多發(fā)性肌炎/皮肌炎患者外周血T細(xì)胞檢測臨床價值

解小紅 劉輝

重慶三峽中心醫(yī)院檢驗科，重慶 404000

多發(fā)性肌炎/皮肌炎是一種主要累及骨骼肌組織的自身免疫性疾病，患者以四肢近端骨骼肌受累、肌無力、肌肉耐力降低、血清肌酸激酶升高、肌肉組織中炎性細(xì)胞浸潤為主要臨床表現(xiàn)[1]。多發(fā)性肌炎/皮肌炎發(fā)病與免疫失調(diào)有關(guān)，臨床尚未明確其發(fā)病機(jī)制，目前，該病的治療藥物仍以糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑為主[2]。最新研究發(fā)現(xiàn)，自身抗原驅(qū)動T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用引發(fā)的骨骼肌細(xì)胞損傷在多發(fā)性肌炎/皮肌炎的發(fā)生發(fā)展中扮演了重要角色[3]，因此，了解患者外周血T細(xì)胞表達(dá)特點，有望為該病發(fā)病機(jī)制的探索及治療思路的拓展提供一定參考。為此，本研究選取93例患者及60名健康體檢者進(jìn)行了對照分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2013年5月—2016年10月收治的93例多發(fā)性肌炎/皮肌炎患者，均符合Bohan診斷及分類標(biāo)準(zhǔn)[4]、Ishida疾病活動性判斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，且入組前3個月內(nèi)無免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素等藥物使用史，納入觀察組；同時，選取60名健康體檢者，納入對照組。觀察組男37例，女56例，年齡19～55歲，平均（35.60±11.24）歲；對照組男24例，女36例，年齡18～58歲，平均（33.95±10.81）歲。兩組受試者性別比例、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究已征得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，受試者均自愿參與并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

于受試者入組次日抽取其空腹肘靜脈血5 mL，常規(guī)分離單個核細(xì)胞，以臺盼藍(lán)染色明確細(xì)胞活力＞95%。將細(xì)胞分裝至3支離心管內(nèi)，各管內(nèi)細(xì)胞體積約30 μL，數(shù)量為3×105～5×105個，對照管加入10 μL鼠抗人IgG1-PE和10 μL鼠抗人IgG1-FITC，其余2管分別加入10 μL鼠抗人CD3-PE、10 μL鼠抗人CD4-FITC和10 μL鼠抗人CD3-PE、10 μL鼠抗人CD8-FITC（均購自法國ImmunoTech公司），混勻，避光，于37℃環(huán)境下孵育30 min，使用PBS溶液洗滌3次，而后加入0.5 mL PBS。使用FC500流式細(xì)胞儀及配套軟件（美國Beckman Coulter公司），啟用Macintosh系統(tǒng)，使用Cellquest多功能獲取、分析軟件，以對照管為陰性對照，計算各管內(nèi)5000～10000個細(xì)胞內(nèi)陽性細(xì)胞百分率，并據(jù)此分析CD+、CD+及 CD+348表達(dá)水平[6-7]。

1.3 分析方法

對比觀察組、對照組入組次日外周血CD3+、CD4+及CD8+表達(dá)水平差別，并對接受糖皮質(zhì)激素類藥物治療的34例患者，于治療后再次檢測其外周血T細(xì)胞表達(dá)水平，觀察其治療前后外周血T細(xì)胞表達(dá)水平變化。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

對本臨床研究的所有數(shù)據(jù)采用SPSS18.0進(jìn)行分析，性別以（n）表示，并采用χ2檢驗，年齡、外周血T細(xì)胞表達(dá)水平以（x±s）表示，并采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對照組外周血T細(xì)胞表達(dá)水平

觀察組外周血CD8+百分比低于對照組，其CD4+/CD8+比例高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；兩組受試者外周血CD3+百分比、CD4+百分比比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 觀察組與對照組外周血T細(xì)胞表達(dá)水平比較（x±s）

2.2 多發(fā)性肌炎/皮肌炎患者治療前后外周血T細(xì)胞表達(dá)水平變化

與治療前相比，34例接受糖皮質(zhì)激素類藥物治療的多發(fā)性肌炎/皮肌炎患者治療后外周血CD8+百分比顯著升高，CD4+/CD8+比例顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 多發(fā)性肌炎/皮肌炎患者治療前后外周血T細(xì)胞表達(dá)水平變化比較（x±s）

3 討論

作為一組累及多系統(tǒng)、多器官的自身免疫性疾病，多發(fā)性肌炎/皮肌炎不僅可導(dǎo)致四肢近端肌萎縮和破壞，還可引發(fā)肺間質(zhì)改變，并對患者預(yù)后質(zhì)量造成嚴(yán)重影響[8]。因此，近年來臨床愈發(fā)注重多發(fā)性肌炎/皮肌炎發(fā)病機(jī)制的探索，以期控制病情進(jìn)展，盡可能避免間質(zhì)性肺疾病的發(fā)生，從而保證患者生存質(zhì)量[9]。

多項研究表明，外周血T細(xì)胞在多發(fā)性肌炎/皮肌炎的發(fā)生發(fā)展過程中可能扮演了重要角色，且與患者死亡風(fēng)險具有密切關(guān)聯(lián)[10-11]，而本研究結(jié)果表明，多發(fā)性肌炎/皮肌炎患者外周血CD8+百分比偏低而CD4+/CD8+比例偏高，說明患者外周血T細(xì)胞處于明顯比例失衡狀態(tài)，其中，CD4+T細(xì)胞主要發(fā)揮輔助/誘導(dǎo)功能，而CD8+T細(xì)胞具有抑制/細(xì)胞毒功能，CD4+/CD8

+比例升高意味著外周血T細(xì)胞平衡向CD4+偏移，可能是造成患者肌肉組織內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤的主要原因[12]，與此同時，CD8+T細(xì)胞的減少還可造成白細(xì)胞介素-17（IL-17）等細(xì)胞效應(yīng)因子大量分泌，而IL-17與受體結(jié)合后，可通過刺激靶細(xì)胞釋放前炎癥細(xì)胞因子、動員中性粒細(xì)胞，誘導(dǎo)IL-6、一氧化氮、前列腺素E2的產(chǎn)生，進(jìn)一步促進(jìn)炎性細(xì)胞在炎癥部位的聚集，并導(dǎo)致局部肌肉纖維周圍炎癥的擴(kuò)散與進(jìn)展[13-14]。此外，亦有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，CD8+百分比的下降可導(dǎo)致機(jī)體抑制肉芽腫發(fā)展的功能明顯受損，這一病理生理變化可大幅削弱機(jī)體對致病性效應(yīng)T細(xì)胞的抑制能力，也是導(dǎo)致病情進(jìn)一步發(fā)展的主要原因[15]。因此，CD8+百分比下降所致CD4+/CD8+平衡偏移可能是多發(fā)性肌炎/皮肌炎的重要發(fā)病機(jī)制之一。需要注意的是，部分學(xué)者認(rèn)為，多發(fā)性肌炎/皮肌炎患者外周血CD4+百分比存在顯著升高變化[16]，但本研究并未觀察到這一結(jié)論，考慮與檢測時采用的雙標(biāo)記技術(shù)能夠有效避免自然殺傷細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞對CD4+百分比測定值的干擾有關(guān)。

經(jīng)糖皮質(zhì)激素類藥物治療后，觀察組內(nèi)34例患者外周血CD8+百分比顯著升高，CD4+/CD8+比例顯著下降，說明糖皮質(zhì)激素類藥物能夠針對多發(fā)性肌炎/皮肌炎的發(fā)病機(jī)制，發(fā)揮一定治療效果。然而，大量研究發(fā)現(xiàn)，糖皮質(zhì)激素的免疫調(diào)節(jié)作用主要體現(xiàn)在改變CD4+百分比，而非調(diào)整CD8+百分比[17-18]，但本研究結(jié)果與之相反，考慮與患者用藥時間較短、CD4+百分比變化有限有關(guān)?？傮w而言，短期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素在提升抑制性T細(xì)胞比例方面具有一定作用，但仍需大樣本、長期隨訪研究予以驗證。

綜上所述，多發(fā)性肌炎/皮肌炎患者外周血CD+/CD+48平衡明顯偏移，可能參與了疾病的發(fā)生與發(fā)展過程，探索CD4+/CD8+平衡偏移的糾正策略，有望為患者預(yù)后質(zhì)量的改善提供新的治療思路。

[1] KURITA T, YASUDA S, OBA K, et al. The efficacy of tacrolimus in patients with interstitial lung diseases complicated with polymyositis or dermatomyositis[J]. Rheumatology, 2014,54(1): 39-44.

[2] ITO Y, HASHIMOTO M, HIROTA K, et al. Detection of T cell responses to a ubiquitous cellular protein in autoimmune disease[J]. Science, 2014, 346(6207): 363-368.

[3] 周航, 張思功, 舒曉明, 等. TRAIL及其受體在多發(fā)性肌炎/皮肌炎患者外周血CD3^+T淋巴細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 中日友好醫(yī)院學(xué)報, 2015, 29(1): 11-14.

[4] KURITA T, YASUDA S, AMENGUAL O, et al. The eff i cacy of calcineurin inhibitors for the treatment of interstitial lung disease associated with polymyositis/dermatomyositis[J]. Lupus,2015, 24(1): 3-9.

[5] DE PADILLA C M L, CROWSON C S, HEIN M S, et al. Gene expression prof i ling in blood and affected muscle tissues reveals differential activation pathways in patients with new-onset juvenile and adult dermatomyositis[J]. J Rheumatol, 2017, 44(1):117-124.

[6] PANDYA J M, LOELL I, HOSSAIN M S, et al. Effects of conventional immunosuppressive treatment on CD244+(CD28null) and FOXP3+ T cells in the inflamed muscle of patients with polymyositis and dermatomyositis[J]. Arthritis Res Ther, 2016, 18(1): 80.

[7] AGGARWAL R, BANDOS A, REED A M, et al. Predictors of Clinical Improvement in Rituximab‐Treated Refractory Adult and Juvenile Dermatomyositis and Adult Polymyositis[J].Arthritis Rheum, 2014, 66(3): 740-749.

[8] 中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病學(xué)分會. 多發(fā)性肌炎和皮肌炎診斷及治療指南[J]. 中華風(fēng)濕病學(xué)雜志, 2010, 14(12):828-831.

[9] ENOMOTO Y, SUZUKI Y, HOZUMI H, et al. Clinical significance of soluble CD163 in polymyositis-related or dermatomyositis-related interstitial lung disease[J]. Arthritis Res Ther, 2017, 19(1): 9.

[10] LUO Y B, MASTAGLIA F L. Dermatomyositis, polymyositis and immune-mediated necrotising myopathies[J]. Biochim Biophys Acta, 2015, 1852(4): 622-632.

[11] TANSLEY S, GUNAWARDENA H. The evolving spectrum of polymyositis and dermatomyositis—moving towards clinicoserological syndromes: a critical review[J]. Clin Rev Allergy Immunol, 2014, 47(3): 264-273.

[12] FINDLAY A R, GOYAL N A, MOZAFFAR T. An overview of polymyositis and dermatomyositis[J]. Muscle Nerve, 2015,51(5): 638-656.

[13] YIN L, GE Y, YANG H, et al. The clinical utility of serum IL-35 in patients with polymyositis and dermatomyositis[J]. Clin Rheumatol, 2016, 35(11): 2715-2721.

[14] 尹西, 蒲傳強(qiáng). 白細(xì)胞介素在多發(fā)性肌炎和皮肌炎發(fā)病中的作用[J]. 國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志, 2016, 43(2): 168-171.

[15] GONO T, KANEKO H, KAWAGUCHI Y, et al. Cytokine profiles in polymyositis and dermatomyositis complicated by rapidly progressive or chronic interstitial lung disease[J].Rheumatology, 2014, 53(12): 2196-2203.

[16] HALLOWELL R W, ASCHERMAN D P, DANOFF S K.Pulmonary manifestations of polymyositis/dermatomyositis[C]//Seminars in respiratory and critical care medicine. Thieme Medical Publishers, 2014, 35(2): 239-248.

[17] 陳向芳, 余裕民, 沈繼龍,等. 多發(fā)性肌炎/皮肌炎患者糖皮質(zhì)激素治療前后其受體的改變及意義[J]. 現(xiàn)代免疫學(xué),2001(5):276-278.

[18] MURO Y, NAKASHIMA R, HOSONO Y, et al. Brief Report: autoantibodies to DNA mismatch repair enzymes in polymyositis/dermatomyositis and other autoimmune diseases:a possible marker of favorable prognosis[J]. Arthritis Rheum,2014, 66(12): 3457-3462.