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    撕裂蠟孔菌的新功能——防治茄子綿疫病及促生效應(yīng)

    2018-06-29 03:14:40殷潔范倩黃建國
    中國農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年12期
    關(guān)鍵詞:疫霉菌劑茄子

    殷潔,范倩,黃建國

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    撕裂蠟孔菌的新功能——防治茄子綿疫病及促生效應(yīng)

    殷潔,范倩,黃建國

    (西南大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院,重慶 400716)

    【目的】生物農(nóng)藥和生物肥料安全性好,但種類較少,效果欠佳,亟需增加種類,提高藥效和肥效。茄子是人們?nèi)粘J秤玫拇笞谑卟?,防治其病害,改善植物營養(yǎng),提高產(chǎn)量和品質(zhì)是亟待解決的生產(chǎn)問題。撕裂蠟孔菌()分布廣泛,起源復(fù)雜,功能多樣,已用于醫(yī)藥、環(huán)保、生物能源等領(lǐng)域,論文進一步挖掘其農(nóng)用功能?!痉椒ā恳宰灾鞣蛛x獲得的撕裂蠟孔菌新株HG2011為供試菌株,利用Bonnet液體培養(yǎng)基制備發(fā)酵液,谷殼、玉米粉和蛭石等制備固體菌劑,通過純培養(yǎng)、拮抗、盆栽和田間試驗,研究該菌株的胞外酶分泌,對辣椒疫霉()的拮抗效應(yīng)、茄子綿疫病的防治效果,以及對茄子植株氮、磷、鉀養(yǎng)分吸收和產(chǎn)量品質(zhì)的影響。【結(jié)果】撕裂蠟孔菌HG2011菌株能分泌纖維素酶、-1,3-葡聚酶、蛋白酶及磷酸酶,在發(fā)酵液中的活性分別為 46.11、63.02、199.33和27.25 U·mL-1。在拮抗試驗中,HG2011菌株發(fā)酵液顯著抑制辣椒疫霉生長,抑制率為36.13%—60.59%;其菌絲還能侵入疫霉菌落,造成疫霉菌絲變形、斷裂和消融。接種辣椒疫霉使盆栽茄子植株的發(fā)病率超過50%,病情指數(shù)為64.50;而在施用HG2011菌株發(fā)酵液的處理中,發(fā)病率為10.50%—18.52%,病情指數(shù)為13.46—20.60,防治效果為68.06%—79.13%,預(yù)防效果優(yōu)于治療效果。田間施用固體菌劑之后,茄子植株氮、磷、鉀累積量和吸收效率最高,單施化肥次之,不施肥最低。與單施化肥相比,植株氮、磷、鉀積累量分別增加30.99%—47.72%、19.97%—43.40%和11.21%—41.34%,吸收效率上升31.01%—47.74%、19.80%—43.40%和11.21%—41.34%,肥料偏生產(chǎn)力提高5.88%—18.43%、5.91%—18.44%和5.88%—18.43%,茄子植株生物量和果實產(chǎn)量的增幅分別達(dá)30.00%和16.06%。此外,施用固體菌劑顯著提高茄子果實氮、維生素C、可溶性蛋白和游離氨基酸含量,比單施化肥依次增加13.86%—20.79%、62.46%—65.30%、36.30%—37.67%和25.46%—33.08%?!窘Y(jié)論】撕裂蠟孔菌HG2011菌株抑制辣椒疫霉菌絲生長,使其變形、斷裂和消融,降低茄子綿疫病的發(fā)病率和病情指數(shù),預(yù)防效果優(yōu)于治療效果;田間施用撕裂蠟孔菌HG2011固體菌劑促進茄子植株吸收養(yǎng)分,刺激生長,提高產(chǎn)量,改善品質(zhì)。因此,撕裂蠟孔菌新株HG2011及新作用??防病促生效應(yīng)的發(fā)現(xiàn)擴展了其生物學(xué)功能,豐富了生防菌及促生菌的種質(zhì)資源庫,具有潛在的應(yīng)用前景。

    撕裂蠟孔菌;茄子;辣椒疫霉;養(yǎng)分

    0 引言

    【研究意義】化學(xué)農(nóng)藥是我國目前防治作物病害的主要方法,但存在農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染和食品安全等問題。生物農(nóng)藥種類較少,效果欠佳,亟需增加品種,提高藥效[1]。茄子是我國重要的果類蔬菜之一,但連作普遍,病害嚴(yán)重。其中,由辣椒疫霉()或寄生疫霉()引起的綿疫病是茄子的主要病害之一,在茄子各生育期及各部位均可發(fā)生,發(fā)病率常超過15%,減產(chǎn)20%—50%,造成巨大的經(jīng)濟損失[2-3]。此外,茄子生育期長,對養(yǎng)分尤其是磷、鉀需要較多,施肥量大。但長期大量施肥會產(chǎn)生一系列生產(chǎn)和環(huán)境問題,如土壤板結(jié)、肥力下降、肥料浪費及環(huán)境污染等[4]。研制高效、安全、兼具防病促生作用的新型微生物菌劑防治茄子綿疫病,提高肥料利用率,促進生長,增加產(chǎn)量是亟待解決的科學(xué)和生產(chǎn)問題?!厩叭搜芯窟M展】撕裂蠟孔菌()是一種木腐真菌,主要分布于日本、韓國和我國熱帶、亞熱帶和溫帶闊葉林中的腐木、活樹、枯枝落葉層和部分土壤中[5-8];為蠟孔菌屬,起源復(fù)雜,屬多源類群,部分種類起源于平革菌科(Phanerochaetaceae),部分種類起源于皺孔菌科(Meruliaceae)[8]。它們中有些菌株能分泌藥物成分,用于預(yù)防和治療貧血、糖尿病、胃病、癌癥和心臟病等人類疾病[9-11];還有些菌株能吸附結(jié)晶紫和重金屬,降解木質(zhì)素、纖維素、半纖維素、多環(huán)芳烴,用于生物造紙、農(nóng)藥降解、廢水處理等[12-13]。根據(jù)撕裂蠟孔菌生態(tài)分布的廣泛性、起源的復(fù)雜性和已知功能的多樣性,土壤有機質(zhì)包括纖維素、蛋白質(zhì)和磷脂,經(jīng)礦化作用后能釋放出作物需要的養(yǎng)分[14],疫霉菌的細(xì)胞壁富含纖維素和半纖維素[15],推測撕裂蠟孔菌可能具有更加豐富的生物學(xué)功能,如拮抗疫霉病害,分解釋放有機質(zhì)養(yǎng)分和促進植物生長等。筆者課題組從縉云山國家森林公園自主分離獲得一株撕裂蠟孔菌新株HG2011,能分泌幾丁質(zhì)酶、纖維素酶、蛋白酶和-1,3-葡聚酶等胞外水解酶,其次生代謝產(chǎn)物能有效抑制柑橘炭疽病菌()、西瓜蔓枯病菌()及煙草疫霉()等病原菌生長[16];同時還能分泌吲哚乙酸(indole-3-acetic acid,IAA)、磷酸酶、有機酸和鐵載體,具有溶解無機磷、有機磷及難溶性鉀的能力[17]?!颈狙芯壳腥朦c】目前,國內(nèi)外對撕裂蠟孔菌的研究和應(yīng)用多集中于醫(yī)藥、生物造紙及環(huán)境治理等,在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的研究應(yīng)用甚少。因此,以典型、具有代表性的茄科蔬菜??茄子為對象,探索撕裂蠟孔菌新株HG2011防治綿疫病的效果,以及對土壤養(yǎng)分、植物營養(yǎng)和產(chǎn)量品質(zhì)的影響?!緮M解決的關(guān)鍵問題】利用撕裂蠟孔菌新株HG2011制備發(fā)酵液(fermentation broth,CLB)和固體菌劑(solid agent,CLA),通過拮抗、盆栽和田間試驗,揭示HG2011菌劑防治茄子綿疫病的效果及促生作用,為挖掘撕裂蠟孔菌的新功能及其在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用打下基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    供試茄子:品種為科光三月茄,購于重慶市北碚種苗有限公司。

    供試土壤:西南大學(xué)農(nóng)場的灰棕紫泥紫色土,質(zhì)地中壤,肥力中等,pH 7.1,有機質(zhì)、全氮、磷和鉀含量依次為12.04、1.41、0.73和14.71 g·kg-1,堿解氮、有效磷和速效鉀含量分別是58.24、12.03和126.11 mg·kg-1。

    供試菌種:自主分離獲得的撕裂蠟孔菌HG2011,用PDA固體培養(yǎng)基25℃培養(yǎng)5 d備用。辣椒疫霉由西南大學(xué)植物保護學(xué)院提供。

    化學(xué)農(nóng)藥(chemical pesticide,CHP):40%百菌清懸浮劑,江陰蘇利化學(xué)股份有限公司生產(chǎn),稀釋500倍,備用于盆栽病害防治試驗。

    培養(yǎng)基:在測定蛋白酶、纖維素酶和磷酸酶時,依次用牛肉膏蛋白胨、羧甲基纖維素鈉[18]、卵黃[19]和葡聚糖[20]等液體培養(yǎng)基培養(yǎng)供試菌株。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 辣椒疫霉孢子懸浮液、撕裂蠟孔菌HG2011發(fā)酵液及固體菌劑的制備 辣椒疫霉孢子懸浮液:將辣椒疫霉用燕麥固體培養(yǎng)基25℃培養(yǎng)4 d,備用于拮抗試驗。另用燕麥固體培養(yǎng)基25℃培養(yǎng)7 d,無菌水洗滌孢子,血球計數(shù)板計數(shù),配制成1×104CFU/mL孢子懸浮液,備用于田間病害防治試驗[21]。

    撕裂蠟孔菌HG2011發(fā)酵液(CLB):配制Bonnet液體培養(yǎng)基置于50 L BailunBio發(fā)酵罐(上海百侖生物科技有限公司生產(chǎn))中,接種PDA固體培養(yǎng)的撕裂蠟孔菌HG2011,液體發(fā)酵120 h(溫度:(27±1)℃;攪拌速率:150 r/min;通氣量:0.1 vvm)。

    撕裂蠟孔菌固體菌劑(CLA):取谷殼、玉米粉、蛭石和水,按15﹕3﹕15﹕70(質(zhì)量比)混勻,裝入32 cm×32 cm×45 cm食用菌栽培袋,透氣膜封口,高溫滅菌(121℃,1 h),冷卻后每袋注入100 mL CLB,28℃暗培養(yǎng)21 d。

    1.2.2 撕裂蠟孔菌HG2011胞外酶活性測定 分別將活化后的菌體接種到纖維素鈉、牛肉膏蛋白胨、卵黃及葡聚酶液體培養(yǎng)基中,25℃,150 r/min搖床培養(yǎng)6 d,取適量發(fā)酵液,4 000 r/min離心10 min,分別用3,5-二硝基水楊酸(DNS)法[22]、福林酚-試劑法[22]、磷酸苯二鈉比色法[19]及還原糖法[20]測定撕裂蠟孔菌HG2011上清液中的纖維素酶、蛋白酶、磷酸酶及-1,3-葡聚酶活性,其活性依次以37℃酶促反應(yīng)條件下,1 mL上清液每分鐘水解羧甲基纖維素鈉產(chǎn)生1 μg葡萄糖,水解酪蛋白產(chǎn)生1 μg酪氨酸、水解磷酸苯二鈉產(chǎn)生1 μg酚和水解葡聚糖產(chǎn)生1 μg葡萄糖為一個酶活力單位(U·mL-1)。

    1.2.3 拮抗試驗 平板拮抗試驗:取CLB,5 000 r/min離心15 min去除菌絲,0.22 μm濾膜真空抽濾,備用。配制PDA固體培養(yǎng)基,滅菌(121℃,1.5 kPa,20 min,下同),冷卻至45—50℃,加入真空抽濾后的CLB制作成濃度依次為0%(CK)、10%和20%的平板。然后用直徑為6 mm的打孔器取疫霉菌塊,接種于平板中央,25℃恒溫培養(yǎng) 3—5 d,重復(fù)5次,用十字交叉法測量菌落直徑,計算抑菌率[23]:抑菌率(%)=100×(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/對照菌落直徑。同時,分別挑取對照及處理的辣椒疫霉菌絲,用光學(xué)顯微鏡觀察菌絲形態(tài)變化。

    對峙培養(yǎng)試驗:配制PDA固體培養(yǎng)基,滅菌、倒平板、冷卻,用直徑為6 mm的打孔器取疫霉菌和撕裂蠟孔菌HG2011菌塊,分別接種于培養(yǎng)基兩側(cè),25℃對峙培養(yǎng),待二者接觸時,挑取接觸面的菌絲,用光學(xué)顯微鏡觀察菌絲形態(tài)變化。

    防治方法:由于稻薊馬很小,一般情況下,不易引起人們注意,只是當(dāng)水稻嚴(yán)重危害而造成大量卷葉時才被發(fā)現(xiàn),因此,要及時檢查,把稻薊馬消滅在幼蟲期。每畝用40%樂果乳劑1500~2000倍液,秧田和大田施藥后,都要保持水層。防治稻薊馬后要補施速效肥,促使秧苗和分蘗恢復(fù)生長。

    1.2.4 盆栽防病試驗 田間采集耕作層作為供試土壤,揀去雜物,風(fēng)干,過3 mm篩。每千克土加0.2 g尿素(N含量46%)、0.4 g過磷酸鈣(P2O5含量12%)、0.2 g硫酸鉀(K2O含量50%),肥土混勻。取φ23cm×18cm塑料缽,每缽裝土3.0 kg。在茄苗接種病菌前后,分別施用撕裂蠟孔菌HG2011菌劑(CLA)和化學(xué)農(nóng)藥(CHP)模擬治療和預(yù)防等。試驗處理:(1)對照:不接種病菌(CK);(2)接種病菌(pathogen inoculation,PI):移栽健康茄苗,每株茄苗用10 mL病菌孢子液苗床灌根,1 d后移栽;(3)CLA治療處理(PI+CLA):移栽帶病的茄苗,每株基施10 g CLA于根系周圍;(4)CLA預(yù)防處理(CLA+PI):移栽健康茄苗,每株基施10 g CLA于根系周圍,2 d后用病菌孢子懸浮液10 mL/株灌根;(5)化學(xué)農(nóng)藥治療處理(PI+CHP):移栽帶病的茄苗,每株施用50 mL稀釋500倍的百菌清稀釋液;(6)化學(xué)農(nóng)藥預(yù)防處理(CHP+PI):移栽健康茄苗,每株施用50 mL稀釋500倍的百菌清稀釋液,2 d后用病菌孢子懸浮液10 mL/株灌根。每處理30缽,每缽種植茄子幼苗1株,隨機排布,重復(fù)4次,按常規(guī)方式管理。

    參照《蔬菜病蟲害預(yù)測預(yù)報調(diào)查規(guī)范》[24],間隔5 d調(diào)查病害,當(dāng)PI處理的發(fā)病率超過50%時停止試驗,計算發(fā)病率、病情指數(shù)和防治效果:

    病情指數(shù)=×100

    發(fā)病率(%)=′100

    防治效果(%)=′100

    1.2.5 田間試驗 于2017年3—8月在重慶市西南大學(xué)農(nóng)場進行(E 106o25',N 29o29';海拔252 m)。當(dāng)?shù)啬昃鶜鉁?8.2℃,年降雨量1 156.8 mm,年日照時效1 014.3 h,無霜期359 d。

    試驗處理:(1)不施肥(CK);(2)常規(guī)施肥(normal fertilization,NF);(3)常規(guī)施肥+每株基施5 g CLA(NF+CLA5);(4)常規(guī)施肥+每株基施10 g CLA(NF+CLA10)。在NF處理中,每畝分別施用尿素、過磷酸鈣和硫酸鉀20、15和15 kg,并基施10 g/株高壓蒸汽滅菌的CLA,其中磷肥全部做基肥,氮鉀肥50%做基肥,剩余的50%均分為二,分別于初花期和第一次結(jié)果采收后兌水追施。每小區(qū)種植30株茄苗,種植密度2 500株/667 m2,隨機區(qū)組排列,重復(fù)3次,常規(guī)管理。

    測定項目:分次采收茄子果實,記錄果數(shù)、單果重及產(chǎn)量。取盛果期的茄子果實30個,分別用考馬斯亮藍(lán)法、茚三酮比色法、2,6-二氯酚靛酚滴定法和蒽酮比色法測定可溶性蛋白、游離氨基酸、維生素C和可溶性糖含量[25]。果實采收完畢后,收獲植株,105℃殺青,60℃烘干,稱取生物量,硫酸-過氧化氫消化后,依次用凱氏定氮法、鉬黃比色法和火焰光度計法測定消化液中的氮、磷、鉀含量[26],并計算植株養(yǎng)分利用效率、吸收效率及肥料偏生產(chǎn)力[27]。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    分別用Excel 2010和SPSS 19.0進行基本計算和統(tǒng)計分析,用最小差異顯著法(LSD)進行多重比較,顯著水平設(shè)置為<0.05。

    2 結(jié)果

    2.1 撕裂蠟孔菌HG2011分泌的胞外酶及其活性

    HG2011菌株能分泌纖維素酶、-1,3-葡聚酶、蛋白酶及磷酸酶,其活性分別為 46.11、63.02、199.33和27.25 U·mL-1。

    2.2 撕裂蠟孔菌HG2011對辣椒疫霉的拮抗作用

    由圖1可見,HG2011菌株發(fā)酵液顯著抑制辣椒疫霉生長。培養(yǎng)4 d后,10%和20% CLB處理的抑制率分別為36.13%和60.59%。

    在對峙培養(yǎng)試驗中,辣椒疫霉的生長速率大于撕裂蠟孔菌HG2011。接種后第3天,二者的菌絲發(fā)生接觸,辣椒疫霉停止生長,撕裂蠟孔菌則繼續(xù)生長至完全覆蓋辣椒疫霉菌落,最終使之逐漸萎縮和消失(圖2)。

    正常的辣椒疫霉菌絲粗細(xì)均勻,表面光滑,直徑為9—13 μm,較撕裂蠟孔菌(菌絲直徑3—6 μm)粗(圖3-A、3-B)。當(dāng)撕裂蠟孔菌HG2011侵入辣椒疫霉菌落后,其菌絲仍然保持正常形態(tài),但辣椒疫霉菌絲則發(fā)生扭曲、空泡化、斷裂和消融(圖3-C)。

    2.3 撕裂蠟孔菌固體菌劑對茄子綿疫病的防治效果

    在溫室試驗中,接種病菌的植株發(fā)病率為54.45%,病情指數(shù)為64.50。施用化學(xué)農(nóng)藥之后,發(fā)病率僅2.15%—3.50%,病情指數(shù)為3.46—4.67,防治效果為92.76%—94.64%,預(yù)防效果與治療效果無顯著差異。在施用撕裂蠟孔菌菌劑處理中,發(fā)病率降至10.50%—18.52%,病情指數(shù)為13.46—20.60,防治效果為68.06%—79.13%,預(yù)防效果優(yōu)于治療效果(表1)。

    2.4 撕裂蠟孔菌固體菌劑對茄子養(yǎng)分含量、吸收和利用的影響

    表2為不同試驗處理對茄子氮、磷、鉀含量,養(yǎng)分吸收和利用的影響。

    上方菌株為撕裂蠟孔菌HG2011,下方為辣椒疫霉The upper is C. lacerate HG2011 and the lower is P. capsici

    A:撕裂蠟孔菌HG2011的正常菌絲 normal C. lacerate HG2011 hyphae (400×);B:辣椒疫霉的正常菌絲normal P. capsici hyphae (400×);C:撕裂蠟孔菌侵入辣椒疫霉菌落后的異常菌絲 Abnormal P. capsici hyphae after C. lacerate infection (1000×)

    表1 化學(xué)農(nóng)藥和撕裂蠟孔菌HG2011菌劑對茄子綿疫病的防治效果

    同一列中不同小寫字母表示差異顯著(<0.05)。下同

    In each column, different lowercases mean significant difference at<0.05 level. The same as below

    養(yǎng)分含量:與對照和常規(guī)施肥相比,施用撕裂蠟孔菌HG2011菌劑顯著提高茄子植株氮、磷、鉀含量,但10 g與5 g菌劑之間無顯著差異;施用菌劑后茄子植株氮、磷、鉀含量較常規(guī)施肥分別提高13.39%—22.05%、11.11%—16.67%和3.86%—8.86%。

    養(yǎng)分吸收:各處理的茄子植株養(yǎng)分累積量及吸收效率均表現(xiàn)為常規(guī)施肥+10 g菌劑>常規(guī)施肥+5 g菌劑>常規(guī)施肥>對照。與常規(guī)施肥相比,施用撕裂蠟孔菌HG2011菌劑后植株氮、磷、鉀積累量分別增加30.99%—47.72%、19.97%—43.40%和11.21%—41.34%,養(yǎng)分吸收率分別增加31.01%—47.74%(氮)、19.80%—43.40%(磷)和11.21%—41.34%(鉀)。

    養(yǎng)分利用:茄子養(yǎng)分利用效率常規(guī)施肥最高,對照最低,高低相差3.39倍(氮)、3.14倍(磷)和3.17倍(鉀);施用10 g與5 g菌劑無顯著差異,變化于常規(guī)施肥和對照之間。肥料偏生產(chǎn)力表現(xiàn)為常規(guī)施肥+10 g菌劑>常規(guī)施肥+5 g菌劑>常規(guī)施肥,常規(guī)施肥+10 g菌劑處理的肥料偏生產(chǎn)力較常規(guī)施肥處理分別提高了18.43%(氮)、18.44%(磷)和18.43%(鉀)。

    表2 不同處理茄子植株養(yǎng)分含量及吸收利用效率

    2.5 撕裂蠟孔菌固體菌劑對茄子生長、產(chǎn)量及品質(zhì)影響

    與常規(guī)施肥相比,常規(guī)施肥+10 g菌劑處理的茄子生物量顯著提高,增幅30.00%。施用撕裂蠟孔菌HG2011菌劑之后,由于單果重或結(jié)果數(shù)增加,茄子產(chǎn)量常規(guī)施肥+10 g菌劑>常規(guī)施肥+5 g菌劑>常規(guī)施肥>對照。其中,常規(guī)施肥+5 g菌劑和常規(guī)施肥+10 g菌劑分別比常規(guī)施肥增產(chǎn)6.82%和16.06%(表3)。

    施用撕裂蠟孔菌HG2011菌劑之后,茄子果實的氮、維生素C、可溶性蛋白和游離氨基酸含量比常規(guī)施肥顯著提高,依次增加13.86%—20.79%、62.46%—65.30%、36.30%—37.67%和25.46%—33.08%,但施用10 g和5 g菌劑之間無顯著差異。此外,茄子果實可溶性糖含量各處理之間也無顯著差異,變化介于4.28%—4.58%;磷鉀含量不施肥最低,常規(guī)施肥和施用菌劑之間無顯著差異,含量變化于0.39%—0.40%和3.84%—3.91%(表4)。

    表3 茄子植株生物量、產(chǎn)量及其構(gòu)成因素

    表4 茄子果實的品質(zhì)

    3 討論

    據(jù)報道,撕裂蠟孔菌能分泌多酚、黃酮、抗凝劑、甘露醇、淀粉酶抑制劑、葡萄糖苷酶抑制劑和免疫調(diào)節(jié)劑等,用于預(yù)防和治療人類疾?。画h(huán)境治理中,撕裂蠟孔菌富含O-H、COOH、C=O、C-N、C-H、-NH和P-OH等,可用于吸附結(jié)晶紫和重金屬,處理染料和重金屬廢水;有些菌株還分泌漆酶、過氧化物酶、木質(zhì)素酶及纖維素酶,降解木質(zhì)素、多環(huán)芳烴、纖維素,用于生物制漿造紙、農(nóng)藥降解、處理有機污水等[8-12],但農(nóng)用研究未見報道。本研究中,用供試菌株的發(fā)酵液制備帶毒平板,顯著抑制辣椒疫霉的菌絲生長;在對峙培養(yǎng)中,撕裂蠟孔菌HG2011能侵入并逐漸覆蓋辣椒疫霉菌落,使病原菌停止生長并導(dǎo)致其死亡,與該菌株對柑橘炭疽病菌、西瓜蔓枯病菌及煙草疫霉的抑制作用相似[16],說明供試菌株可能分泌抑菌次生代謝產(chǎn)物,如鐵載體競爭鐵及其他微量元素[28],以及結(jié)構(gòu)復(fù)雜,種類繁多,功能多樣的倍半萜物質(zhì),抑制病菌生長繁殖[29]。

    眾所周知,真菌細(xì)胞壁的主要成分為多糖,其次為蛋白質(zhì)、類脂。真菌類群不同,細(xì)胞壁多糖的類型也不一樣。低等真菌的細(xì)胞壁成分以纖維素為主,酵母菌多為葡聚糖,而高等真菌則主要是幾丁質(zhì)[30]。木霉菌的重寄生作用是其拮抗病原真菌的主要機制,二者相互識別后,木霉菌絲沿寄主菌絲平行和螺旋狀纏繞生長,通過分泌幾丁質(zhì)酶、纖維素酶、葡聚糖酶和蛋白酶等胞外酶溶解寄主菌絲細(xì)胞壁,木霉菌絲則穿透寄主菌絲,吸取營養(yǎng)[31]。本研究表明,撕裂蠟孔菌HG2011也能分泌纖維素酶、葡聚糖酶和蛋白酶。在撕裂蠟孔菌HG2011分泌的水解酶中,纖維素酶和-1,3-葡聚酶能降解病原真菌的細(xì)胞壁,磷酸酶和蛋白酶可水解病原真菌細(xì)胞膜[32]。顯微觀察也表明,撕裂蠟孔菌HG2011接觸辣椒疫霉菌絲后,辣椒疫霉菌絲發(fā)生變形、空泡化、斷裂和消融。常用抗真菌的農(nóng)藥對細(xì)胞壁含幾丁質(zhì)的病原真菌有效,但對富含纖維素和半纖維素的疫霉效果較差[15,33]。疫霉細(xì)胞壁富含纖維素、半纖維素和葡聚糖,當(dāng)撕裂蠟孔菌HG2011與疫霉接近或接觸后,前者能分泌出大量的水解酶,降解疫霉細(xì)胞壁和細(xì)胞膜,破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),使胞內(nèi)物質(zhì)外溢,導(dǎo)致病菌死亡,產(chǎn)生較好的生防效果。在盆栽試驗中,單接辣椒疫霉處理的植株發(fā)病率超過50%;化學(xué)農(nóng)藥百菌清的預(yù)防、治療效果為92.76%—94.64%;施用撕裂蠟孔菌HG2011菌劑后,預(yù)防效果及治療效果分別達(dá)79.13%和68.06%,預(yù)防效果優(yōu)于治療效果,其效果優(yōu)于多數(shù)生防制劑[34-35],進一步肯定了撕裂蠟孔菌HG2011具有防治茄子綿疫病的作用。但是,關(guān)于撕裂蠟孔菌拮抗疫霉病害的機理目前尚不清楚,需要進一步鑒定其產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)。

    化肥利用率低制約作物增產(chǎn)增收,微生物菌劑為解決這一問題提供了有效途徑[36]。類似AM真菌和外生菌根真菌[37-38],供試撕裂蠟孔菌HG2011分泌的纖維素酶、木質(zhì)素酶、磷酸酶和蛋白酶能降解土壤有機質(zhì)中的木質(zhì)素、纖維素蛋白質(zhì)和磷脂,使之礦化釋放作物需要的養(yǎng)分,發(fā)揮促生作用。此外,筆者實驗室前期研究還發(fā)現(xiàn),供試菌株能分泌草酸、乙酸、蘋果酸和葡萄糖酸,溶解難溶性磷鉀[17]。施用撕裂蠟孔菌HG2011菌劑之后,茄子植株氮、磷、鉀養(yǎng)分吸收量和吸收效率顯著提高。推測其原因可能是該菌株能分泌多種有機酸,絡(luò)合或溶解磷、鉀礦物中的鐵、鋁、鈣和鎂等元素,分解礦物,釋放磷、鉀,進而提高土壤難溶性磷、鉀的生物有效性[39-40]。與單施化肥相比,茄子植株的氮、磷和鉀吸收量顯著增加,這意味著撕裂蠟孔菌可能定殖于茄子根系周圍,持續(xù)促進養(yǎng)分吸收。在純培養(yǎng)條件下,供試菌株還能分泌生長素,其分泌量隨色氨酸的供應(yīng)量增加而提高,高低相差5倍以上[17]。在茄子移栽時,將撕裂蠟孔菌HG2011菌劑基施于幼苗根系周圍,根系分泌物隨植株生物量增加而增多,供給生長素合成的前體??色氨酸可能發(fā)生相應(yīng)變化,由此調(diào)控撕裂蠟孔菌生長素分泌量,適時適量地供應(yīng)生長激素,促進茄子生長,提高茄子生物量。

    研究表明,某些放線菌()、枯草芽孢桿菌()和PGPR能促進植物養(yǎng)分吸收,提高肥料利用率[41-42]。與之類似,撕裂蠟孔菌HG2011菌劑與化肥配合施用后,氮、磷、鉀肥的偏生產(chǎn)力顯著高于單施化肥,說明二者配合施用提高了化肥經(jīng)濟效益,單位數(shù)量的化學(xué)肥料獲得了更高的經(jīng)濟產(chǎn)量。此外,施用撕裂蠟孔菌HG2011菌劑后,茄子果實產(chǎn)量比單施化肥增加,最高增產(chǎn)16.06%。根據(jù)產(chǎn)量構(gòu)成要素,其原因是不同劑量的菌劑均可提高單果重,高劑量還增加了結(jié)果數(shù)。單果重增加意味著體積增大,商品觀感性狀改善,有益于提高銷售價格,增加菜農(nóng)經(jīng)濟收入。眾所周知,作物籽粒和蔬菜果實含氮量與蛋白質(zhì)含量呈顯著正相關(guān),在不同劑量的撕裂蠟孔菌HG2011與化肥配施的處理中,茄子果實全氮、維生素C、游離氨基酸和可溶性蛋白顯著增加,說明該菌劑能改善果實品質(zhì)。

    撕裂蠟孔菌HG2011生長迅速,易于培養(yǎng),可用木粉、秸稈、谷殼等來源廣泛且成本低廉的農(nóng)業(yè)廢棄物做基質(zhì)制備固體菌劑,生產(chǎn)工藝簡單,操作方便,具備大規(guī)模應(yīng)用推廣前景。此外,微生物菌劑的作用效果與其對環(huán)境的適應(yīng)性密切相關(guān)[43-44],作為木腐真菌,其環(huán)境適應(yīng)力較強,有益于定殖在作物根際,持續(xù)防病促生。

    4 結(jié)論

    利用撕裂蠟孔菌新株HG2011,以茄子為對象,發(fā)現(xiàn)了供試菌株的新作用??拮抗疫霉菌,防治茄子綿疫病,促進植株吸收養(yǎng)分,刺激生長,提高產(chǎn)量品質(zhì)。撕裂蠟孔菌HG2011對植物防病促生作用的發(fā)現(xiàn)擴展了撕裂蠟孔菌的功能,豐富了生防及促生菌的種質(zhì)資源庫,具有潛在的應(yīng)用前景。

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    (責(zé)任編輯 岳梅)

    New Functions ofin Phytophthora Blight Control and Growth Promotion of Eggplants

    YIN Jie, FAN Qian, HUANG JianGuo

    (College of Resources and Environment, Southwest University, Chongqing 400716)

    【Objective】 Bio-pesticides and bio-fertilizers are safe and environment friendly, but need to find more effective strains to increase efficiencies in biological control and fertilization practice. Eggplant () is an indispensable vegetable in our country. It is an urgent production problem to effectively control diseases, improve plant nutrition, increase yield and quality.has been used in human disease treatment, environmental protection, bioenergy and other field. The objective of this study is to explore the potential of this fungus further in plant disease control and nutrition improvement. 【Method】A new self-isolated(strain HG2011) was grown in Bonnet liquid medium and mixture made of rice husk, vermiculite, and maize powder, respectively, to produce culture broth and solid inoculant. By pure culture, antagonism, pot culture and field experiment, a several experiments were performed to detect extracellular enzyme activity in culture broth, antagonism againston culture plate, biological control of phytophthora blight in greenhouse, nutrient uptake, including nitrogen, phosphorus, and potassium, and changes in yield and quality of eggplant in field as affected by this new fungal strain. 【Result】HG2011 strain could produce cellulase,-1,3-glucanase, protease and phosphatase, with the activities of 46.11, 63.02, 199.33, and 27.25 U·mL-1, respectively, in the culture broth. Moreover, the culture brothHG2011 inhibited the hyphal growth of, with inhibition rate of 36.13%-60.59% on antagonism plate. In duel culture, this antagonistic fungus could covercolonies and make the hyphae deformed, broken and melted. In greenhouse pot experiment,was successful to infect eggplants through inoculation, with phytophthora blight incidence over than 50% and disease index of 64.50. After application ofHG2011 culture broth, the disease incidence decreased to 10.50%-18.52%, the disease index was 13.46-20.60 and control efficiency was 68.06%-79.13%. The preventive effect was better than that of therapy. Seedlings supplied with the fungal solid inoculant in combination with chemical fertilizers showed the highest nutrient absorption efficiency, followed by only chemical fertilizer and control (without fertilizer). Compared with sole chemical fertilizer,solid inoculant increased nitrogen, phosphorus, and potassium accumulation in eggplant seedlings by 30.99%-47.72%, 19.97%-43.40%, and 11.21%-41.34%, absorption efficiency by 31.01%-47.74%, 19.80%-43.40% and 11.21%-41.34%, fertilizer partial productivity by 5.88%-18.43%, 5.91%-18.44%, and 5.88%-18.43%, plant biomass by more than 30.00%, and fruit yield by over than 16.06%. Nitrogen, vitamin C, soluble protein, and free amino acids in the fruit were enhanced by 13.86%-20.79%, 62.46%-65.30%, 36.30%-37.67%, and 25.46%-33.08%, respectively, undersolid inoculant treatments. 【Conclusion】HG2011 strain inhibited hyphal growth of, made it deform, break and melt, and reduced the incidence and disease index of eggplant phytophthora blight. The preventive effect was better than that of therapy. The application of the fungal inoculant promoted the nutrient absorption, stimulated the seedling growth, increased the yield, and improved fruit quality of eggplants in the field. Therefore, the new.HG2011 strain and the founding of its new roles in plant disease control and growth promotion extended its biological functions, enriched the members in microbe source bank, and showed a promising potential in plant protection and fertilization.

    ;;; nutrient

    2018-01-22;

    2018-02-03

    國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(“973”計劃)(2013CB127405)、重慶市社會事業(yè)與民生保障科技創(chuàng)新專項(cstc2017shms-xdny80084)、貴州省遵義市煙草公司科技項目(201503)、重慶市研究生科研創(chuàng)新項目(CYB17063)

    殷潔,E-mail:yjalisa@foxmail.com。

    黃建國,E-mail:huang99@swu.edu.cn

    10.3864/j.issn.0578-1752.2018.12.007

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