硒化銀量子點的制備及生物應(yīng)用

王珊珊，王玥，李金華

（長春理工大學(xué) 理學(xué)院，長春 130022）

近年來，越來越多的研究結(jié)果表明，近紅外量子點作為一種新型的納米熒光探針在生物檢測方面具有十分明顯的優(yōu)勢［1-3］。這主要是由于近紅外波段作為“第二生物窗口”（700-900nm），具有的背景干擾小、穿透深度大等特點。這就使得近紅外量子點因其能克服可見光量子點進行深層組織成像時易受干擾的缺陷等，在生物成像應(yīng)用中更具優(yōu)勢［4］。并且，隨著生物成像領(lǐng)域研究的快速發(fā)展，越來越多的近紅外量子點被廣泛用于生物大分子和細(xì)胞標(biāo)記［5、6］、組織和活體細(xì)胞成像［7、8］、腫瘤模型定位［9-11］、臨床診斷［12］等多個領(lǐng)域并取得了突破性的進展。但是，目前所涉及到的近紅外量子點多為合金量子點，如 CdSeS、CdHgTe、CdSexTe1-x等。這類合金量子點的弊端在于量子點本身含有重金屬Cd，從而使得其在生物領(lǐng)域的應(yīng)用存在一定局限性［13］。因此，尋找一種近紅外無鎘熒光量子點以此來擴充近紅外量子點在生物標(biāo)記領(lǐng)域的應(yīng)用是十分必要的。

硒化銀（Ag2Se）作為一種新型的近紅外二元含銀量子點，因其低毒性、尺寸小且具有優(yōu)異的近紅外光學(xué)特性等優(yōu)勢而越來越被廣大科研工作者所重視。這種量子點的出現(xiàn)，是對合金量子點在生物領(lǐng)域存在局限性的一種有利補充。一方面，它彌補了含重金屬元素（鎘或鉛）量子點對環(huán)境和生物體系毒性較大的問題，可以有效地降低量子點的生物毒性。另一方面，由于其本身為近紅外波段量子點，可以很好的與生物組織本身的自發(fā)熒光相區(qū)分，提高細(xì)胞分辨能力，且具有較深的穿透深度，能有更好的進行生物應(yīng)用。2004年，Guo等［14］利用室溫轉(zhuǎn)化法，分別以乙二胺與氨水做模板合成了硒化銀量子點，并對合成的硒化銀樣品進行了X-射線衍射分析，并在透射電子顯微鏡下研究了模板對合成硒化銀形態(tài)的影響。2012年，Cui等［15］利用油相合成法實現(xiàn)了對Ag2Se量子點的制備并對其進行電化學(xué)測試，實驗結(jié)果表明Ag2Se量子點與K2S2O8為共反應(yīng)物作為陰極發(fā)射極在GCE材質(zhì)上具有十分優(yōu)異的電化學(xué)特性。2016年，Shi等［16］分別利用 TOP-Se以及ODE-Se作為Se源，使用高溫油相合制備出了量子產(chǎn)率為23.4%的高質(zhì)量Ag2Se量子點，并通過改變反應(yīng)時間實現(xiàn)了對量子點尺寸以及發(fā)射峰值的調(diào)控。上述結(jié)果表明，Ag2Se作為一種全新的近紅外熒光量子點已經(jīng)越來越被人們所重視。但是，人們在對其進行研究過程中卻往往忽視了制備過程中Ag與Se的配比對所制備的Ag2Se量子點所帶來的影響。因此，開展對Ag2Se量子點的制備并對Ag：Se比例給Ag2Se量子點所帶來的諸如尺寸、穩(wěn)定性、光學(xué)特性等因此帶來的影響并尋找出Ag：Se比例的最優(yōu)解是亟待進行的。

基于上述原因及情況介紹，本文通過高溫油相合成法實現(xiàn)對Ag2Se量子點進行制備，通過改變Ag∶Se比獲得不同尺寸的Ag2Se量子點，并對所制備的量子點從光學(xué)特性及結(jié)構(gòu)特性方面進行對比分析，以此尋找制備該種量子點的最佳Ag∶Se比。此后，利用DSPE-PEG對量子點進行親水修飾使其具備親水性，并對修飾后的量子點進行物化特性表征分析，以此驗證將Ag2Se應(yīng)用于生物標(biāo)記領(lǐng)域的可行性，為這種量子點在生物領(lǐng)域的應(yīng)用提供可靠依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

硒粉（Se，＞99%），醋酸銀（AgAc，99.99%），十二烷基硫醇（DT，98%），三正辛基磷（TOP，90%）；上述藥品均購自Alfa公司，二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇（DSPE-PEG，＞99%），十八烷烯（ODE，90%），牛血清蛋白（BSA，≥98%）上述藥品均購自Sigma公司，葉酸（FA，≥98%）購自TCI公司，乙醇購自長春昊迪化學(xué)儀器有限公司，實驗所需蒸餾水為實驗室自制。

透射電子顯微鏡，高精度電子天平，離心機，紫外可見近紅外分光光度計，熒光光度計，酶標(biāo)儀，瞬態(tài)光譜儀，X射線衍射儀，膠體粒度粒徑分析儀，磁力攪拌器，傅里葉變換紅外光譜儀，熒光倒置顯微鏡，CO2培養(yǎng)箱等。

1.2 實驗過程

將總摩爾質(zhì)量為1mmol硒粉（Se）與10ml的三正辛基磷（TOP）常溫攪拌30min，得到硒源。取0.2 mmol醋酸銀（AgAc）和1.61mmol十二烷基硫醇（DT），加入5mL十八烷烯（ODE）在165℃度下隔絕空氣攪拌30min。取1ml硒源加入5mL十八烷烯（ODE）在110度下反應(yīng)30min得到Ag2Se量子點將溶液移至離心管中以6800轉(zhuǎn)離心10min，移去上清液，重復(fù)上述步驟離心3-4次確保雜質(zhì)的完全剔除，最后將得到的Ag2Se量子點溶于氯仿中，保存留作后續(xù)表征和應(yīng)用。不同比例Ag2Se量子點實物圖如圖1所示。

圖1 不同Ag∶Se比Ag2Se實物圖

2 油性Ag2Se量子點物理表征

2.1 油性Ag2Se量子點的透射電鏡表征

透射電子顯微鏡（TEM）是觀察納米材料形貌特征的一種必不可少的手段。如圖2所示a、b、c、d為Ag∶Se為不同比例時所制備的油性Ag2Se量子點。由圖可以看出，不同Ag∶Se摩爾比（1∶1、2∶1、3∶1、4∶1）所制備的Ag2Se量子點均成點狀分布，粒徑分布均勻，分散度較好。不同Ag：Se比所制備的Ag2Se量子點的平均粒徑分別為（a）3.79nm、（b）3.81nm、（c）4.40nm、（d）5.28nm。并且隨著Ag：Se比例的增加，Ag2Se量子點的平均粒徑也相應(yīng)增加。

圖2 不同Ag∶Se比Ag2Se量子點TEM圖

2.2 Ag2Se量子點的吸收特性研究

通過對紫外-可見-近紅外分光光度計能夠?qū)Σ牧衔展庾V進行測定。因此我們對不同Ag∶Se所制備的Ag2Se量子點進行了相應(yīng)吸收光譜測定，測試結(jié)果如圖3所示。通過對吸收光譜的分析可以發(fā)現(xiàn)，在Ag∶Se為1∶1時所制備的Ag2Se量子點在690nm處有較強吸收峰，并且隨著Ag∶Se比值的增大，量子點吸收峰會發(fā)生相應(yīng)“紅移”，且吸收強度逐漸在減弱。針對這一“紅移”現(xiàn)象，可以有如下解釋。

圖3 不同Ag∶Se比Ag2Se量子點吸收光譜圖（1∶1，2∶1，3∶1，4∶1）

通過改變Ag與Se的配比制備Ag2Se量子點，根據(jù)Kayanuma理論對電子空穴相關(guān)性解釋并結(jié)合Brus公式發(fā)現(xiàn)，量子點的尺寸主要依賴于量子點帶隙能量的變化公式可表示為：

其中Eg(qd)為量子點的帶隙能量，Ebulk為半導(dǎo)體的帶隙能量，R為量子點的粒徑，m?e為受激電子的有效質(zhì)量，m?h為激發(fā)電子的有效質(zhì)量，h為普朗克常量，e為電子電荷，ε0為真空介電常數(shù)，εr為相對介電常數(shù)，E?Ry為里德伯能量在公式（1）中，第一項代表了未合成量子點時材料的帶隙能量，第二項為量子點限域能，控制量子點發(fā)生相應(yīng)的藍移。第三項為電子-空穴對的庫倫作用能，控制量子點的紅移。通過Brus公式可知，這是由于當(dāng)量子點體相半徑比激子波爾半徑小時，量子封閉性控制了空穴及電子的活動，當(dāng)量子點的尺寸R逐漸增大時，庫倫作用能減小的速度要遠遠慢于限域作用能減小速度，這時庫倫作用能將會成為主項。從而使吸收峰向長波長方向運動，帶隙減小，發(fā)生紅移。并且圖3結(jié)果表明，所制備的Ag2Se量子點在Ag∶Se為1∶1時吸收峰更為明顯，由于其他配比所制備的Ag2Se量子點。

2.3 Ag2Se量子點的熒光發(fā)射特性研究

量子點價帶上的電子就會發(fā)生躍遷，運動到導(dǎo)帶空穴之中，隨后再次從導(dǎo)帶重新向價帶躍遷，并在躍遷過程中發(fā)射出光子，從而產(chǎn)生熒光發(fā)射光譜。不同比例Ag2Se量子點熒光光譜如圖4所示，通過對熒光光譜測試結(jié)果對比分析可以發(fā)現(xiàn)，Ag∶Se為1∶1時所制備的Ag2Se量子點熒光光譜峰值為775nm。隨著Ag∶Se的改變，熒光光譜峰值分別紅移至800nm、835nm及845nm。這主要是由于，隨著Ag：Se比值的增大，納米晶體中銀離子含量增加，從而導(dǎo)致的量子點尺寸增加，導(dǎo)致帶隙寬度逐漸變小，電子躍遷所需能量減小，因此熒光光譜峰值發(fā)生紅移。且相比其他比例的Ag2Se量子點可以看出Ag∶Se比例為1∶1所制備出的量子點熒光強度要更強于其他比例。

圖4 不同Ag∶Se比Ag2Se量子點熒光光譜圖（1∶1，2∶1，3∶1，4∶1）

2.4 Ag2Se量子點的光學(xué)穩(wěn)定性研究

如圖5所示為連續(xù)6小時紫外光輻照所測得的熒光光譜，隨著4種不同配比的硒化銀（Ag2Se）量子點在紫外光照射下時間增加，材料光學(xué)強度變化較為明顯。在0～2小時之間Ag∶Se=1∶1相對穩(wěn)定，Ag∶Se=2∶1衰減幅度較大。在3～6小時之間Ag∶Se=1∶1、Ag：Se=2∶1、Ag：Se=3∶1、Ag∶Se=4∶1光學(xué)強度均下降至0。經(jīng)綜合考慮，0～2小時Ag∶Se=1∶1的Ag2Se量子點具有較高的光穩(wěn)定性，相較于其他比例的Ag2Se量子點更具有優(yōu)勢。

因此，綜合不同比例油性Ag2Se量子點TEM、熒光發(fā)射光譜、吸收光譜、光學(xué)穩(wěn)定性等測試結(jié)果對比發(fā)現(xiàn)，Ag∶Se=1∶1的Ag2Se量子點分布較為均勻，分散性較好，熒光發(fā)射特性較好，光學(xué)性質(zhì)最為穩(wěn)定。因此，選擇Ag∶Se摩爾比為1∶1的Ag2Se量子點進行表面修飾并進行生物細(xì)胞實驗。

圖5 不同Ag∶Se比Ag2Se量子點光學(xué)穩(wěn)定圖（1∶1，2∶1，3∶1，4∶1）

3 （DSPE-PEG）Ag2Se量子點物理表征

3.1 DSPE-PEG對油相Ag2Se量子點的表面修飾

為了實現(xiàn)該種量子點在生物體內(nèi)的進一步應(yīng)用，對所制備的油相Ag2Se量子點進行親水修飾是必不可少的。由文中第二部分介紹可以得出，Ag∶Se為1∶1是所獲得的油相Ag2Se量子點具有更為優(yōu)異的光學(xué)特性。因此，該部分主要介紹利用DSPE-PEG對Ag∶Se為1∶1的Ag2Se量子點進行親水性修飾及相應(yīng)測試表征。

實驗步驟：

將8mg/ml的Ag2Se量子點溶于1ml氯仿中和8mg/ml DSPE-PEG溶于4ml氯仿中，混合在試劑瓶中，攪拌約10min。使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在30°C時將混合溶液揮發(fā)，得到干燥的沉淀物。溶于1.6ml去離子水，并通過0.45μm的濾膜過濾，最后得到DSPE-PEG修飾的Ag2Se量子點，保存于室溫中。油性Ag2Se量子點與（DSPE-PEG）Ag2Se量子點實物圖如圖6所示

3.2 （DSPE-PEG）Ag2Se量子點的透射電鏡表征

透射電鏡是觀察納米材料形貌特征以及尺寸分布的一種必不可少的手段。如圖7所示給出了轉(zhuǎn)水后量子點的TEM測試結(jié)果。測試結(jié)果表明，DSPE-PEG修飾后Ag2Se量子點平均粒徑為95nm，量子點聚集成團，成功“嵌套”入DSPE-PEG內(nèi)部且分布均勻。高倍率下電鏡結(jié)果表明量子點在DSPE-PEG內(nèi)部分散度良好，呈點狀分布，量子點尺寸仍保持在4nm左右。證明以成功利用DSPE-PEG對Ag2Se進行親水修飾。

圖7 （DSPE-PEG）Ag2Se量子點TEM圖

3.3 （DSPE-PEG）Ag2Se量子點的吸收特性研究

利用紫外-可見近紅外分光光度計對修飾前后的Ag2Se量子點進行了吸收光譜的測試，測試范圍選為400～900nm，得到了如圖8所示的吸收光譜圖。

圖8 Ag2Se量子點與（DSPE-PEG）Ag2Se量子點吸收光譜

通過光譜圖可以發(fā)現(xiàn)，修飾后的量子點較之修飾前的量子點發(fā)生了相應(yīng)的紅移，且吸收強度相應(yīng)減弱。而引起這種紅移的可能性有兩點：（1）當(dāng)DSPE-PEG對Ag2Se量子點進行表面修飾時，改變了Ag2Se量子點表面的電荷分布情況，從而導(dǎo)致了量子點發(fā)生“紅移”。（2）當(dāng)DSPE-PEG對Ag2Se量子點以“嵌套”方式進行修飾時，量子點整體尺寸由于“嵌套”發(fā)生團聚而增大，結(jié)合公式（1）來看，發(fā)生了一定“紅移”。

3.4 DSPE-PEG修飾前后Ag2Se量子點的熒光發(fā)射特性研究

轉(zhuǎn)水后Ag2Se量子點熒光光譜測試結(jié)果如圖9所示。由測試結(jié)果可以看出，轉(zhuǎn)水后量子點的熒光光譜在峰值方面發(fā)生了一定“紅移”，峰值從780nm“紅移”至800nm。這種現(xiàn)象可以通過DSPE-PEG修飾前后Ag2Se量子點的熒光發(fā)射特性并結(jié)合Brus公式對其進行解釋。當(dāng)量子點體相半徑比激子波爾半徑小時，量子封閉性控制了空穴及電子的活動，隨著量子點的尺寸R逐漸增大，庫倫作用能減小的速度要遠遠慢于限域作用能減小速度，這時庫倫作用能將會成為主項。DSPE-PEG修飾后的Ag2Se量子點，粒徑增大從而使吸收峰向長波長方向運動，帶隙減小，發(fā)生“紅移”。而吸收峰的紅移也導(dǎo)致了量子點對應(yīng)的熒光光譜也發(fā)生相應(yīng)“紅移”。

圖9 Ag2Se量子點與（DSPE-PEG）Ag2Se量子點熒光光譜圖

3.5 （DSPE-PEG）Ag2Se量子點光學(xué)穩(wěn)定性研究

光學(xué)穩(wěn)定性是評價量子點是否具備良好光穩(wěn)定性及抗光漂白性的重要參數(shù)之一。通過利用紫外光對量子點進行一定時間的連續(xù)照射并進行熒光光譜強度測試就可以很好的確定材料所具備的光學(xué)穩(wěn)定性是否符合生物應(yīng)用。如圖10所示，給出了轉(zhuǎn)水后Ag2Se量子點的光學(xué)穩(wěn)定性測試結(jié)果。測試結(jié)果表明，隨著轉(zhuǎn)水后的Ag2Se量子點在紫外光照射時間的增加，在0～3小時內(nèi)材料熒光強度下降約25%，發(fā)生了一定的光漂白效應(yīng)，而3～6小時材料熒光強度則趨于平穩(wěn)。整體測試結(jié)果表明，在經(jīng)過6h的紫外光照射后，量子點熒光強度下降較小，證明轉(zhuǎn)水后的Ag2Se量子點具有良好的光學(xué)穩(wěn)定性，能夠很好的應(yīng)用于生物領(lǐng)域。

圖10 （DSPE-PEG）Ag2Se量子點光學(xué)穩(wěn)圖

3.6 （DSPE-PEG）Ag2Se量子點的動態(tài)光散射粒徑分析

動態(tài)光散射（DLS）測試分析主要是利用粒子所做的布朗運動，結(jié)合運動時所引起的光強變化，再輔以光強相關(guān)函數(shù)以此來計算出樣品粒徑的一種技術(shù)手段。運用這種測量手段，可以對轉(zhuǎn)水后的量子點進行粒徑分布的檢測。測試結(jié)果如圖11所示，轉(zhuǎn)水后的量子點整體粒徑由4nm變?yōu)?00nm。這種粒徑測試結(jié)果的主要原因是由于量子點是以“嵌套”方式進入DSPE-PEG當(dāng)中，多個量子點發(fā)生大量團聚所導(dǎo)致的。

圖11 （DSPE-PEG）Ag2Se量子點粒徑分布圖

4 Ag2Se量子點的生物細(xì)胞實驗

4.1 DSPE-PEG修飾后Ag2Se量子點的膠體穩(wěn)定性測試

膠體穩(wěn)定性是評價量子點作為生物應(yīng)用中的作為光學(xué)探針和生物成像的評價參數(shù)。通過膠體穩(wěn)定性的測試可以更為直觀的反映出材料在某一特定體系下的粒徑變化情況。因此，本文對（DSPE-PEG）Ag2Se量子點在37°C，pH=7.2的水環(huán)境下進行了75h的膠體穩(wěn)定性測試。通過對其粒徑變化結(jié)果進行整理分析，得到了這種材料的膠體穩(wěn)定性結(jié)果。測試結(jié)果如圖12所示，由圖中可以看出，DSPE-PEG修飾的Ag2Se量子點在75h的測試過程中，粒徑大小變化相對穩(wěn)定，除最開始的10-20h期間出現(xiàn)少量團聚致使材料粒徑從95nm增長至125nm意外，剩余時間材料尺寸均保持在125±2nm左右，并未出現(xiàn)大面積團聚和降解的過程，證明轉(zhuǎn)水后的量子點具有較高的膠體穩(wěn)定性，可以進行生物應(yīng)用。

圖12 （DSPE-PEG）Ag2Se量子點膠體穩(wěn)定性圖

4.2 （DSPE-PEG）Ag2Se量子點在MCF-7細(xì)胞中的細(xì)胞毒性測試

量子點的毒性研究在過去的十幾年中被廣泛應(yīng)用，以此來測試量子點對生物體的影響。這里，量子點的毒性測試選用MTT（3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyltetrazolium bromide，3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，購于sigma公司）比色分析法。MTT是一種易被水溶解和透過細(xì)胞膜而進入細(xì)胞內(nèi)，可被活細(xì)胞內(nèi)的琥珀酸脫氫酶還原，形成不溶于水的藍紫色結(jié)晶的常用細(xì)胞染色物質(zhì)。且該物質(zhì)不與死細(xì)胞發(fā)生作用，由于結(jié)晶物形成的量與細(xì)胞數(shù)量及代謝活性成比例，因此吸光度（A）值的大小可反映細(xì)胞的數(shù)量及活性。利用MTT比色法具有特異性強、靈敏度高、快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好等優(yōu)勢。是一種目前在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域最為常見的細(xì)胞毒性測量手段。

細(xì)胞毒性的檢測采用MTT比色分析法，首先將MCF-7細(xì)胞保存于10%胎牛血清的培養(yǎng)基中，細(xì)胞在經(jīng)過計數(shù)以后將其存放在96孔板中，且每孔細(xì)胞數(shù)大約在10000左右。在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h，培養(yǎng)環(huán)境為37oC、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的飽和濕度，并使其貼壁生長。

隨后，分別將200μL的細(xì)胞和20μL不同濃度的（DSPE-PEG）Ag2Se量子點溶液，加入96孔板中。所選量子點濃度分別為0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL。將這幾種加入不同濃度量子點的細(xì)胞培育時間設(shè)定為24小時和48小時。待培養(yǎng)完成后，使用酶標(biāo)儀對樣品進行檢測并對所得數(shù)據(jù)進行整理分析，測試結(jié)果如圖13所示。

圖13 （DSPE-PEG）Ag2Se量子點

如圖13所示結(jié)果可以看出，MCF-7細(xì)胞在加注裁量并分別進行24小時和48小時培養(yǎng)后，隨著量子點溶液濃度的升高細(xì)胞活性呈現(xiàn)下降的趨勢。其中，在材料濃度為0.5mg/mL及以下時，細(xì)胞活性在24、48h內(nèi)均保持在80%以上。而材料濃度增加為2mg/mL時，細(xì)胞活性仍維持在75%。證明轉(zhuǎn)水后的Ag2Se量子點具有良好的生物兼容性和較低的生物毒性。適合應(yīng)用于生物領(lǐng)域作為熒光標(biāo)記物對生物體進行熒光標(biāo)記。

5 結(jié)論

本論文通過油相合成法對近紅外熒光量子點硒化銀（Ag2Se）進行制備，通過改變反應(yīng)中Ag、Se配比的方式，獲得了熒光光譜范圍在780-840nm的不同尺寸的Ag2Se量子點并對其進行相應(yīng)物理表征。通過對表征結(jié)果進行對比分析，發(fā)現(xiàn)Ag：Se為1：1時所制得的Ag2Se熒光強度更為優(yōu)異的同時具有良好的光學(xué)穩(wěn)定性。隨后，利用DSPE-PEG對Ag2Se量子點進行表面修飾，使其具有親水性并對其進行相應(yīng)穩(wěn)定性測試。測試結(jié)果表明，轉(zhuǎn)水后的量子點穩(wěn)定性良好。而后的生物毒性24、48h測試結(jié)果結(jié)果表明，該種量子點的生物毒性較低，細(xì)胞活性經(jīng)48h培養(yǎng)均保持在75%以上，證明此種量子點具有良好的生物兼容性。綜上所述，Ag2Se量子點作為一種新型近紅外熒光量子點，將其應(yīng)用于生物領(lǐng)域進行生物熒光標(biāo)記是切實可行的。本論文的實驗結(jié)果將對這種材料在生物領(lǐng)域的應(yīng)用提供可靠的實驗依據(jù)。

［1］楊秋花.功能化量子點探針的制備及在疾病診斷中的應(yīng)用［D］.天津：天津大學(xué)，2012.

［2］關(guān)麗云.量子點熒光探針細(xì)胞標(biāo)記的研究［D］.武漢：華中科技大學(xué)，2012.

［3］韓四海.量子點熒光探針的制備及其在細(xì)胞和活體成像中的應(yīng)用［D］.杭州：浙江大學(xué)，2012.

［4］崔思思，陳海燕，胡育筑，顧月清.近紅外量子點在體內(nèi)分析中的應(yīng)用［J］藥學(xué)進展，2009，32（01）：18-23.

［5］董微.量子點的制備及在生物標(biāo)記中的應(yīng)用［D］.沈陽：東北大學(xué)，2009.

［6］武洪燕.綠色熒光碳點的合成及其在細(xì)胞標(biāo)記和分析化學(xué)中的應(yīng)用［D］.沈陽：東北大學(xué)，2012.

［7］王樂，錢銀鋒，余永強.量子點在臨床相關(guān)研究中的應(yīng)用［J］.中國介入影像與治療學(xué)，2010，7（01）：74-77.

［8］朱淼鑫，姚明.小動物活體成像技術(shù)的應(yīng)用［J］中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2011，21（03）：1-5.

［9］楊麗華，沈星凱，符丹，余玉春，趙淵，龔朝輝.小動物活體成像技術(shù)在腫瘤研究中的應(yīng)用［J］寧波大學(xué)學(xué)報（理工版），2013，26（04）：115-118.

［10］林咨含.近紅外量子點在生物醫(yī)學(xué)分析與生物成像方面的應(yīng)用研究［D］.長春：吉林大學(xué)，2015.

［11］黃宇華.量子點熒光標(biāo)記技術(shù)在人舌鱗癌的荷瘤裸鼠模型組織及其臨床組織中檢測特定蛋白的應(yīng)用研究［D］.廣州；南方醫(yī)科大學(xué)，2010.

［12］王樂，錢銀鋒，余永強.量子點在臨床相關(guān)研究中的應(yīng)用［J］中國介入影像與治療學(xué)，2010，7（01）：74-77.

［13］黃鑒.水相體系中CdSe：Ag及ZnSe：Cu摻雜量子點的合成與表征［D］.合肥：合肥工業(yè)大學(xué)，2013.

［14］郭世宜，劉璐，林少田，等.利用室溫轉(zhuǎn)化法合成硒化銀量子點［J］.南開大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2004，37（2）：107-110.

［15］Cui R，Gu Y P，Bao L，et al.Near-infrared electrogenerated chemiluminescence of ultrasmall Ag2Se quantum dots for the detection of dopamine［J］.Analytical Chemistry，2012，84（21）：8932-8935.

［16］Shi L J，Zhu C N，He H，et al.Near-Infrared Ag2Se Quantum Dots with DistinctAbsorption Features and High Fluorescence Quantum Yields［J］.Rsc Advances，2016，6（44）：38183-38186.