結(jié)核分枝桿菌耐藥基因芯片檢測在結(jié)核性腦膜炎中的應(yīng)用

張廷娟

結(jié)核性腦膜炎（Tuberculous meningitis，TBM）是由結(jié)核分枝桿菌引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，損傷腦膜﹑大腦實(shí)質(zhì)﹑脊髓及脊膜，進(jìn)而引發(fā)頭痛﹑嘔吐﹑視乳頭水腫等癥狀，嚴(yán)重者可導(dǎo)致肢體殘疾，甚至死亡[1]。結(jié)核性腦膜炎治療的關(guān)鍵在于早期確診。而現(xiàn)階段臨床常用的ELISA檢測，其早期檢出率不足20%，且操作繁瑣，時(shí)間較長，延誤了疾病的最佳治療時(shí)機(jī)，已不能滿足臨床的需求[2]。我院采用結(jié)核分枝桿菌耐藥基因芯片和ELISA檢測腦脊液在診斷結(jié)核性腦膜炎患者中進(jìn)行對比，旨在為結(jié)核分枝桿菌耐藥基因芯片檢測在結(jié)核性腦膜炎診斷中應(yīng)用和推廣提供數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以我院2015年9月—2017年9月診治的結(jié)核性腦膜炎疑似病例139例為研究對象，采用隨機(jī)數(shù)字表將其分為觀察組和對照組：（1）觀察組（70例）：男42例，女28例；平均年齡（36.2±3.8）歲；（2）對照組（69例）：男43例，女26例；平均年齡（36.5±4.2）歲。所有研究對象均有明顯的發(fā)熱﹑頭痛﹑嘔吐及腦膜刺激征表現(xiàn)，以結(jié)核性腦膜炎疑似病例收治；病例病程均小于14 d[3]；所有病例均符合《研究知情同意原則》和醫(yī)學(xué)倫理學(xué)原則[4]。就其一般資料進(jìn)行組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 對照組檢測 對照組：采用ELISA法進(jìn)行檢測，各項(xiàng)操作均按臨床常規(guī)操作進(jìn)行。

1.2.2 觀察組檢測 觀察組：采用結(jié)核分枝桿菌耐藥基因芯片法檢測（應(yīng)用亞能生物技術(shù)深圳有限公司試劑盒及配套試劑）。檢測包括腦脊液處理﹑核酸提取﹑PCR擴(kuò)增﹑芯片雜交﹑芯片掃描和檢測結(jié)果判讀等環(huán)節(jié)，具體操作均按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 觀察項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)

（1）陽性率：分別統(tǒng)計(jì)兩組陽性病例數(shù)，陽性率=陽性病例數(shù)/研究病例數(shù)×100%[5]；（2）準(zhǔn)確性：所有研究對象均行PCR檢測，并以檢測結(jié)果作為分組研究準(zhǔn)確性的判定標(biāo)準(zhǔn)，評定結(jié)果一致病例為準(zhǔn)確，不一致病例為錯誤。準(zhǔn)確率=準(zhǔn)確病例/研究病例×100%。準(zhǔn)確率越高，準(zhǔn)確性越高[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

采用SAS 22.1統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（±s）表示，采用 t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；當(dāng)P＜0.05時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 陽性率

觀察組陽性病例13例，陽性率為18.6%，對照組陽性病例12例，陽性率為17.4%，觀察組高于對照組（χ2=0.046，P＞0.05）。

2.2 準(zhǔn)確性

兩組準(zhǔn)確率分別為95.7%和85.5%，觀察組高于對照組（P＜0.05），即觀察組的準(zhǔn)確性高于對照組。具體數(shù)據(jù)如表1。

表1 兩研究組診斷準(zhǔn)確性比較表（%）

3 討論

結(jié)核性腦膜炎的發(fā)病率占結(jié)核病的7%～10%，已成為臨床常見的結(jié)核疾病，加之其較高的致殘和死亡率，使得結(jié)核性腦膜炎診斷和治療的研究成為臨床研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。但因結(jié)核性腦膜炎的臨床表現(xiàn)復(fù)雜﹑不典型，早期影像學(xué)檢查無特異性改變，而賴以診斷顱內(nèi)感染的腦脊液生化﹑細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果往往與其它類型顱內(nèi)感染有所重疊，進(jìn)而導(dǎo)致其早期確診率僅為10%。因此對結(jié)核性腦膜炎診斷方法及價(jià)值的研究，對結(jié)核性腦膜炎的診治及患者的預(yù)后均具有重要的價(jià)值。

結(jié)核分枝桿菌耐藥基因芯片檢測技術(shù)以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和反向點(diǎn)雜交（RDB）相結(jié)合的基因芯片技術(shù)為基礎(chǔ)。將各種耐藥基因探針固定在芯片上，隨后與待檢測樣本的DNA或RNA進(jìn)行雜交，通過檢測各個(gè)探針分子的雜交信號強(qiáng)度獲取樣品分子的序列信息和數(shù)量。因芯片上含有大量基因探針，可以迅速獲取結(jié)核菌株對常用多種抗癆藥物的藥敏結(jié)果[7]。因此結(jié)核分枝桿菌耐藥基因芯片檢測技術(shù)用于結(jié)核性疾病的診斷及藥物耐受度的檢測中具有重要的價(jià)值[8]。

研究結(jié)果顯示，結(jié)核分枝桿菌耐藥基因芯片檢測組的準(zhǔn)確率高于ELISA檢測組，從而為結(jié)核分枝桿菌耐藥基因芯片檢測的臨床應(yīng)用提供了支持。研究采取了文獻(xiàn)循證﹑病例篩選﹑隨機(jī)分組﹑統(tǒng)計(jì)學(xué)分析等措施，確保了研究的科學(xué)性和數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，因此研究數(shù)據(jù)及結(jié)論真實(shí)有效。

綜上，結(jié)核分枝桿菌耐藥基因芯片檢測用于結(jié)核性腦膜炎診斷具有準(zhǔn)確性高，依從性高，快捷簡便等優(yōu)勢。

[1] 陳小可，周一平，高秋霞，等． 結(jié)核桿菌耐藥基因芯片在結(jié)核性胸膜炎中的應(yīng)用[J]． 臨床肺科雜志，2014，19（7）：1282-1285．

[2] 甘靖，葉少林，羅蓉，等． 近10年國內(nèi)外兒童結(jié)核性腦膜炎研究論文的可視化研究[J]． 中國當(dāng)代兒科雜志，2016，18（5）：415-420．

[3] 呂燕華，王海英，莊嚴(yán)，等． 結(jié)核性與化膿性腦膜炎患者血漿及腦脊液生化指標(biāo)檢測結(jié)果對照研究[J]． 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2017，27（7）：1483-1486．

[4] 胡曉紅，向啟云，韓宇，等． 基因芯片技術(shù)在宜昌地區(qū)結(jié)核分枝桿菌耐藥情況監(jiān)測中的應(yīng)用[J]． 中國病原生物學(xué)雜志，2015，28（4）：351-354．

[5] 李自超，葛朝明，蔡宏斌，等． 耐藥性結(jié)核性腦膜炎研究進(jìn)展[J]．現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2016，16（31）：6192-6196，6161．

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[7] 李曉非，梁桂亮，普冬，等． 基因芯片技術(shù)在分枝桿菌菌種鑒定和結(jié)核耐藥性檢測中的應(yīng)用及評價(jià)[J]． 中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2015，（2）：204-207．

[8] 黃海濱，張海晴，劉成永，等． 基因芯片技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌對利福平和異煙肼耐藥水平和katG、inhA、oxyR-ahpC以及rpoB基因突變位置的關(guān)聯(lián)性分析[J]． 北京醫(yī)學(xué)，2016，52（11）：1247-1249．