面積均減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與陽性對照組比較，給藥后清痤方高劑量組金黃地鼠皮脂腺斑面積減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表2、圖1。

表1 給藥前后金黃地鼠體質(zhì)量

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01； 與陽性對照組比較，#P<0.05，##P<0.01。

治療前

治療后

圖1清痤方高劑量組同一只金黃地鼠治療前、后比較

3.3給藥后金黃地鼠皮脂腺斑組織學(xué)的變化給藥后空白組金黃地鼠皮脂腺腺葉大且飽滿，排列緊密重疊腺葉數(shù)多，呈多層分葉狀分布，多為4層及以上。陽性對照組、清痤方低劑量組、清痤方中劑量組金黃地鼠皮脂腺結(jié)構(gòu)稍有變化，大部分皮脂腺變薄，重疊腺葉數(shù)多為1～3層。清痤方高劑量組金黃地鼠皮脂腺結(jié)構(gòu)變化明顯，皮脂腺總體數(shù)量減少，腺體層數(shù)減少，分葉體積縮小，分布不均，排列疏松，見圖2。與空白組相比較，清痤方高劑量組金黃地鼠皮脂腺厚度變小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。與空白組相比較，陽性對照組和清痤方高劑量組金黃地鼠皮脂腺松散度變小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表2 給藥前后皮脂腺斑面積

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01； 與陽性對照組比較，#P<0.05，##P<0.01。清痤方高劑量組2只金黃地鼠因灌胃操作不當(dāng)死亡。

A: 空白組

B: 陽性對照組

C: 清痤方低劑量組

D: 清痤方中劑量組

E: 清痤方低高劑量組

組別n++++++-空白組124530陽性對照組121551清痤方低劑量組120651清痤方中劑量組120471清痤方高劑量組100244

表4 清痤方對皮脂腺斑松散程度的影響

注： 與空白組比較，*P<0.05。

4 討論

痤瘡是一種常見的損美性疾病，影響了患者的個(gè)人及社會(huì)生活，增加了患者的焦慮情緒[5]。男性和女性痤瘡的發(fā)病概率大致相同，但男性的病情更為嚴(yán)重[6]。中藥清痤方將調(diào)節(jié)機(jī)體濕熱放在首位，蘆根清透肺熱，冬瓜子清肺利濕，桃仁活血祛瘀，枇杷葉清胃熱降肺氣，白花蛇舌草清熱解毒兼利濕，薏苡仁健脾滲濕，清熱祛毒，從根源上去除產(chǎn)生濕熱之源。薏苡仁中有類雌激素的成分，可以促進(jìn)黃酮以及雌激素的生成[7]。丹參具有血祛瘀，涼血消癰的功效，去瘀生新而不傷正，其中的丹參酮[8-9]具有抗炎抑菌以及抑制雄性激素的作用，可起到抗痤瘡丙酸桿菌、抗雄激素的效果。皮脂腺組織的分泌活動(dòng)受到雄性激素的影響，皮脂具有潤澤皮膚、毛發(fā)及殺菌作用，青春期分泌活躍?，F(xiàn)代研究認(rèn)為皮脂溢出增多是痤瘡發(fā)病的重要原因，由于體內(nèi)雄性激素作用于皮脂腺，使皮脂腺增生及過度分泌皮脂，同時(shí)毛囊皮脂腺導(dǎo)管中微生物分解皮脂成為有刺激性的脂肪酸，從而刺激毛囊上皮增生角化，導(dǎo)致皮脂排泄障而形成，致使出現(xiàn)痤瘡等損害[10-11]。皮脂腺分泌過剩以及排泄不暢易導(dǎo)致細(xì)菌感染，出現(xiàn)炎癥性丘疹、膿皰以及囊腫，部分患者甚至?xí)霈F(xiàn)繼發(fā)增生性或萎縮性瘢痕以及色素沉著等，所以調(diào)控皮脂腺功能，對痤瘡的防治具有重要意義。本研究認(rèn)為濕熱內(nèi)蘊(yùn)是濕熱體質(zhì)者出現(xiàn)痤瘡的根本原因，要根治痤瘡的復(fù)發(fā)必須強(qiáng)調(diào)治其內(nèi)在體質(zhì)，西醫(yī)治療痤瘡存在較多的副作用，從體質(zhì)進(jìn)行干預(yù)為痤瘡的治療提供了新的思路。