血清cf-DNA定量檢測對宮頸癌早期輔助診斷及預后判斷中的價值

(三亞市中醫(yī)院婦產(chǎn)科，海南 三亞 572000)

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一，本病由人類乳頭瘤病毒引起，可經(jīng)皮膚傳播，人感染后有十幾年的潛伏期，因此早期感染的臨床癥狀并不明顯，因此，在醫(yī)院就診的患者多為表現(xiàn)出明顯癥狀的癌癥晚期患者。同時本病在臨床上具有極高的漏診率和誤診率[1]，早發(fā)現(xiàn)、早治療對于該類患者的治療與病情發(fā)展的控制極為關(guān)鍵，因此對于該類患者，有效的早期診斷方法就顯得尤為重要[2-3]。近年來，血清腫瘤標志物的聯(lián)合檢測在宮頸癌的診斷中發(fā)揮了重要的意義，有大量研究顯示，在宮頸癌患者血清中可檢測到無細胞狀態(tài)的和腫瘤相關(guān)的游離DNA(cf-DNA)。本文旨在探討血清cf-DNA對宮頸癌患者早期診斷和臨床預后判斷的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料將本院自2014年1月～2015年1月間收治的宮頸癌患者48例作為研究組，年齡27～61歲，中位年齡45.28±4.12歲；同時選取在本院婦科門診體檢的健康女性50例作為對照組，年齡24～63歲，中位年齡44.82±5.19歲，根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)的分期標準對所有患者進行分期。兩組患者年齡等一般資料之間比較，差異無顯著性(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1腫瘤標志物的檢測所有研究對象在清晨空腹的狀態(tài)下，抽取3 mL靜脈血，1 000 r/min離心5 min后取血清備檢。使用電化學發(fā)光分析儀監(jiān)測糖類抗原125(CA125)、糖類抗原19-9(CA19-9)、鱗狀細胞癌抗原(SCC)、β人絨毛膜促性腺激素(β-HCG)。

1.2.2cf-DNA定量檢測將獲得的血清使用雙蒸水按照1∶20倍稀釋，使用Tris-DNA緩沖液將DNA標準液稀釋為0、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00、400.00 μg/L，按照標準液的吸光度和濃度描繪出標準曲線，求得回歸方程，即Y=1.689X，根據(jù)標準曲線計算出每孔cf-DNA的濃度，每個樣本的游離DNA含量等于20倍濃度值。

1.3觀察指標觀察兩組研究對象血清CA125、CA19-9、SCC、β-HCG的濃度，比較兩組研究對象血清cf-DNA水平，并觀察不同病理特征宮頸癌患者血清cf-DNA水平的差異。

1.4統(tǒng)計學方法使用統(tǒng)計學軟件SPSS17.0對數(shù)據(jù)進行分析處理，計量資料以均數(shù)±標準差表示，使用t檢驗，組間比較使用X2檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)　果

2.1兩組血清腫瘤標志物水平比較研究組宮頸癌患者SCC、β-HCG的濃度明顯升高(P<0.05)，但血清中CA125、CA19-9的水平差異不大(P>0.05)，見表1。

2.2兩組血清cf-DNA比較研究組血清cf-DNA的濃度(1 561.29±248.61 μg/L)明顯高于對照組(169.20±45.84 μg/L)，兩組比較，差異有顯著性(t=36.741，P<0.05)。

表1　兩組研究對象各項指標比較

2.3血清腫瘤標志物及cf-DNA診斷結(jié)果比較血清腫瘤標志物CA125、CA19-9、SCC、β-HCG靈敏度分別為56.5%(13/13+10)、50.0%(12/12+12)、62.8%(22/22+13)、60.6%(20/20+13)；特異度為53.3%(40/40+35)、51.3%(38/38+36)、58.7%(37/37+26)、56.9%(37/37+28)；cf-DNA靈敏度及特異度分別為68.0%(32/32+15)、68.6%(35/35+16)，cf-DNA靈敏度及特異度高于CA125、CA19-9、SCC、β-HCG。見表2。

表2　血清腫瘤標志物及cf-DNA診斷結(jié)果比較

2.4病理參數(shù)、臨床分期及病理組織學分級和血清cf-DNA的關(guān)系不同臨床病理特征的宮頸癌患者檢測血清cf-DNA水平，發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者臨床分期為Ⅱ期、Ⅲ期的患者和癌細胞低分化程度的患者血清中cf-DNA水平顯著高于Ⅰ期患者和中、高分化程度的患者(P<0.05)，血清cf-DNA和臨床病理組織分型無明顯的相關(guān)性，見表3。

表3　病理特征和血清cf-DNA的關(guān)系

3　討　　論

在全球范圍內(nèi)，每年約有20萬女性死于宮頸癌[4]。在發(fā)展中國家本病的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，由于本病的早期臨床癥狀并不明顯，大部分患者就診時已經(jīng)發(fā)展為晚期，因此早期診斷和治療對提高患者生存質(zhì)量具有重要的意義。據(jù)文獻報道，血清腫瘤標志物如CA125、CA19-9、SCC、β-HCG的濃度進行聯(lián)合檢測在宮頸癌患者的診斷中具有良好的敏感性[5-6]。

近年來，有研究顯示宮頸癌患者DNA含量可明顯升高，定量檢測DNA含量可作為輔助診斷宮頸癌的有效手段，但該方法需獲取正常上皮組織的DNA，易影響檢測結(jié)果。而檢測血清cf-DNA相比于癌細胞DNA更為準確和簡單。血清cf-DNA是廣泛存在于腦脊液、滑膜液、血液等液體中的無細胞狀態(tài)的DNA，其主要來源為壞死及凋亡的腫瘤細胞。早在1977年，學者Leon發(fā)現(xiàn)腫瘤患者體內(nèi)存在cf-DNA，此后，其作為一個研究的熱點得到了深入的研究，大量研究結(jié)果證實，在健康人體內(nèi)cf-DNA維持在一個相對比較低的穩(wěn)定水平，但是癌癥患者體內(nèi)cf-DNA的水平會明顯升高，因此他們提出血液中cf-DNA的水平和腫瘤發(fā)生、發(fā)展、好轉(zhuǎn)具有很大的相關(guān)性，因此可通過測定血清cf-DNA的水平變化輔助惡性腫瘤診斷、療效判定和預后預測等[7-8]。定性分析血中游離DNA有助于診斷腫瘤，定量分析血中游離DNA則有助于判定腫瘤分級，確定腫瘤組織處于的發(fā)展階段，為判定預后包括轉(zhuǎn)移風險和制定治療方案提供參考，目前，血液游離DNA的檢測方法包括熒光免疫法、放射免疫法和ELISA等，但是現(xiàn)在的DNA提取技術(shù)限制了提取的純度，導致結(jié)果不夠理想并且費時，從而限制了游離DNA在臨床的應(yīng)用，本次實驗采用的檢測方法避免了洗滌造成的樣品損耗，使檢測過程更為靈敏和簡單。

本文結(jié)果顯示，宮頸癌患者血清中SCC、β-HCG、血清cf-DNA的濃度明顯升高(P<0.05)，因此，cf-DNA水平的變化和宮頸癌發(fā)生具有密切的關(guān)系，這一結(jié)果與李曉琳等[9]研究一致；在宮頸癌患者臨床分期為Ⅱ期、Ⅲ期的患者和癌細胞低分化程度的患者血清中cf-DNA水平顯著高于Ⅰ期患者和中、高分化程度的患者，這就說明宮頸癌的臨床分期越高，cf-DNA的濃度越高，在癌組織分化程度越低使cf-DNA的濃度越高，這對預測患者預后有很大的臨床意義，說明患者血清cf-DNA的濃度越高，患者病情進展越快，預后不良，文獻報道惡性腫瘤發(fā)病、發(fā)展、復發(fā)、好轉(zhuǎn)和血清cf-DNA的水平密切相關(guān)，本文結(jié)果和陳湧彧[10]研究一致。

綜上所述，血清cf-DNA水平可作為宮頸癌早期診斷和預后判斷的一個標準，檢測其水平對宮頸癌診斷具有較好的特異性和敏感度，且操作方法簡單易行，可在臨床上推廣使用。