澤瀉湯加味方對(duì)高脂血癥模型大鼠肝組織中水通道蛋白8的影響

張睦清 韓雪 段思明 張一昕 王亞芬 張納博 王彥蕊

中圖分類號(hào) R285 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）05-0651-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.05.19

摘 要 目的：觀察澤瀉湯加味方對(duì)高脂血癥模型大鼠肝組織中水通道蛋白8（AQP8）表達(dá)的影響，探討該方防治高脂血癥的機(jī)制。方法：將60只大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組（蒸餾水）、模型組、陽性對(duì)照組（辛伐他汀1.89 mg/kg）和澤瀉湯加味方高、中、低劑量組（29.56、14.78、7.39 g/kg，以生藥量計(jì)），每組10只。除空白對(duì)照組大鼠給予正常飲食外，其余各組大鼠均給予高脂飼料以復(fù)制高脂血癥模型，并于造模同時(shí)每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥5周。給藥結(jié)束后，檢測(cè)大鼠血清中三酰甘油（TG）、膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）含量，觀察大鼠肝組織病理形態(tài)學(xué)變化，并檢測(cè)大鼠肝組織中AQP8 mRNA和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中TG、TC、LDL-C含量顯著升高（P<0.05或P<0.01），血清中HDL-C含量顯著降低（P<0.01），肝組織出現(xiàn)細(xì)胞排列不整齊、肝血竇充血水腫等病理學(xué)變化，肝組織中AQP8 mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，各給藥組大鼠上述指標(biāo)均顯著改善（P<0.05或P<0.01），肝組織的結(jié)構(gòu)趨于正常、脂肪變性明顯減輕。結(jié)論：澤瀉湯加味方可能通過下調(diào)肝組織中AQP8 mRNA及蛋白的表達(dá)，發(fā)揮其對(duì)高脂血癥的防治作用。

關(guān)鍵詞 澤瀉湯加味方；高脂血癥；水通道蛋白8；大鼠

ABSTRACT OBJECTIVE： To observe the effects of Modified Rhizoma Alismatis decoction on the expression of aquaporin 8 （AQP8） in liver tissue of hyperlipemia model rats， and to investigate the mechanism of preventing and treating hyperlipemia. METHODS： Total of 60 rats were randomly divided into blank control group （distilled water）， model group， positive control group （simvastatin 1.89 mg/kg） and modified Rhizoma Alismatis decoction high-dose， medium-dose and low-dose groups （29.56， 14.78， 7.39 g/kg， calculated by crude drug）， with 10 rats in each group. Those groups were given high-fat diet to induce hyperlipemia model and given relevant medicine intragastrically once a day for consecutive 5 weeks except that blank control group was given normal diet. After administration， the serum contents of TG， TC， HDL-C and LDL-C in rats were detected， and the pathomorphology changes of liver tissue were observed； the mRNA and protein expression of AQP8 in liver tissue were detected. RESULTS： Compared blank control group， the serum contents of TG， TC and LDL-C in model group were increased significantly （P<0.05 or P<0.01）， while the serum content of HDL-C was decreased significantly （P<0.01）； pathological changes were found in liver tissue， such as irregular cell arrangement and hepatic sinusoidal hyperemia and edema； mRNA and protein expression of AQP8 in liver tissue were increased significantly （P<0.01）. Compared with model group， above indexes of treatment groups were improved significantly （P<0.05 or P<0.01）； the structure of liver tissue tended to be normal and the fatty degeneration was obviously alleviated. CONCLUSIONS： Modified Rhizoma Alismatis decoction can regulate the mRNA and protein expression of AQP8 in liver tissue so as to play the effects on the prevention and treatment of hyperlipidemia.

KEYWORDS Modified Rhizoma Alismatis decoction； Hyperlipidemia； Aquaporin 8； Rat

高脂血癥（Hyperlipidemia，簡(jiǎn)稱為“HYP”）是導(dǎo)致心腦血管疾病獨(dú)立而重要的危險(xiǎn)因素之一，積極有效地調(diào)節(jié)血脂是防治心腦血管疾病的重要途徑[1]。常用的心腦血管治療藥物有他汀類、貝特類等，雖療效顯著，但因副作用較多而限制了其臨床應(yīng)用[2]。近年來，中醫(yī)藥在防治HYP方面顯示出了多途徑、多靶點(diǎn)、整體調(diào)節(jié)、不良反應(yīng)較少的優(yōu)勢(shì)。中醫(yī)根據(jù)HYP臨床表現(xiàn)特點(diǎn)，將其歸屬于“痰濁”“血瘀”等范疇，而脾失健運(yùn)、濕聚痰生、壅滯血脈為其主要發(fā)病機(jī)制[3]，健脾祛濕消痰為其有效治法。

澤瀉湯出自張仲景《金匱要略》，由澤瀉、白術(shù)兩味中藥材組成，方中澤瀉功利水濕、消痰濁，為君藥；白術(shù)健脾益氣、燥濕利水以治生痰之源，為臣藥。澤瀉湯加味方是在澤瀉湯的基礎(chǔ)上增加了一味中藥荷葉。荷葉升清降濁、祛濕利尿，三藥合用，標(biāo)本兼顧，共奏祛濕化痰、健運(yùn)脾胃之功[4]。水通道蛋白（AQPs）是一種跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白[5]，參與液體的吸收、分泌及調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外水液平衡的生理病理過程，對(duì)機(jī)體的水液平衡具有重要的調(diào)節(jié)作用[6]。水液代謝失常引起的濕聚生痰是HYP的主要病機(jī)，而AQPs對(duì)調(diào)節(jié)水液代謝發(fā)揮著重要的作用，故筆者推測(cè)AQPs的表達(dá)失調(diào)與HYP發(fā)病具有密切的相關(guān)性。目前發(fā)現(xiàn)的AQPs有13個(gè)亞型， 其中，AQP8主要存在于肝細(xì)胞中，且表達(dá)量最高[7]。因此，本研究通過觀察澤瀉湯加味方對(duì)HYP大鼠肝細(xì)胞中AQP8 mRNA和蛋白表達(dá)的影響，探討其防治HYP的作用機(jī)制。

1 材料

1.1 儀器

PE 9600型聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增儀（美國(guó)PE公司）；Humalyzer 2000型半自動(dòng)生化分析儀（德國(guó) Merck公司）；DYCZ-24DN型電泳儀、DYCP-31CN型電泳槽（北京六一生物科技有限公司）；GDS-8000 System型UVP凝膠成像系統(tǒng) （美國(guó)Thermo公司）；WSE-4040型半干轉(zhuǎn)膜儀系統(tǒng)（日本Atto公司）；Spectronic? Genesystm型紫外-可見分光光度計(jì)（美國(guó)MiltonRoy公司）； BX51T-PHD-J11型全能顯微鏡（日本 Olympus公司）。

1.2 藥品與試劑

澤瀉湯加味方組成為澤瀉顆粒（批號(hào)：5073461，規(guī)格：每袋1.5 g，相當(dāng)于臨床使用量飲片10 g）50 g、白術(shù)顆粒（批號(hào)：5063421，規(guī)格：每袋3.0 g，相當(dāng)于臨床使用量飲片10 g）20 g、荷葉顆粒（批號(hào)：505037T，規(guī)格：每袋0.5 g，相當(dāng)于臨床使用量飲片10 g）10 g，均購自廣東一方制藥有限公司，臨用時(shí)用100 ℃蒸餾水充分溶解；辛伐他汀片（石藥控股集團(tuán)有限公司，批號(hào)：380150701，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20093007，規(guī)格：20 mg/片，加至0.5%羧甲基纖維素鈉混懸液中攪拌均勻）；膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)：201501、201411）；高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C，長(zhǎng)春匯力生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：2015025、2015055）；總RNA提取試劑、cDNA合成試劑盒、DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)物（Marker，日本Takara公司，批號(hào)：9108、6210A、DL2000）； AQP8兔抗鼠免疫球蛋白（IgG）多克隆抗體（美國(guó)Origene公司，批號(hào)：TA323215s）；兔免疫組化（SP）試劑盒、二喹啉甲酸（DAB）顯色劑（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：16159A07、K164920D）；β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）引物序列設(shè)計(jì)來源于NCBI Reference Sequence： NM_031144.3，AQP8引物序列設(shè)計(jì)來源于NCBI Reference Sequence： NM_019158.2。

1.3 動(dòng)物

健康清潔級(jí)SD大鼠60只，♂，體質(zhì)量160～180 g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（生產(chǎn)合格證號(hào)：1511283）。購入后飼養(yǎng)于清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn)。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

將60只SD大鼠按體質(zhì)量分層原則隨機(jī)分為6組，分別為空白對(duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組和澤瀉湯加味方低、中、高劑量組，每組10只。除空白對(duì)照組大鼠喂飼普通飼料外，其余各組大鼠均喂飼高脂飼料（組成比例為膽固醇1.5%、豬油10%、豬膽酸鈉0.5%、普通飼料88%，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工）復(fù)制HYP大鼠模型[8]。從造模第1天起，空白對(duì)照組與模型組大鼠灌服蒸餾水，陽性對(duì)照組灌服1.89 mg/kg辛伐他?。ǜ鶕?jù)臨床等效劑量換算而得），澤瀉湯加味方高、中、低劑量組大鼠分別灌服以生藥量計(jì)7.39、14.78、29.56 g/kg藥液（根據(jù)成人臨床用量的1、2、4倍換算而得），各組大鼠均按1 mL/100 g給藥，每天給藥1次，連續(xù)給藥5周。

2.2 樣本采集及處理

末次給藥后大鼠禁食不禁水24 h，麻醉后股動(dòng)脈取血，室溫靜置30 min，在4 ℃條件下以離心半徑為10 cm、3 000 r/min離心10 min，采集血清置于EP 管中，待檢。迅速剖腹取出肝組織，于肝最大葉處取兩塊適宜大小的肝組織液氮保存，以觀察AQP8 mRNA表達(dá)。再取1 cm×1 cm×0.5 cm大小的肝組織，置于4%多聚甲醛液中固定，以觀察肝組織病理學(xué)變化。

2.3 血脂指標(biāo)檢測(cè)

采用半自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)大鼠血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C含量。

2.4 肝組織病理學(xué)觀察

將4%多聚甲醛固定的肝組織常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片（厚度為3 μm），行蘇木精-伊紅（HE）染色，顯微鏡下觀察肝組織的病理形態(tài)學(xué)變化。

2.5 肝組織中AQP8 mRNA表達(dá)

采用反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）法檢測(cè)肝組織中AQP8 mRNA表達(dá)。取肝組織100 mg，加入到1 mL Trizol試劑中，于冰上勻漿，提取總RNA，紫外-可見分光光度計(jì)測(cè)量其濃度和純度，電泳檢測(cè)其完整性。調(diào)整RNA質(zhì)量濃度為 1 ?g/?L，將其反轉(zhuǎn)錄成 cDNA。擴(kuò)增引物序列：AQP8上游引物為5′ -ATATGTCTGGGGAGCAGACGC-3′ ，下游引物為5′ -GGCTGCAGGAGCCCAGTATT- 3′ ，擴(kuò)增產(chǎn)物片段長(zhǎng)度為211 bp；大鼠β-actin上游引物為5′ -CCAAGGCCAACCGCGAGAAGATGAC-3′ ，下游引物為5′ -AGGGTACATGGTGGTGGCGCCAGAC-3′ ，擴(kuò)增產(chǎn)物片段長(zhǎng)度為587 bp。反應(yīng)體系：Taq DNA聚合酶1 μL， dNTPs 2 μL，上樣染料2 μL，穩(wěn)定劑、優(yōu)化劑、反應(yīng)緩沖液共25 μL，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)產(chǎn)物2 μL，上、下游引物各2 μL，最后加水補(bǔ)至50 μL。PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件：94 ℃、10 min；94 ℃、30 s，56 ℃、30 s，72 ℃、30 s，共30個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min。半定量分析：取每個(gè)標(biāo)本的擴(kuò)增產(chǎn)物6 μL進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，以DNA Marker作為標(biāo)準(zhǔn)分子量標(biāo)記，電泳后攝片，并進(jìn)行光密度掃描，以β-actin校正作相對(duì)量分析，以目標(biāo)基因與β-actin積分光密度的比值表示目標(biāo)基因的表達(dá)水平。

2.6 肝組織中AQP8蛋白的表達(dá)

2.6.1 免疫組化法觀察肝組織中AQP8蛋白的表達(dá) 將4%多聚甲醛固定的肝組織常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片（厚度為3 μm），磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4）清洗，3%H2O2液室溫孵育20 min，PBS清洗，0.01 mol/L枸櫞酸緩沖液（pH 6.0）微波爐內(nèi)抗原修復(fù)30 min（92 ℃），室溫冷卻，PBS清洗，滴加10%正常山羊血清工作液封閉，37 ℃溫箱孵育30 min，吸棄多余血清，滴加兔抗鼠AQP8抗體（1 ∶ 100），4 ℃冰箱孵育過夜，PBS清洗；滴加二抗工作液，37 ℃溫箱孵育30 min，PBS清洗；滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈酶素卵白素（S-A/HRP）工作液，37 ℃溫箱孵育30 min，PBS清洗；DAB室溫下顯色5 min，顯微鏡下監(jiān)視，PBS充分沖洗，終止顯色。采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖象分析系統(tǒng)，在放大100倍下每張切片取8個(gè)視野，陽性表達(dá)位于肝細(xì)胞胞漿，呈棕黃色，細(xì)胞核呈藍(lán)色，測(cè)定平均光密度作半定量分析。

2.6.2 Western blot法檢測(cè)肝組織中AQP8蛋白表達(dá) 取大鼠肝組織約100 mg，液氮研磨，然后轉(zhuǎn)移到含1 mmol/L 苯甲基磺酰氟的900 μL RIPA中性裂解液中，混勻，超聲裂解，然后在4 ℃溫度下以離心半徑為10 cm、12 000 r/min離心15 min，收集上清（即總蛋白），進(jìn)行蛋白含量的測(cè)定。蛋白煮沸變性后，經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，電轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯膜上，5%脫脂奶粉封閉，一抗（1 ∶ 600）4 ℃孵育過夜，PBST洗膜3次，二抗（1 ∶ 3 000）室溫孵育1.5 h，PBST洗膜3次，暗室曝光，X膠片上顯影，采用Tanon1600全自動(dòng)數(shù)碼凝膠圖像分析系統(tǒng)對(duì)膠片進(jìn)行掃描，采用Tanon Gis軟件分析條帶灰度值，以AQP8蛋白條帶灰度值與內(nèi)參β-actin條帶灰度值的比值表示AQP8蛋白的表達(dá)水平。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以x±s表示，采用單因素方差分析，當(dāng)方差不齊性時(shí)組間兩兩比較采用Dunnett T3檢驗(yàn)，當(dāng)方差齊性時(shí)采用LSD檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 血脂指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中TC、TG、LDL-C 含量顯著升高（P<0.01），HDL-C含量顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠血清中TC、TG、LDL-C含量均顯著降低（P<0.05或P<0.01），HDL-C含量顯著升高（P<0.01）。與澤瀉湯加味方低劑量組比較，陽性對(duì)照組和澤瀉湯加味方高劑量組大鼠血清中TC、TG、LDL-C含量顯著降低（P<0.01），HDL-C含量顯著升高（P<0.05或P<0.01）；澤瀉湯加味方中劑量組大鼠血清中TC含量顯著降低（P<0.05）。與澤瀉湯加味方中劑量組比較，陽性對(duì)照組和澤瀉湯加味方高劑量組大鼠血清中TC、TG、LDL-C含量顯著降低（P<0.05或P<0.01），HDL-C含量顯著升高（P<0.05或P<0.01），結(jié)果見表1。

3.2 肝組織病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果

空白對(duì)照組大鼠肝細(xì)胞為規(guī)則六邊形，排列整齊，圍繞中央靜脈呈放射狀分布；肝血竇結(jié)構(gòu)正常，無脂肪滴和炎性浸潤(rùn)。模型組大鼠肝細(xì)胞排列不整齊，且出現(xiàn)大量脂肪滴，細(xì)胞核位置被擠壓偏離；肝血竇充血水腫。陽性對(duì)照組大鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，脂肪滴明顯減少；肝血竇充血水腫減輕，但存在細(xì)胞壞死及炎性浸潤(rùn)。與模型組比較，澤瀉湯加味方高、中、低劑量組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)排列清晰，脂肪滴也不同程度減少，肝血竇形態(tài)趨于正常，其中尤以高劑量組效果最為顯著，結(jié)果見圖1。

3.3 肝組織中AQP8 mRNA表達(dá)水平測(cè)定結(jié)果

與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠肝組織中AQP8 mRNA表達(dá)水平顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠肝組織中AQP8 mRNA表達(dá)均顯著降低（P<0.01）。與澤瀉湯加味方低、中劑量組比較，澤瀉湯加味方高劑量組大鼠肝組織中AQP8 mRNA表達(dá)均顯著降低（P<0.05或P<0.01）?？瞻讓?duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組和澤瀉湯加味方低、中、高劑量組大鼠肝組織中 mRNA表達(dá)水平測(cè)定結(jié)果依次為0.272±0.011、0.596±0.014、0.511±0.018、0.483±0.035、0.461±0.122、0.383±0.020，電泳圖見圖2。

3.4 肝組織中AQP8蛋白表達(dá)水平測(cè)定結(jié)果

3.4.1 免疫組化測(cè)定結(jié)果 空白對(duì)照組大鼠僅在肝細(xì)胞的細(xì)胞膜上有少許AQP8蛋白表達(dá)，呈淺棕色。模型組大鼠除在細(xì)胞膜上有AQP8蛋白表達(dá)外，細(xì)胞核、細(xì)胞漿也表達(dá)較多，呈深棕色。與模型組比較，各給藥組大鼠肝組織中AQP8蛋白的陽性表達(dá)數(shù)量、著色程度均降低，免疫組化圖見圖3。

半定量分析結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠肝組織中AQP8蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，各給藥組大鼠肝組織中AQP8蛋白表達(dá)水平均顯著降低，且澤瀉湯加味方高劑量組大鼠肝組織中AQP8蛋白表達(dá)水平低于澤瀉湯加味方低、中劑量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）?？瞻讓?duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組和澤瀉加味方低、中、高劑量組大鼠肝組織中蛋白表達(dá)水平測(cè)定結(jié)果依次為0.018±0.004 3、0.054±0.009 3、0.045±0.007 5、0.042±0.007 8、0.037±0.005 7、0.029±0.006 8。

3.4.2 Western blot法測(cè)定結(jié)果 與空白對(duì)照組（0.341±0.069）比較，模型組（0.806±0.131）大鼠肝組織中AQP8蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，陽性對(duì)照組和澤瀉湯加味方低、中、高劑量組（0.685±0.100、0.571±0.073、0.512±0.061、0.431±0.069）大鼠肝組織中AQP8蛋白表達(dá)水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01），且澤瀉湯加味方高劑量組大鼠肝組織中AQP8蛋白表達(dá)水平低于澤瀉湯加味方低、中劑量組（P<0.05或P<0.01），電泳圖見圖4。

4 討論

中藥免煎顆粒是以傳統(tǒng)中藥飲片為原料，經(jīng)提取濃縮制成的、供中醫(yī)臨床配方用的顆粒，具有統(tǒng)一規(guī)格、統(tǒng)一劑量和統(tǒng)一質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。其在味道和療效方面與中藥飲片煎煮后效果大體一致，且具有穩(wěn)定性好、吸收快速、攜帶方便、應(yīng)用方便等優(yōu)點(diǎn)，目前使用較為流行，因此本研究選用了中藥免煎顆粒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

AQPs是細(xì)胞膜上選擇性高效轉(zhuǎn)運(yùn)水分子的特異孔道，其在維持細(xì)胞內(nèi)外水液平衡具有重要的作用。AQPs介導(dǎo)水的轉(zhuǎn)運(yùn)作用一旦失常，就會(huì)引起體內(nèi)多種機(jī)能的紊亂。AQPs主要有13種亞型（AQP0～AQP12）[9]，肝組織中主要有AQP0、AQP1、AQP3、AQP8、AQP9、AQP11等6種亞型，其中以AQP8的表達(dá)量最高[10]。研究發(fā)現(xiàn)，AQP8又以兩種亞型存在于肝細(xì)胞中，一種與滲透性水轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)，另一種在線粒體上表達(dá)，參與了線粒體容量的穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)[11]。AQP8的表達(dá)異常，不僅影響著肝細(xì)胞通透性的強(qiáng)弱、水液代謝，而且關(guān)系著肝細(xì)胞線粒體的能量代謝，影響著肝細(xì)胞功能和肝對(duì)脂代謝作用的發(fā)揮。而HYP的病機(jī)關(guān)鍵是脾失健運(yùn)、痰濕內(nèi)阻，肝臟是脂質(zhì)代謝的重要器官。因此，通過觀察肝組織中AQP8的表達(dá)變化，探討中藥及其復(fù)方防治HYP的作用機(jī)制具有重要意義，有望成為一個(gè)新的研究方向。

本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠血清中TG、TC、LDL-C含量較空白對(duì)照組顯著升高，HDL-C含量較空白對(duì)照組顯著降低，這提示HYP造模成功；另外AQP8 mRNA及其蛋白的表達(dá)水平升高，提示大鼠血脂異常與肝組織中AQP8的表達(dá)失?？赡艽嬖谙嚓P(guān)性。而經(jīng)澤瀉湯加味方治療后，HYP大鼠血清中TC、TG、LDL-C含量顯著降低，HDL-C含量顯著升高，肝組織脂肪變性明顯改善，這提示澤瀉湯加味方良好地調(diào)節(jié)血脂作用；同時(shí)，大鼠肝組織中AQP8 mRNA及其蛋白的表達(dá)水平均顯著降低，推測(cè)該方可能通過下調(diào)大鼠肝組織中AQP8 mRNA及其蛋白的過度表達(dá)，降低了肝細(xì)胞過高的通透性，維持了細(xì)胞內(nèi)外水液代謝的平衡，保護(hù)了肝細(xì)胞的正常功能，從而使肝正常地發(fā)揮脂質(zhì)代謝的作用，這可能是澤瀉湯加味方防治HYP的機(jī)制之一，但其確切機(jī)制有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 申強(qiáng)，張海晶，楊明華，等.血脂平膠囊對(duì)高血脂模型金黃地鼠血脂水平的影響及機(jī)制研究[J].中國(guó)藥房，2017，28（16）：2212-2215.

[ 2 ] 孫吉葉，蔡旭東，康秀娟，等.治療高脂血癥的新藥研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2012，27（5）：435-441.

[ 3 ] 趙潤(rùn)生，玉敏，張永志，等.澤瀉湯加味治療痰濁阻遏型高脂血癥55例臨床觀察[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，32（4）：42-44.

[ 4 ] 韓雪，張睦清，常冰，等.澤瀉湯對(duì)高脂血癥大鼠脂代謝及PPARα和ACO基因和蛋白表達(dá)的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2017，33（12）：1761-1765.

[ 5 ] DENKER BM，SMITH BL，KUHAJDA FP，et al. Identification，purification，and partial characterization of a novel Mr 28，000 integral membrane protein from erythrocytes and renal tubules[J]. J Biol Chem，1988，263（30） ：15634- 15642.

[ 6 ] 張寧，劉樹民，于棟華，等.水通道蛋白與中醫(yī)學(xué)水液代謝的相關(guān)性探索[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2017，28（5）：1170-1172.

[ 7 ] 張霖，王錦權(quán).水通道蛋白在急性肝損傷中的作用的研究進(jìn)展[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2012，96（12）：1148-1150.

[ 8 ] 高天曙，趙玉瑤，魏征.積雪草苷對(duì)高脂飼料誘導(dǎo)的肥胖小鼠降脂作用研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2016，31（1）：279-282.

[ 9 ] 彭圓，田黎明，張翀，等.便秘對(duì)小鼠皮膚、肺組織水通道蛋白表達(dá)的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2013，24（2）：293-295.

[10] 張強(qiáng)，趙相軒，孫巍，等.水通道蛋白在肝纖維化及肝硬化進(jìn)程中的作用[J].臨床肝膽病雜志，2016，32（6）：1192- 1195.

[11] CARRERAS FI，GRADILONE SA，MAZZONE A，et al.Rat hepatocyte aquaporin-8 water channels are down regulated in extrahepatic cholestasis[J]. Hepatology，2003，37（5）：1026-1033.

（收稿日期：2017-05-22 修回日期：2017-12-11）

（編輯：林 靜）