腫瘤異常糖蛋白在肺癌中的診斷價值

陳秋莉，王蓮子，吳 憲，劉嘉清，李 濤，徐元宏，周 敏，徐勝前

目前，常用的肺癌血清腫瘤標志物有癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)、可溶性細胞角蛋白19片段(cytokeratin frament19，CYFRA 211)、神經(jīng)元特異性烯醇酶(neuron specific enolase，NSE)、糖類抗原125(cancer antigen 125，CA125)及鱗狀細胞癌相關(guān)抗原(squamous cell carcinoma antigen，SCC)[1-2]。由于血清腫瘤標志物的敏感性低，不能作為肺癌早期診斷的有效工具。計算機斷層掃描(computed tomography，CT)作為肺癌早期篩選的工具[3]，使用低劑量CT早期篩查可有效降低肺癌患者的死亡率，CT檢查的敏感性高，但是對早期肺癌診斷的特異性低，易把肺良性腫塊誤診為肺癌，所以尋找一種對早期肺癌診斷有效的檢測指標顯得尤為重要。該文通過分析腫瘤異常糖蛋白(tumor abnormal protein，TAP)、CEA、NSE、CYFRA 211單獨及聯(lián)合檢測對肺癌診斷的敏感度和特異度，探討TAP檢測在肺癌診斷中的應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1病例資料選取安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2016年7月～2017年7月就診患者共612例，其中包括未經(jīng)治療新診斷肺癌患者400例，肺部良性疾病患者212例。肺癌的確診依據(jù)是肺組織病理學(xué)檢出腫瘤細胞，腫瘤的組織學(xué)分型及病理學(xué)分期是根據(jù)WHO 2004 分級法[4]和UICC的TNM分類指南[5]?；颊呔唧w病例特征見表1。

表1 患者病例特征

1.2檢測方法及儀器

1.2.1TAP檢測 TAP檢測試劑盒及TAP專用檢測儀器由中國浙江瑞生醫(yī)藥技術(shù)有限公司生產(chǎn)。取患者外周抗凝全血25 μl，制成均勻的血涂片，室溫干燥10 min，加入適量凝集試劑，1.5～2 h后形成凝集微粒，在腫瘤異常蛋白檢測系統(tǒng)圖像分析儀或生物顯微鏡、集成閱片儀下觀察，有不規(guī)則類圓形類晶體顆粒，顆粒呈淡綠色，淡黃色或棕色，中心有屈光性，四周混合物較多而呈棕黑色或墨綠色，為陽性，無上述顆粒檢出為陰性。凝集顆粒的面積計算方式為用鼠標在顆粒的四周圈出顆粒的大小，系統(tǒng)會自動算出凝集物顆粒面積。TAP凝集物面積參考值范圍如下：面積<121 μm2為TAP正常/無明顯凝集物，121 μm2≤凝集物面積<225 μm2為異常/凝集物較小，凝集物面積≥225 μm2為異常/凝集物較大。

1.2.2血清CEA、NSE、CYFRA211檢測 取受試者清晨空腹靜脈血4 ml，離心后提取血清。檢測CEA，NSE，CYFRA 211的儀器購買自羅氏診斷產(chǎn)品(上海) 有限公司，儀器名稱為cobase 601，采用電化學(xué)發(fā)光法檢測，試劑來自羅氏相關(guān)配套試劑盒。檢測步驟均嚴格參照試劑盒說明書進行。結(jié)果判定： CEA>5.0 ng/ml，NSE>17.0 ng/ml，CYFRA211>3.5 ng/ml為結(jié)果升高。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 22.0軟件進行分析。計數(shù)資料及等級資料的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1TAP對肺癌檢測的敏感度通過分析612例肺癌患者的TAP檢測結(jié)果，顯示TAP檢測對肺癌患者高度敏感，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)，檢測的敏感度和特異度分別是83.25%、34.91%(使用121 μm2的cut-off值，表2和圖1)。同時結(jié)果顯示TAP檢測對肺癌診斷的敏感度比血清CEA、NSE、CYFRA211對肺癌診斷的敏感度高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=49.552，P<0.001)，見圖1。

表2 TAP結(jié)果與肺癌關(guān)系

2.2TAP檢測結(jié)果與肺癌分期及組織學(xué)分型的相關(guān)性TAP檢測結(jié)果與肺癌的分期無關(guān)(χ2=3.378，P=0.60)；TAP檢測與肺癌的組織學(xué)分型有關(guān)(χ2=8.139，P=0.043)。見表3、4。

表3 TAP檢測與肺癌分期

1為TAP結(jié)果陰性；2為TAP結(jié)果凝集物較小；3為TAP結(jié)果凝集物較大

圖1 TAP、CEA、NSE、CYFRA211檢測對肺癌診斷的敏感度、特異度及陽性預(yù)測值

組織學(xué)分型總數(shù)TAP檢查結(jié)果陽性陰性χ2值P值腺癌11185268.1390.043鱗癌67616小細胞癌33303大細胞肺癌110總數(shù)21217735

2.3TAP、CEA、NSE、CYFRA211單獨及聯(lián)合檢測對肺癌的診斷效價比較ROC(receiver operating characteristic)曲線分析顯示，CEA、NSE、CYFRA211 3項指標聯(lián)合檢測的曲線下面積(area under the curve，AUC)及95%可信區(qū)間(95% confidence interval，95%CI)分別是0.804(0.763～0.846)，TAP單獨檢測AUC是0.668(0.611～0.725)，CEA、NSE、CYFRA211及TAP 4項聯(lián)合檢測ROC曲線的AUC是0.822(0.782～0.862)。因此，結(jié)果顯示4項指標聯(lián)合檢測對肺癌的診斷效價優(yōu)于CEA、NSE、CYFRA211 3項聯(lián)合檢測(圖2)。

圖2 CEA、NSE、CYFRA211、TAP 3項及4項聯(lián)合檢測對肺癌診斷的ROC曲線對比

2.4TAP、CT聯(lián)合檢測當在CT檢測陽性(CT報告結(jié)果提示肺癌可能為結(jié)果陽性)的患者中進行了TAP檢測時(n=198)，在這些患者中，確診肺癌的患者是168例，其余30例是非肺癌患者，其檢測的特異度是40.0%，敏感度是79.17%，TAP檢測可以提高CT檢查對肺癌診斷的敏感度，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=46.967，P<0.001)。因此，TAP和CT聯(lián)合檢測可以提高早期肺癌的診斷效率。見圖3。

圖3 TAP、CT對肺癌診斷的敏感度、特異度及陽性預(yù)測值測值

3 討論

TAP是癌細胞突變后產(chǎn)生的異常糖蛋白、鈣組蛋白及其他一些正常物質(zhì)的復(fù)合物，當腫瘤細胞發(fā)生一定程度的突變時，大量的突變物質(zhì)釋放到血液中，可以在外周血中檢測得到[6]。TAP檢測是一種特殊的識別技術(shù)，在促凝劑的幫助下，促進腫瘤異常蛋白的凝集，從而形成特殊的晶狀結(jié)晶顆粒，而沒有TAP物質(zhì)存在的血液就不能形成凝集顆粒。TAP檢測是多階段的耦合凝集反應(yīng)，首先，各種促凝劑先使各種異常糖鏈糖蛋白形成初級凝集顆粒，然后初級凝集顆粒通過鈣組蛋白形成二級凝集顆粒，這就是在TAP檢測中觀察到的顆粒狀凝集物。

本研究顯示，在肺癌患者中，TAP檢測陽性率高于良性肺部疾病組，其對肺癌診斷的敏感度是84.25%，特異度是34.91%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。TAP與肺癌分期無關(guān)，與肺癌的組織學(xué)分型有關(guān)，這與Liu et al[7]報道不一致，該文獻研究表明，TAP檢測結(jié)果與腫瘤患者的年齡、性別、腫瘤大小及腫瘤組織學(xué)分型無關(guān)。原因可能是在本研究中肺癌的組織學(xué)分型的樣本例數(shù)過少，如大細胞肺癌的樣本只有一例，所以增大樣本量以提高研究的準確性。結(jié)合血清腫瘤標志物CEA、NSE、CYFRA 211分析，結(jié)果顯示4項指標聯(lián)合檢測的AUC是0.82(P<0.01)，顯著高于個指標單獨檢測的診斷效能，所以臨床上應(yīng)該建立有效的多指標、多參數(shù)聯(lián)合檢測模型以提高對肺癌診斷的準確性。此項研究也表明TAP聯(lián)合CT檢查可以提高對肺癌診斷的陽性預(yù)測值，由于TAP測試只需要一滴血，而且它非常方便，所以當患者在CT檢查后，可以選擇進行TAP測試，以便更方便有效地診斷肺癌。

[1] Seemann M D, Beinert T, Furst H, et al. An evaluation of the tumour markers, carcinoembryonic antigen (CEA), cytokeratin marker (CYFRA211) and neuron-specific enolase (NSE) in the differentiation of malignant from benign solitary pulmonary lesions[J].Lung Cancer,1999,26(3):149-55.

[2] Edelman M J, Hodgson L, Rosenblatt P Y, et al. CYFRA211 as a prognostic and predictive marker in advanced nonsmall-cell lung cancer in a prospective trial: CALGB 150304[J]. J Thorac Oncol,2012,7(4):649-54.

[3] Isgrò M A,Bottoni P,Scatena R,et al. Neuron-specific enolase as a biomarker: biochemical and clinical aspects[J].Adv Exp Med Biol,2015,867:125-43.

[4] Travis W D, Brambilla E, Mueller-Hermelink H K,et al.Introduction to The 2015 World Health Organization Classification of Tumors of the Lung,Pleura,Thymus, and Heart[J].J Thorac Oncol,2015,10(9):1240-4.

[5] Sobin L H, Gospodarowicz M K, Wittekind C.et al.TNM classification of malignant tumours[M].7th. Chichester: John Wiley & Sons , 2009:136-47.

[6] Thakkar V, Patel P, Prajapati N,et al.Serum levels of glycoproteins are elevated in patients with ovarian cancer[J].Indian J ClinBiochem,2014,29(4):345-50.

[7] Liu Z,Cai J,Yu Y,et al. Tumor abnormal protein as a novel biomarker in papillary thyroid carcinoma[J].Clin Lab,2017,63(3):479-85.