布拉酵母菌散對輪狀病毒腸炎患兒血清和糞便IL-6、TNF-α及IFN-γ的影響

朱志萍，王朝陽，陳建群，萬曉龍

嬰幼兒腹瀉是兒童發(fā)病率僅次于呼吸道感染的常見消化道疾病。該病廣泛分布于世界不同的國家和地區(qū)，發(fā)病率不一[1-2]。我國嬰幼兒腹瀉的發(fā)病以秋冬季為主，因此被稱為嬰幼兒秋季腹瀉[3-4]。經(jīng)病原學(xué)研究證實，40%～50%的嬰幼兒腹瀉是由輪狀病毒腸炎引起的，患兒易出現(xiàn)發(fā)熱、呼吸急促等癥狀，嚴(yán)重者會發(fā)生水、電解質(zhì)紊亂和酸堿失衡等，甚至危及生命安全[5]。目前關(guān)于嬰幼兒輪狀病毒腸炎的發(fā)病機理及免疫機制尚未明確，有大量研究發(fā)現(xiàn)，輪狀病毒感染腸上皮細(xì)胞可以表達和分泌大量白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和干擾素-γ(IFN-γ)[6-7]。鑒于IL-6、TNF-α和IFN-γ在輪狀病毒腸炎發(fā)病過程中的關(guān)鍵作用，本研究采用布拉酵母菌散對輪狀病毒腸炎患兒進行治療，并分析其對患兒血清和糞便IL-6、TNF-α和IFN-γ的影響，具體報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年6月—2017年4月于我院接受治療的118例輪狀病毒腸炎患兒作為觀察對象。①納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合《兒童腹瀉病診斷治療原則的專家共識》中有關(guān)輪狀病毒腸炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，且具有典型的臨床癥狀及體征，大便糞輪狀病毒抗原經(jīng)膠體金法檢測為陽性；患兒家屬均了解研究內(nèi)容和目的，明確治療風(fēng)險，愿意簽署知情同意書。②排除標(biāo)準(zhǔn)：消化道畸形、重度脫水或電解質(zhì)紊亂、慢性腹瀉以及霍亂和菌痢等法定傳染性腹瀉；合并心腦血管、肝、腎、肺及造血系統(tǒng)原發(fā)疾病、原發(fā)免疫缺陷疾?。缓喜⒕?、神經(jīng)疾病；不能完成結(jié)果評估者。將所選患兒根據(jù)治療方式不同分為研究組和對照組，每組59例。研究組男31例，女28例；年齡5.1～23.4(13.3±3.1)個月；病程(2.2±0.4)d；體質(zhì)量8.41～14.23(9.43±1.48)kg；脫水程度：輕度脫水39例，中度脫水20例。對照組男32例，女27例；年齡5.3～24.1(13.8±2.9)個月；病程(2.3±0.3)d；體質(zhì)量8.36～14.33(9.38±1.52)kg；脫水程度：輕度脫水38例，中度脫水21例。兩組性別、年齡、病程、體質(zhì)量和脫水程度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2治療方法 兩組均給予飲食指導(dǎo)、抗病毒、口服或靜脈補液、預(yù)防及糾正電解質(zhì)紊亂、維持酸堿平衡等常規(guī)治療。研究組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上給予布拉酵母菌散劑(Laboratoires BIOCODEX，注冊證號：S20100086)溫水沖服，對于年齡<12個月的患兒，每次0.125 g，1/d；對于年齡≥12個月的患兒，每次0.25 g，2/d。兩組均治療3 d。

1.3實驗室檢查

1.3.1標(biāo)本采集：所選患兒均于入院當(dāng)天清晨采集糞便1 g與空腹靜脈血4 ml，分別裝于無菌采集管和3.8%枸櫞酸抗凝管中，糞便用pH=7.4的PBS緩沖液1 ml稀釋。血液與糞便標(biāo)本均以4000 r/min離心15 min，取上清液，置于-30℃冰箱中冷凍保存，待測。

1.3.2標(biāo)本檢測：血清和糞便IL-6、TNF-α和IFN-γ水平均采用美國貝克曼庫爾特有限公司生產(chǎn)的UniCel DxI 800全自動免疫發(fā)光分析儀通過雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法進行測定，試劑盒由武漢博士德公司提供，具體操作方法嚴(yán)格按照說明書進行。

1.4觀察指標(biāo) ①根據(jù)臨床療效評估標(biāo)準(zhǔn)評價療效[9]，顯效：患兒大便次數(shù)、頻率恢復(fù)正常，外觀成形或軟便，臨床癥狀及體征完全消失，大便常規(guī)檢查結(jié)果無明顯異常；有效：患兒大便次數(shù)、頻率、外觀較治療前均明顯好轉(zhuǎn)，臨床癥狀及體征基本消失，大便常規(guī)檢查結(jié)果較治療前有明顯改善；無效：患兒大便次數(shù)、頻率、外觀均較治療前無明顯好轉(zhuǎn)，臨床癥狀及體征無改善甚至加重，大便常規(guī)檢查結(jié)果較治療前無明顯變化?？傆行?(顯效+有效)/總例數(shù)×100%。②比較兩組治療前后血清和糞便的IL-6、TNF-α和IFN-γ水平。③觀察記錄兩組治療后的不良反應(yīng)發(fā)生情況，并進行對比。

2 結(jié)果

2.1臨床療效比較 研究組臨床總有效率明顯高于對照組(χ2=8.316，P=0.004)。見表1。

表1 兩組輪狀病毒腸炎患兒的臨床療效比較[例(%)]

注：對照組給予常規(guī)治療，研究組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上給予布拉酵母菌散劑；與對照組比較，aP<0.05

2.2血清和糞便的IL-6、TNF-α及IFN-γ水平比較 治療前，兩組血清和糞便的IL-6、TNF-α及IFN-γ水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療后，兩組血清和糞便的IL-6、TNF-α水平均明顯低于治療前，IFN-γ水平明顯高于治療前(P<0.05)；且研究組血清和糞便的IL-6、TNF-α水平明顯低于對照組，IFN-γ水平明顯高于對照組(P<0.05)。見表2和3。

表2 兩組輪狀病毒腸炎患兒治療前后血清IL-6、TNF-α和IFN-γ水平比較

注：對照組給予常規(guī)治療，研究組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上給予布拉酵母菌散劑；IL-6為白介素-6，TNF-α為腫瘤壞死因子-α，IFN-γ為干擾素-γ；與治療前比較，aP<0.05；與對照組比較，cP<0.05

表3 兩組輪狀病毒腸炎患兒治療前后糞便IL-6、TNF-α和IFN-γ水平比較

注：對照組給予常規(guī)治療，研究組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上給予布拉酵母菌散劑；IL-6為白介素-6，TNF-α為腫瘤壞死因子-α，IFN-γ為干擾素-γ；與治療前比較，aP<0.05；與對照組比較，cP<0.05

2.3不良反應(yīng)發(fā)生情況 經(jīng)治療后，研究組發(fā)生惡心3例、腹部不適2例、口干2例、皮疹1例，不良反應(yīng)總發(fā)生率為13.56%；對照組發(fā)生口干2例、腹部不適2例、皮疹1例，不良反應(yīng)總發(fā)生率為8.47%。兩組不良反應(yīng)總發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.778，P=0.378)。兩組的不良反應(yīng)均較輕微，經(jīng)對癥治療或隨用藥時間的延長，均得到緩解。

3 討論

輪狀病毒腸炎是指由輪狀病毒感染引起的急性消化道疾病，輪狀病毒是兒童秋冬季急性腹瀉的常見病原體，主要通過消化道進行傳播[10]。目前，嬰幼兒輪狀病毒腸炎的發(fā)病機理及免疫機制尚未明確，但隨著近年來醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和進步，發(fā)現(xiàn)輪狀病毒主要侵犯腸黏膜上皮細(xì)胞，而腸上皮集合淋巴結(jié)中大部分為T淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞所占比例不到10%[11]。同時有研究證實，IL-6、TNF-α和IFN-γ參與了輪狀病毒腸炎的發(fā)病過程[12]。

布拉酵母菌散是一種新型的真菌類口服微生態(tài)制劑，進入人體后可在宿主結(jié)腸處定植，暫時充當(dāng)腸道有益菌，可與腸道致病菌發(fā)生競爭性作用，發(fā)揮抑制腸道致病菌生長繁殖的作用[13-15]。同時還能促進腸道上皮細(xì)胞分化、成熟，保護腸道黏膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性，達到止瀉的功效[16]。有大量研究報道證實，布拉酵母菌散劑對嬰幼兒輪狀病毒腸炎的臨床療效較好[17-18]，但關(guān)于其對IL-6、TNF-α和IFN-γ是否有調(diào)節(jié)作用的報道較少。因此，本次研究選取輪狀病毒腸炎患兒進行觀察研究，旨在探討布拉酵母菌散治療嬰幼兒輪狀病毒腸炎的效果及對IL-6、TNF-α和IFN-γ的影響。

IL-6主要由單核吞噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和成纖維細(xì)胞合成與分泌，可誘導(dǎo)天然免疫反應(yīng)，在細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮多種生物學(xué)功能[19]。近年來有研究證實，IL-6是一種能增加生物功能的細(xì)胞因子，可促進T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞的聚集、激活和分化，參與細(xì)胞免疫與體液免疫過程[20]。TNF-α主要由單核或巨噬細(xì)胞分泌的一種促炎性因子，能夠殺傷和抑制腫瘤細(xì)胞，促進中性粒細(xì)胞吞噬，還可以通過增強其他炎性細(xì)胞因子或抑制抗炎性細(xì)胞因子的分泌而具有協(xié)同促炎效應(yīng)，是炎性反應(yīng)過程中發(fā)揮核心作用的細(xì)胞因子[21]。IL-6和TNF-α相互影響、相互作用組成網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，共同啟動細(xì)胞因子的級聯(lián)效應(yīng)，引起炎癥及免疫細(xì)胞聚集、激活及活化，對腸黏膜產(chǎn)生免疫炎性損傷，破壞其屏障結(jié)構(gòu)及功能，參與輪狀病毒腸炎的發(fā)病過程[22]。IFN-γ是TH1細(xì)胞在抗原刺激作用下分泌的促炎性因子，具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)等功能[23]。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，IFN-γ能增強免疫細(xì)胞，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，可增強在腸道抗病毒防御機制中殺傷細(xì)胞的活性[24]。同時IFN-γ還能增強巨噬細(xì)胞吞噬病原體的能力，促進T淋巴細(xì)胞增殖，促進單核巨噬細(xì)胞的抗病毒功能[25]。

本次研究結(jié)果顯示，研究組的臨床總有效率明顯高于對照組，且不良反應(yīng)總發(fā)生率對比無明顯差異。說明采用布拉酵母菌散劑治療輪狀病毒腸炎的臨床效果較好，且不良反應(yīng)較少，治療安全性高。同時本次研究還發(fā)現(xiàn)，治療后，研究組血清和糞便的IL-6、TNF-α水平均明顯低于對照組，IFN-γ水平明顯高于對照組。說明采用布拉酵母菌散治療輪狀病毒腸炎，可以降低IL-6和TNF-α的分泌與表達，減少炎性細(xì)胞的聚集、浸潤及活化，抑制炎癥及免疫反應(yīng)過程，同時可以提高IFN-γ水平，抑制輪狀病毒進入小腸上皮細(xì)胞，調(diào)節(jié)小腸液的轉(zhuǎn)運及滲透功能，促進單核巨噬細(xì)胞的抗病毒能力，達到臨床治愈的療效。

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