七項(xiàng)自身抗體在肺癌診斷中的應(yīng)用

徐思璞，喬金平，費(fèi)廣鶴

肺癌是世界上最常見(jiàn)的癌癥之一，近年來(lái)患病率持續(xù)升高[1]。肺癌的診斷，從依據(jù)細(xì)胞學(xué)和組織病理檢查到檢測(cè)血清中的單個(gè)腫瘤標(biāo)志物，再到腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測(cè)，敏感性和特異性得到提高[2]。對(duì)于肺癌的早期診斷，自身抗體的敏感性和特異性已引起重視。血清中抑癌基因p53(tumor protien 53,p53)和抗p53抗體與癌癥風(fēng)險(xiǎn)的增加密切相關(guān)，并且可以作為惡性腫瘤早期診斷的血清學(xué)標(biāo)志物[3]，通過(guò)使用ELISA法檢測(cè)血清p53(S-p53)基因的改變，證實(shí)S-p53基因可作為無(wú)癥狀、高風(fēng)險(xiǎn)群體的常規(guī)篩查標(biāo)志物[4-5]。肺癌中蛋白基因產(chǎn)物9.5(protein gene product 9.5,PGP9.5)的表達(dá)可能在人類(lèi)肺上皮細(xì)胞的致癌轉(zhuǎn)化中起到一個(gè)因果作用[6]。SOX2(SRY-box containing gere 2)的表達(dá)與小細(xì)胞肺癌的分期和增殖密切相關(guān)，支持了SOX2是真正的小細(xì)胞肺癌驅(qū)動(dòng)基因的設(shè)想[7]。G抗原7(G antigen 7,GAGE7)在多種癌癥中廣泛表達(dá)，表明其在腫瘤發(fā)生中起作用，高水平的GAGE7表達(dá)在鱗狀細(xì)胞癌中更常見(jiàn)[8-9]。腫瘤抗原(GBU4-5)具有的免疫原性、癌癥特異性的，可能為癌癥的診斷和治療提供潛在的靶標(biāo)[10]。黑色素瘤抗原(melanoma antigen, MAGE)在黑素瘤、胃癌、結(jié)腸癌、肝細(xì)胞癌和非小細(xì)胞肺癌中都發(fā)現(xiàn)了MAGE-A1和-A3的表達(dá)；由MAGE啟動(dòng)子去甲基化介導(dǎo)的MAGE表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的侵襲性進(jìn)展密切相關(guān)[11]。人癌抗原(cancer antigen,CAGE)能在胃癌、胰腺癌和一部分肺癌中誘導(dǎo)自身抗體的應(yīng)答[10]。該文通過(guò)使用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve, ROC)分析評(píng)價(jià)p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1、CAGE等七項(xiàng)自身抗體單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺癌的診斷的敏感性和特異性，并對(duì)受試者進(jìn)行了不同的組合分類(lèi)，探討這些自身抗體對(duì)肺癌輔助診斷的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1病例資料收集2017年1～4月期間就診于安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病例122例，男59例，女63例，年齡32～85(62.8±10.6)歲。將受試者分為肺外腫瘤組、肺部良性病變組、小細(xì)胞肺癌組、非小細(xì)胞肺癌組、體檢組。其中肺外腫瘤65例，男29例，女36例，年齡55～79(66.0±7.3)歲。肺部良性病變20例，男11例，女9例，年齡32～81(58.0±13.0)歲；小細(xì)胞肺癌3例，男1例，女2例，年齡58～78(67.0±10.1)歲；體檢20例，男10例，女10例，年齡40～75(53.5±9.9)歲；非小細(xì)胞肺癌14例，男8例，女6例，年齡48～85(67.4±11.7)歲。

1.2標(biāo)本采集與檢測(cè)采集患者空腹晨血3 ml，離心后使用ELISA試劑盒(杭州凱保羅生物科技有限公司)，參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。七項(xiàng)自身抗體陽(yáng)性參考值分別為：p53>13.1 U/ml, PGP9.5>11.1 U/ml，SOX2>10.3 U/ml, GAGE7>14.4 U/ml, GBU4-5>7 U/ml, MAGEA1>11.9 U/ml, CAGE>7.3 U/ml。

2 結(jié)果

2.1不同類(lèi)型的受試者者血清七項(xiàng)自身抗體水平測(cè)定良性病變組和體檢組的自身抗體濃度均較低，各癌變組的自身抗體濃度有不同程度的增高，經(jīng)兩兩比較可得，小細(xì)胞癌組的p53、SOX2、GBU4-5、MAGEA1自身抗體：與體檢組、肺外腫瘤、肺部良性病變組相比較，差異均有顯著性(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2肺癌組和其他組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線p53的AUC>0.5，且P<0.05，提示p53自身抗體對(duì)肺癌組(非小細(xì)胞肺癌組、小細(xì)胞肺癌組)和其他組(體檢組、肺外腫瘤組、肺部良性病變組)差異有顯著性(AUC>0.5，P<0.05)。見(jiàn)圖1。

2.3肺部病變組和其他組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線單個(gè)自身抗體的AUC<0.5,七項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的AUC稍大于0.5，診斷價(jià)值較低，即表示本組分類(lèi)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)圖2。

2.4非惡性腫瘤組和腫瘤組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線GBU4-5的AUC=0.639，七項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的AUC=0.635，介于0.5～0.7之間，有一定的診斷價(jià)值，故 GBU4-5及七項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)本組分類(lèi)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)， 見(jiàn)圖3。

圖1 肺癌組和其他組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線

圖2 肺部病變組和其他組的ROC曲線

組別p53PGP9.5SOX2GAGE7GBU4-5MAGEA1CAGE體檢1.2±0.7?4.3±1.92.9±2.8?3.7±3.21.3±1.5?0.9±1.0?0.9±0.4肺外腫瘤2.9±6.3?12.3±32.910.3±22.0?4.0±6.84.2±8.0?0.7±1.5?1.6±3.3肺部良性病變0.9±1.0?4.1±5.62.5±3.6?3.7±5.50.7±1.1?0.7±1.1?1.0±1.8非小細(xì)胞肺癌2.8±3.5?10.9±30.4?8.0±19.1?3.0±3.85.5±9.7?0.5±0.6?2.3±4.5小細(xì)胞肺癌20.3±22.337.0±52.133.2±37.28.3±10.620.9±17.89.4±14.23.5±2.4F值8.21.32.50.56.010.90.9

與小細(xì)胞肺癌組比較：*P<0.05

2.5小細(xì)胞肺癌組和其他組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線MAGEA1、CAGE、PGP9.5、SOX2、七項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的AUC均>0.5，故均有診斷價(jià)值(AUC>0.5，P<0.05)，其診斷價(jià)值排序?yàn)镸AGEA1> CAGE>PGP9.5=SOX2>七項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)，見(jiàn)圖4。

圖3 非惡性腫瘤組和腫瘤組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線

圖4 小細(xì)胞肺癌組和其他組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線

2.6非小細(xì)胞肺癌組和其他組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線僅p53和七項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的AUC>0.5，但P>0.05，小細(xì)胞肺癌組和其他組(體檢組、肺外腫瘤、肺部良性病變、非小細(xì)胞肺癌組)的七項(xiàng)自身抗體差異無(wú)顯著性，見(jiàn)圖5。

2.7肺外腫瘤組和其他組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線僅七項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的AUC>0.5，且P<0.05，肺外腫瘤組和其他組(體檢、肺部良性病變、非小細(xì)胞肺癌組、小細(xì)胞肺癌)單獨(dú)檢測(cè)七項(xiàng)自身抗體無(wú)顯著差異，七項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)差異有顯著性(AUC>0.5,P<0.05)。見(jiàn)圖6。

圖5 非小細(xì)胞肺癌組和其他組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線

圖6 肺外腫瘤組和其他組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線

2.8體檢組和其他組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線僅MAGEA1的AUC=0.333，且P<0.05，體檢組和其他組(肺外腫瘤、肺部良性病變、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌)MAGEA1自身抗體差異有顯著性(P<0.05)，見(jiàn)圖7。

2.9肺部良性病變和其他組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線僅p53、PGP9.5、GBU4-5、CAGE、七項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)值的AUC與0.5相差較大，且P<0.05，其診斷價(jià)值排序?yàn)镚BU4-5>七項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)值> p53>CAGE >PGP9.5，故p53、PGP9.5、GBU4-5、CAGE自身抗體及七項(xiàng)聯(lián)合指標(biāo)可鑒別診斷肺部良性病變和其他組(體檢、肺外腫瘤組、非小細(xì)胞肺癌組、小細(xì)胞肺癌)，依據(jù)其AUC大小，以GBU4-5的診斷價(jià)值最高，見(jiàn)圖8。

圖7 體檢組和其他組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線

圖8 肺部良性病變和其他組七項(xiàng)自身抗體的ROC曲線

3 討論

與檢測(cè)某一種自身抗體相比，檢測(cè)一組自身抗體對(duì)疾病的診斷具有更高水平的靈敏度，6個(gè)腫瘤相關(guān)性抗原即p53，NY-ESO-1，CAGE，GBU4-5，Annexin 1和SOX2組成的血清自身抗體測(cè)試組證實(shí)了檢測(cè)一組自身抗體的價(jià)值[12]。但是由于歐洲和亞洲肺癌患者的基因構(gòu)成存在顯著差異，因此這一組自身抗體聯(lián)合檢測(cè)可能不適合中國(guó)人群，近期有研究驗(yàn)證了另外七項(xiàng)自身抗體即p53、GAGE7、PGP9.5、CAGE、MAGEA1、SOX2 和GBU4-5的聯(lián)合檢測(cè)與低劑量CT掃描相結(jié)合對(duì)于表現(xiàn)為磨玻璃樣結(jié)節(jié)或?qū)嵭越Y(jié)節(jié)患者的診斷準(zhǔn)確率更高[13]。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析122例受試者的血清七項(xiàng)自身抗體的水平，探討其對(duì)肺癌的輔助診斷的應(yīng)用價(jià)值。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：相對(duì)于其他四組，p53、SOX2、GBU4-5和MAGEA1在小細(xì)胞癌組中的表達(dá)水平顯著增高。但由于該組別病例數(shù)相對(duì)較少，可能會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，后續(xù)研究將加大樣本量。

ROC曲線是生物標(biāo)志物對(duì)疾病的診斷價(jià)值的一種非常有效的評(píng)價(jià)方法。曲線下面積AUC可反映診斷試驗(yàn)的價(jià)值的大小。依據(jù)Swets標(biāo)準(zhǔn)[14]，AUC常常取值范圍在0.5～1，為0.5時(shí)完全無(wú)診斷價(jià)值；為1時(shí)是完全理想的診斷；通常認(rèn)為，在0.5～0.7時(shí)有較低的準(zhǔn)確性；在0.7～0.9時(shí)有較高的準(zhǔn)確性；在0.9以上時(shí)準(zhǔn)確性很高。但由于可以對(duì)數(shù)據(jù)按照公式換算后重新繪制ROC曲線旋轉(zhuǎn)180度，從而使AUC大于0.5，所以在ROC分析診斷價(jià)值時(shí)主要是曲線離分隔線越遠(yuǎn)好。本實(shí)驗(yàn)中，體檢組和其他組的ROC曲線以及肺部良性病變和其他組的ROC曲線中有幾個(gè)指標(biāo)均小于0.5,并且P<0.05，實(shí)際的意義是，這些自身抗體在這些組別里越低越具有診斷價(jià)值，如果對(duì)這些指標(biāo)的檢測(cè)值進(jìn)行倒數(shù)后再進(jìn)行ROC分析，即可得到數(shù)值大于0.5的AUC值。

為了更精細(xì)化地評(píng)價(jià)這些自身抗體對(duì)肺癌的診斷價(jià)值，本實(shí)驗(yàn)對(duì)受試者進(jìn)行不同的分類(lèi)，結(jié)果顯示：p53(AUC=0.664，P<0.05)對(duì)肺癌組和其他組的鑒別診斷有意義。MAGEA1、CAGE、PGP9.5、SOX2、七項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的對(duì)小細(xì)胞肺癌組和其他組的鑒別診斷具有較高的診斷價(jià)值(均AUC>0.8，P<0.05)。由不同的分組模式所得到的數(shù)據(jù)可見(jiàn)這七項(xiàng)自身抗體對(duì)不同的肺癌類(lèi)型的診斷也是有區(qū)別的。

綜上所述，依據(jù)分組的不同，本實(shí)驗(yàn)中的七項(xiàng)自身抗體及其聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺癌的鑒別診斷均具有一定的價(jià)值。

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