黃芪不同溶劑提取物抑制前列腺增生的研究

羅孟雄，林桂濤

(山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250014)

黃芪(Astragali Radix)為豆科植物蒙古黃芪(Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao)或膜莢黃芪(Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.)的干燥根,具有補(bǔ)氣固表、利水消腫等功能。前列腺增生癥(BPH)是老年男子常見疾病之一，而且隨著我國人口老齡化的加劇，前列腺增生癥發(fā)病率越來越高。黃芪因具有補(bǔ)氣、利水的功能，在中醫(yī)治療前列腺增生癥的臨床中常被應(yīng)用[1]。目前，已有文獻(xiàn)報(bào)道黃芪對前列腺增生癥具有緩解作用[2-4]，但對黃芪治療前列腺增生的成分及機(jī)理研究的較少。本研究通過比較黃芪不同溶劑提取物對前列腺增生模型大鼠前列腺增生的作用，為推測黃芪抑制前列腺增生活性成分提供依據(jù)，為制定黃芪用于治療前列腺增生癥的提取工藝奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

萬分之一電子分析天平(上海精科天美科學(xué)儀器有限責(zé)任公司)；十萬分之一電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；LC-20A型高效液相色譜儀(日本島津公司)；TU-1901型紫外-可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器公司)；ZW-SX型數(shù)顯恒溫平滑肌槽(淮北正華生物儀器有限責(zé)任公司)；RM6240B型多道生理信號采集處理軟件系統(tǒng)(成都儀器廠); 680型酶標(biāo)儀(美國BIO-RAD公司)。

SD大鼠雄性，4周齡，由山東魯抗有限責(zé)任公司所培育提供，許可證號為SCXK(魯)20140003。

黃芪購自濟(jì)南市建聯(lián)中藥有限公司，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)周鳳琴教授鑒定為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.) Bge．var．mongholicus(Bge.) Hsiao的干燥根，經(jīng)檢測符合《中國藥典》2015年版的要求[5]；丙酸睪酮注射液(規(guī)格：25 mg/mL，寧波第二激素生產(chǎn)廠，批號為150108)；NaCl(天津市巴斯夫化工有限公司)；KCl(天津市化學(xué)試劑一廠)；NaHCO3(天津市巴斯夫化工有限公司)；KH2PO4(天津市巴斯夫化工有限公司)；MgSO4(天津市化學(xué)試劑六廠)；葡萄糖(天津博迪化工生產(chǎn)提供)；無水CaCl2(天津市化學(xué)試劑一廠)。睪酮酶聯(lián)免疫分析試劑盒、二氫睪酮酶聯(lián)免疫分析試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 黃芪不同溶劑提取物的制備

稱取黃芪粗粉(過3號篩)100 g共4份，分別加入水、50%乙醇、75%乙醇、95%乙醇(均為體積分?jǐn)?shù))加熱回流提取2次，每次加溶劑1 000 mL，每次2 h，濾過，合并提取液，濃縮至無醇味，加水定容至100 mL搖勻，即得4種黃芪不同溶劑的提取液[6-8]。

2.2 黃芪不同溶劑提取物對前列腺增生抑制作用的測定

2.2.1 灌胃液的制備

量取黃芪提取液85 mL，濃縮至50 mL作為灌胃藥液備用。

2.2.2 分組及給藥

取SD雄性大鼠60只，隨機(jī)分為6組(正常對照組、模型組，水提取物組，50%乙醇提取物組，75%乙醇提取物組，95%乙醇提取物組)，每組10只。適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，采用7%水合氯醛溶液(每100 g溶液含氯醛0.5 mL)腹腔注射，麻醉大鼠，進(jìn)行兩側(cè)睪丸無菌切除，切除手術(shù)結(jié)束后自然恢復(fù)1周后，除正常對照組外，其他各組大鼠皮下注射丙酸睪酮5 mg/(kg·d)[9-10]，同時(shí)灌胃給藥不同溶劑黃芪提取物10 g/(kg·d)灌胃液，正常對照組灌胃給予等體積水，連續(xù)給藥28 d,并定時(shí)稱量各組的大鼠的體重。

2.2.3 大鼠血清睪酮和二氫睪酮濃度的測定

大鼠于最后1次給藥后禁食 12 h。 每組大鼠分別稱其體重后，眼靜脈叢取血，分離血清，采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行睪酮(testosterone，T)和二氫睪酮(dihydrotestosterone，DHT)的測定[11-12]。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠(每組10只)血清睪酮和二氫睪酮指標(biāo)比較Table 1 Comparison of testosterone and dihydrotestosterone indexes in the serum of each group (10 mice each)

注：與模型組相比，*P<0.05或**P<0.01；95%乙醇提取物組與其他提取物組比較▲▲P<0.01。

由表1可知，模型組血清睪酮和二氫睪酮的濃度均比正常對照組顯著高(P<0.01)，說明注射丙酸睪丸酮能夠升高血清睪酮與二氫睪酮的水平。用藥組血清睪酮水平顯著比模型組低(P<0.05)；除了水提取物組外，其他用藥組二氫睪酮水平比模型組顯著低(P<0.05)，其中95%乙醇提取物組與模型組比較有極顯著的差異(P<0.01)。綜合兩種參數(shù)水平，95%乙醇提取物具有更好的降低血清睪酮和二氫睪酮水平的作用。

2.2.4 前列腺系數(shù)的測定

大鼠脫頸處死，迅速解剖，取出前列腺稱重，計(jì)算前列腺系數(shù)[13]。結(jié)果見表2。

2.2.5 大鼠離體膀胱逼尿肌條收縮強(qiáng)度信號測定

表2 各組大鼠前列腺系數(shù)和大鼠離體膀胱逼尿肌條收縮強(qiáng)度的比較

注：與模型組比較，**表示P<0.01；95%乙醇組與其他提取物組比較▲表示P<0.05，▲▲表示P<0.01。

由表2可知，模型組與正常對照組比較，前列腺系數(shù)顯著增加(P<0.01)，說明造模成功。各給藥組與模型組比較，前列腺系數(shù)顯著減小(P<0.01),說明各溶劑提取物均具有抑制前列腺增生的作用；另外，95%乙醇提取物組前列腺系數(shù)與其他提取物組比較有顯著的差異(P<0.05)。

大鼠注射丙酸睪酮后能顯著減小膀胱逼尿肌的收縮強(qiáng)度(P<0.01)，各給藥組與模型組比較，逼尿肌收縮強(qiáng)度顯著增加(P<0.01)，說明黃芪提取物具有增加前列腺增生模型大鼠的排尿力度；各給藥組比較，95%乙醇提取物組膀胱逼尿肌收縮強(qiáng)度與其他提取物組比較有極顯著的差異(P<0.01)。

另外，在比較了黃芪不同溶劑提取物抑制前列腺增生作用的基礎(chǔ)上，又測定了各提取液中相關(guān)成分的含量，結(jié)果見表3。

表3 黃芪不同溶劑提取物中相關(guān)成分含量(mg/g)Table 3 Content of correlative component in different solvent extracts from Astragali Radix (converting into the content of raw pieces)(mg/g)

由表3可以看出，黃芪不同溶劑提取物抑制前列腺增生的效果與提取物中的黃芪甲苷、總皂苷、毛蕊異黃酮苷、總黃酮的含量不呈相關(guān)性，而與毛蕊異黃酮有較好的的相關(guān)性。

3 結(jié)論與討論

(1)治療前列腺增生藥物的藥效學(xué)研究的動(dòng)物模型通常有猩猩或猴BPH模型、尿生殖竇植入法小鼠或大鼠模型、老齡犬自發(fā)性BPH模型和雄激素誘導(dǎo)大鼠或小鼠BPH模型。相對于其他模型，雄性激素誘導(dǎo)大鼠或小鼠BPH模型具有方法簡便、可靠、周期短、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，特別適用于作為中藥篩選、制備工藝篩選的生物考察方法。

(2)黃芪已證明具有較好的利尿作用，已經(jīng)證明的機(jī)制為競爭性抑制Na+-K+-ATP酶活力有關(guān)，可以緩解前列腺增生患者尿道梗阻的癥狀，但其對膀胱逼尿肌條收縮強(qiáng)度是否有影響未見報(bào)道，如果證明其能增加膀胱逼尿肌收縮的收縮強(qiáng)度，則對前列腺增生癥造成的排尿困難癥狀更有說服力。

(3)目前治療前列腺增生癥的主要化學(xué)藥物為5ɑ-還原酶抑制劑，其能夠抑制睪酮向雄性激素作用更強(qiáng)的二氫睪酮轉(zhuǎn)化，減小血清中二氫睪酮的濃度，減輕增生前列腺的體積。

(4)黃芪4種不同溶劑提取物均具有較好的抑制前列腺增生的作用，均能夠抑制前列腺的增生，其中95%乙醇提取物作用更加明顯，前列腺系數(shù)更小，與其他提取物組比較有顯著差異；黃芪提取物還能增加前列腺增生模型大鼠膀胱逼尿肌收縮的收縮強(qiáng)度，所以能夠減輕前列腺增生癥排尿無力、排尿困難的癥狀，其中仍然以95%乙醇提取物效果更好，與其他提取物組有顯著的差異。

(5)黃芪4種提取物均能降低前列腺增生模型大鼠血清中的睪酮和二氫睪酮濃度，這可能是其抑制前列腺增生的機(jī)理，其中仍然以95%乙醇提取物作用更加明顯。

(6)黃芪4種提取物的作用效果與提取物中總皂苷、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮苷的含量無相關(guān)性，而與毛蕊異黃酮的含量呈較好的相關(guān)性，這可能是苷元能夠被吸收，而相應(yīng)的苷不能被吸收造成的。

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