陸偉強(qiáng) 高樺楠 劉春勝 王愛民 顧志峰① 林國(guó)堯
(1. 南海海洋資源利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 海南大學(xué)海洋學(xué)院 ???570228;2. 海南省海洋與漁業(yè)科學(xué)院 ???570206)
循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)(Recirculating aquaculture systems,RAS)在中國(guó)沿海各個(gè)養(yǎng)殖地區(qū)受到廣泛的關(guān)注和應(yīng)用(王威等, 2012)。與傳統(tǒng)養(yǎng)殖相比,循環(huán)水養(yǎng)殖具有環(huán)境污染小、養(yǎng)殖生物生長(zhǎng)快速、養(yǎng)殖密度大以及管理方便等優(yōu)點(diǎn)(曲克明等, 2010)。李秋芬等(2011)和羅國(guó)芝等(2016)提出,在整個(gè)循環(huán)水處理系統(tǒng)中,生物過(guò)濾起著核心作用,其中,自養(yǎng)硝化細(xì)菌是主要硝化微生物。目前,培養(yǎng)海水生物膜常用的菌種多為活性污泥或者馴化的淡水硝化菌群(張俊新等, 2008)。載體的材質(zhì)、結(jié)構(gòu)和比表面積等對(duì)生物膜的水體處理效果有顯著的影響(Bower et al, 1982; Lekang et al,2000; Hirai et al, 2001; 王晉等, 2001; 何潔等, 2003;鄭興等, 2015),而評(píng)價(jià)載體的指標(biāo)主要包括表面生物膜形成時(shí)間以及水體的凈化效果(Wang, 2011)。
養(yǎng)殖過(guò)程中水體累積的氨氮、化學(xué)耗氧量(Chemical oxygen demand, COD)和顆粒懸浮物(Suspended solids,SS)等對(duì)養(yǎng)殖生物具有毒害作用,因此,生物膜對(duì)此類物質(zhì)的處理效果尤為關(guān)鍵(楊志強(qiáng)等, 2015; 黃濱等,2016)。而進(jìn)水中的氨氮濃度以及生物濾池中的溶解氧(Dissolved oxygen, DO)濃度會(huì)影響生物膜對(duì)此類物質(zhì)的處理。氨氮濃度過(guò)低時(shí),硝化細(xì)菌受底物抑制,氨氮濃度太高對(duì)硝化細(xì)菌有毒害作用以致硝化不完全(王春英, 2009);異養(yǎng)細(xì)菌與硝化細(xì)菌存在生長(zhǎng)競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系,異養(yǎng)細(xì)菌有利于COD去除,而硝化細(xì)菌有利于氨氮去除,氨氮濃度高時(shí),異養(yǎng)細(xì)菌處于競(jìng)爭(zhēng)劣勢(shì),導(dǎo)致COD清除率降低(朱建新等, 2014);DO濃度過(guò)低,不利于硝化作用,DO濃度過(guò)高也會(huì)抑制硝化作用(李曉莉等, 2009)。
本研究采用水質(zhì)檢測(cè)方法,研究不同氨氮和DO負(fù)荷情況下,多孔珊瑚石作為生物膜載體的生物濾池對(duì)氨氮、COD、SS的綜合處理效果。以確定本實(shí)驗(yàn)生物濾池凈化水體的最適DO濃度,以及其凈化效果最明顯的氨氮濃度范圍。
珊瑚石大小不超過(guò)5 cm×5 cm×5 cm;海水取自海南??谥苓?;養(yǎng)殖廢水為海南大學(xué)海洋學(xué)院貝類實(shí)驗(yàn)室的馬氏珠母貝(Pinctada martensii)養(yǎng)殖廢水。
pH采用pH計(jì)(上海雷磁PHS-3C型)測(cè)定;溫度、鹽度、DO采用多參數(shù)水質(zhì)監(jiān)測(cè)儀(YSI 6600V2型)測(cè)定;氨氮(次溴酸鈉氧化法)、亞硝酸鹽(萘乙二胺分光光度法)、化學(xué)需氧量 COD、顆粒懸浮物 SS測(cè)定均參照GB17378.4-2007海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范第4部分:海水分析方法進(jìn)行(中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局等, 2008)。
養(yǎng)殖池布置:采用長(zhǎng)寬高為1.6 m×1 m× 1 m的水泥池進(jìn)行實(shí)驗(yàn),每3個(gè)為1組,分別為進(jìn)水池、出水池和珊瑚濾池,設(shè)置 3個(gè)重復(fù)(圖 1)。為方便檢測(cè)進(jìn)水、出水水樣,3個(gè)水池不循環(huán),而是進(jìn)水池底部由潛水泵 A泵水至珊瑚濾池底部,珊瑚濾池的水通過(guò)溢流管進(jìn)入出水池。當(dāng)進(jìn)水池中的水被泵完時(shí),停止泵A(氨氮、DO負(fù)荷實(shí)驗(yàn)期間進(jìn)水池水體1600 L,抽干時(shí)間約為16 h,15 h時(shí)停止水泵A),此時(shí),在進(jìn)水池、溢流口各取水樣 200 ml。之后,打開水泵B(3000 L/h)將出水池水體泵回進(jìn)水池,再在進(jìn)水池調(diào)節(jié)所需的氨氮濃度,混勻30 min后再關(guān)閉水泵B,打開水泵A,調(diào)節(jié)水泵A,使水體流速為100 L/h。
珊瑚濾池底部設(shè)置納米管曝氧裝置,鋪設(shè)進(jìn)水管道,珊瑚濾池與出水池之間用溢流管(110 mm PVC水管)連接,溢流口距池頂10 cm。在珊瑚濾池填入珊瑚石至距池底0.8 m高,珊瑚濾池的出水溢流口設(shè)置于距離上表層珊瑚石 10 cm處。珊瑚石加空隙體積為1.28 m3。
生物膜培養(yǎng):根據(jù)朱建新等(2014)和傅雪軍等(2010)的掛膜時(shí)間和溫度,設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)的掛膜時(shí)間為30 d,水溫為25℃~28℃,鹽度為31~33。關(guān)閉水泵A和B,堵住溢流管口(用110 mm PVC水管堵頭封閉),在珊瑚濾池中加滿用氯片消毒24 h的養(yǎng)殖海水(24 h后用硫代硫酸鈉除余氯),此時(shí),珊瑚石和水總體積為1.6 m3,加水量約為0.9 m3,珊瑚石體積約為0.7 m3。充氣保持水體DO為6.5 mg/L,進(jìn)行生物膜培養(yǎng)30 d。待生物膜成熟后,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
氨氮、DO負(fù)荷實(shí)驗(yàn)開始前,關(guān)閉水泵A,進(jìn)水池充滿海水1600 L,出水池充滿海水1600 L,進(jìn)水池和出水池海水通過(guò)水泵B充分混勻,調(diào)節(jié)所需氨氮濃度(進(jìn)水池、出水池底部之間有連通水管,實(shí)驗(yàn)時(shí)關(guān)閉,此時(shí)打開),珊瑚濾池排空?;靹蚝?,打開水泵A (3000 L/h),將進(jìn)水池水體抽入珊瑚濾池至溢流口處,關(guān)閉水泵A;關(guān)閉進(jìn)水池和出水池之間連通的水管,再通過(guò)水泵B將出水池水體抽入進(jìn)水池,至進(jìn)水池水滿,關(guān)閉水泵B,再打開水泵A調(diào)節(jié)水流速度為100 L/h,開始實(shí)驗(yàn)。
圖1 實(shí)驗(yàn)裝置Fig.1 Experimental equipment
1.3.1 氨氮負(fù)荷 通過(guò)添加 NH4Cl調(diào)節(jié)進(jìn)水池水體氨氮濃度,設(shè)置 4組氨氮濃度水平,分別為0.05~0.25 mg/L、0.25~0.45 mg/L、0.45~0.65 mg/L 和0.65~0.85 mg/L。每個(gè)氨氮濃度水平分別測(cè)試6次,每12 h取1次樣,歷時(shí)12 d。DO為6.5~7.5 mg/L,水溫為 25℃~28℃,鹽度為 31~33。分別測(cè)量進(jìn)水池和溢流口的氨氮、COD、SS指標(biāo)。
1.3.2 DO負(fù)荷 通過(guò)調(diào)節(jié)氣泵通氣量大小調(diào)節(jié)珊瑚濾池中DO濃度,設(shè)置4個(gè)DO負(fù)荷水平,分別為1~3 mg/L、3~5 mg/L、5~7 mg/L 和 7 mg/L 以上。每個(gè)水平測(cè)試6次,每12 h取1次樣,歷時(shí)12 d。進(jìn)水氨氮濃度為0.45~0.65 mg/L,水溫為25℃~28℃,鹽度為 31~33。測(cè)量珊瑚濾池 DO、進(jìn)水池和溢流口的氨氮、COD、SS指標(biāo)。
測(cè)量數(shù)據(jù)使用DPS16.05高級(jí)版軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,進(jìn)行多元線性逐步回歸分析。負(fù)荷實(shí)驗(yàn)階段,氨氮負(fù)荷實(shí)驗(yàn)分析 3個(gè)測(cè)量指標(biāo)[進(jìn)水氨氮(x1)、進(jìn)水COD(x2)、進(jìn)水SS(x3)]對(duì)珊瑚濾池3個(gè)指標(biāo)[出水氨氮(y1)、出水 COD(y2)、出水 SS(y3)]的影響,同時(shí)作通徑分析。DO負(fù)荷階段分析3個(gè)測(cè)量指標(biāo)[DO(x1)、進(jìn)水氨氮(x2)、進(jìn)水COD(x3)]對(duì)珊瑚濾池3個(gè)指標(biāo)[出水氨氮(y1)、出水 COD(y2)、出水 SS(y3)]的影響,同時(shí)作通徑分析。
2.1.1 氨氮、COD和SS的清除率 如圖2所示,氨氮負(fù)荷實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示,關(guān)于氨氮清除率,進(jìn)水池氨氮濃度為 0.05~0.25 mg/L時(shí),氨氮平均清除率為54.2%±9.1%;進(jìn)水池氨氮濃度為0.25~0.45 mg/L時(shí),氨氮平均清除率為 72.7%±2.6%;進(jìn)水池氨氮濃度為0.45~ 0.65 mg/L時(shí),氨氮平均清除率為82.1%±3.3%;進(jìn)水池氨氮濃度為0.65~0.85 mg/L時(shí),氨氮平均清除率為78.4%±1.6%,呈先增后減的趨勢(shì)。
關(guān)于 COD清除率,進(jìn)水池氨氮濃度為 0.05~0.25 mg/L時(shí),COD平均清除率為21.9%±3.3%;進(jìn)水池氨氮濃度為 0.25~0.45 mg/L時(shí),COD平均清除率為13.1%±1.6%;進(jìn)水池氨氮濃度為0.45~0.65 mg/L時(shí),COD平均清除率為 7.1%±1.5%;進(jìn)水池氨氮濃度為 0.65~0.85 mg/L時(shí),COD 平均清除率為2.7%±2.0%,呈下降趨勢(shì)。
關(guān)于SS清除率,進(jìn)水池氨氮濃度為0.05~0.25 mg/L時(shí),COD平均清除率為45.9%±3.5%;進(jìn)水池氨氮濃度為0.25~0.45 mg/L時(shí),COD平均清除率為14.3%±12.7%;進(jìn)水池氨氮濃度為0.45~0.65 mg/L時(shí),COD平均清除率為 5.8%±1.6%;進(jìn)水池氨氮濃度為 0.65~0.85 mg/L時(shí),COD平均清除率為5.3%±2.4%,呈下降趨勢(shì)。
圖2 進(jìn)水氨氮濃度對(duì)珊瑚濾池氨氮、COD和SS清除率的影響Fig.2 Effect of the concentration of ammonia nitrogen in inlet water on clearance rate of ammonia nitrogen, COD and SS of the coral pool
2.1.2 進(jìn)水池氨氮對(duì)出水氨氮、COD、SS的多元回歸分析 首先,分析3個(gè)測(cè)量指標(biāo)[進(jìn)水池氨氮(x1)、COD(x2)、進(jìn)水SS(x3)]對(duì)珊瑚濾池出水氨氮(y1)的影響(表1)。進(jìn)水池氨氮與出水氨氮為極顯著的正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)為0.8314,P<0.01),進(jìn)水COD、SS對(duì)出水氨氮影響不顯著。y1=- 0 .0318 + 0 .4013x1,決定系數(shù)R2=0.6913,剩余標(biāo)準(zhǔn)差SSE=0.0724,剩余通徑系數(shù)=0.5556。
再分析 3個(gè)測(cè)量指標(biāo)[進(jìn)水氨氮(x1)、COD(x2)、SS(x3)]對(duì)珊瑚濾池出水COD(y2)的影響(表2)。進(jìn)水氨氮與出水COD為極顯著的正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)為0.9756,P<0.01);進(jìn)水COD與出水COD為極顯著的正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)為 0.9890, P<0.01);進(jìn)水 SS與出水 COD相關(guān)性不顯著。通徑系數(shù)反映自變量對(duì)因變量的直接影響。進(jìn)水COD與出水COD的相關(guān)系數(shù)最大,即進(jìn)水COD對(duì)出水COD的影響最為明顯,且是正相關(guān),直接系數(shù)為0.8509。 y2=-0 .2114 + 0 .6569 x1+ 0 .8500x2,決定系數(shù)R2=0.9839,剩余標(biāo)準(zhǔn)差SSE=0.0061,剩余通徑系數(shù)為0.1269。
表1 進(jìn)水氨氮、COD對(duì)出水氨氮的逐步回歸分析Tab.1 Stepwise regression analysis of ammonia nitrogen in the outlet water and the ammonia nitrogen and COD of the inlet water
最后,分析3個(gè)測(cè)量指標(biāo)[進(jìn)水池氨氮(x1)、COD(x2)、SS(x3)]對(duì)珊瑚濾池出水 SS(y3)的影響(表 3)。進(jìn)水池 SS與出水 SS為極顯著的正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)為0.7317,P<0.01);進(jìn)水氨氮與出水COD相關(guān)不顯著。y3=- 0 .0064 + 0 .8224x3,決定系數(shù) R2=0.6324,剩余標(biāo)準(zhǔn)差SSE=0.0043,剩余通徑系數(shù)為0.6063。
表2 進(jìn)水氨氮、COD、SS對(duì)出水COD的逐步回歸分析Tab.2 Stepwise regression analysis of COD in the outlet water and the ammonia nitrogen, COD and SS in the inlet water
2.2.1 氨氮、COD、SS清除率 如圖3所示,DO負(fù)荷實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示,關(guān)于氨氮清除率,DO濃度為1.0~3.0 mg/L時(shí),氨氮平均清除率為 54.6%±2.6%;DO 濃度為 3.0~5.0 mg/L時(shí),氨氮平均清除率為66.3%±5.4%;DO濃度為5.0~7.0 mg/L時(shí),氨氮平均清除率為78.7%±3.5%;DO濃度大于7.0 mg/L時(shí),氨氮平均清除率為75.0%±2.3%,呈先增后減的趨勢(shì)。
圖3 DO濃度對(duì)珊瑚濾池氨氮、COD和SS清除率的影響Fig.3 Effect of dissolved oxygen concentration on the clearance rate of ammonia nitrogen, COD and SS in the coral pool
關(guān)于COD清除率,DO濃度為1.0~3.0 mg/L時(shí),COD 平均清除率為 1.6%±0.9%;DO 濃度為 3.0~5.0 mg/L時(shí),COD平均清除率為7.8%±2.3%;DO濃度為5.0~7.0 mg/L時(shí),COD平均清除率為23.0%±5.3%;DO濃度大于7.0 mg/L時(shí),COD平均清除率為26.5%±2.7%,呈上升的趨勢(shì)。
關(guān)于SS清除率,DO濃度為1.0~3.0 mg/L時(shí),SS平均清除率為8.0%±2.5%;DO濃度為3.0~5.0 mg/L時(shí),SS平均清除率為21.8%±3.3%;DO濃度為5.0~7.0 mg/L時(shí),SS平均清除率為 7.1%±2.0%;DO濃度大于7.0 mg/L時(shí),SS平均清除率為 2.8%±1.0%,呈先增后減的趨勢(shì)。
2.2.2 DO對(duì)出水氨氮、COD、SS的多元回歸分析
首先,分析 4個(gè)測(cè)量指標(biāo)[DO(x1)、進(jìn)水池氨氮(x2)、COD(x3)、SS(x4)]對(duì)珊瑚濾池出水 SS(y3)的影響(表 4)。DO與出水氨氮為不顯著的負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)為–0.2641,P=0.2124)。 y1= 0 .1951 - 0 .0061x1,決定系數(shù)R2=0.0698,剩余標(biāo)準(zhǔn)差SSE=0.0878,剩余通徑系數(shù)=0.9645。
再分析4個(gè)測(cè)量指標(biāo)[DO(x1)、進(jìn)水池氨氮(x2)、COD(x3)、SS(x4)]對(duì)珊瑚濾池出水 COD(y2)的影響(表5)。DO與出水COD為極顯著的負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)為?0.9340,P<0.01);進(jìn)水COD與出水COD為極顯著的正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)為 0.9715,P<0.01);進(jìn)水 SS與出水 COD 為顯著的負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)為?0.4497,P<0.05)。通徑系數(shù)反映自變量對(duì)因變量的直接影響。進(jìn)水池 COD與出水 COD的相關(guān)系數(shù)最大,即進(jìn)水COD對(duì)出水COD的影響最為明顯,且是正相關(guān),直接系數(shù)為 0.8171。 y2= 0 .7860 - 0 .0979 x1+ 0 .8389x3-11.6454x4,決定系數(shù) R2=0.9621,剩余標(biāo)準(zhǔn)差 SSE=0.0110,剩余通徑系數(shù)為0.1948。
最后,分析 4個(gè)測(cè)量指標(biāo)[DO(x1)、進(jìn)水池氨氮(x2)、COD(x3)、SS(x4)]對(duì)珊瑚濾池出水 SS(y3)的影響(表6)。進(jìn)水SS與出水SS為極顯著的正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)為 0.9178,P<0.01)。 y3=- 0 .0048+ 1 .1081x1,決定系數(shù) R2=0.84231,剩余標(biāo)準(zhǔn)差 SSE=0.0578,剩余通徑系數(shù)為0.3971。
表4 DO、進(jìn)水氨氮、COD、SS對(duì)出水氨氮的逐步回歸分析Tab.4 Stepwise regression analysis of ammonia nitrogen in the outlet water of the DO,ammonia nitrogen, COD and SS in the inlet water
表5 DO、進(jìn)水氨氮、COD、SS對(duì)出水COD的逐步回歸分析Tab.5 Stepwise regression analysis of the COD in the outlet water and the DO, ammonia nitrogen, COD and SS of the inlet water
表6 DO、進(jìn)水池氨氮、COD、SS對(duì)出水SS的逐步回歸分析Tab.6 Stepwise regression analysis of SS in the outlet water and the DO, ammonia nitrogen, COD and SS of the inlet water
多元回歸分析結(jié)果顯示,進(jìn)水池氨氮濃度和DO濃度對(duì)出水氨氮、出水COD均有極顯著的影響,二者對(duì)SS影響不顯著。多元回歸分析不僅可以處理較為復(fù)雜的變量關(guān)系,而且能區(qū)分實(shí)驗(yàn)參數(shù)間相關(guān)性是否為直接影響和間接影響(何潔等, 2003; 李朝霞等,2009; 鄭懷平等, 2009; 王慶恒等, 2009)。建立回歸方程時(shí),保留相關(guān)系數(shù)影響顯著的,剔除不顯著的,以建立理想的回歸方程。鄢朝等(2012)以此方法研究華貴櫛孔扇貝(Mimachlamys nobilis)數(shù)量性狀;王愛民等(2004)對(duì)馬氏珠母貝不同地理種群內(nèi)自繁和種群間雜交子一代形態(tài)性狀參數(shù)進(jìn)行了相關(guān)分析。
氨氮負(fù)荷實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,進(jìn)水氨氮濃度為 0.45~0.65 mg/L時(shí),珊瑚石生物濾池對(duì)水體中氨氮、COD、SS的綜合處理效果最優(yōu)(氨氮平均清除率為 82.1%±3.3%;COD平均清除率為7.1%±1.5%;SS平均清除率為 5.8%±1.6%)。氨氮負(fù)荷影響硝化速率,氨氮濃度過(guò)低時(shí)硝化菌硝化速率不高,氨氮濃度太高對(duì)硝化菌有抑制效應(yīng)。COD和SS的清除率整體較低,所以偏重考慮氨氮清除率的情況,來(lái)判斷水體處理效果的優(yōu)劣。因此,綜合考慮,進(jìn)水氨氮濃度為0.45~0.65 mg/L時(shí),系統(tǒng)對(duì)水體處理效果最優(yōu)。
DO負(fù)荷實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示,DO濃度為5.0~7.0 mg/L時(shí),珊瑚石生物濾池對(duì)水體中氨氮、COD、SS的綜合處理效果最優(yōu)[氨氮平均清除率為78.7%±3.5%;COD平均清除率為23.0%±5.3%;SS平均清除率為7.1%±2.0%)。李曉莉等(2009)在封閉式循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)中也得出,曝氣生物濾池在DO值為7.0 mg/L時(shí),濾池有最大的氨氮去除率。DO濃度低,不利于硝化作用,DO濃度過(guò)高也會(huì)抑制硝化作用。當(dāng)DO濃度超過(guò) 7.0 mg/L,COD清除率升高不明顯。綜合考慮,以珊瑚石為載體的生物處理系統(tǒng)的最優(yōu)DO濃度范圍為 5.0~7.0 mg/L。
綜上所述,本研究環(huán)境下的循環(huán)海水養(yǎng)殖系統(tǒng)珊瑚石生物濾池在氨氮濃度為0.45~0.65 mg/L、DO濃度為 5.0~7.0 mg/L時(shí),對(duì)水體中的氨氮、COD、SS的綜合處理效果最優(yōu)。本研究尚存在不足,不同水流速度、不同溫度、不同鹽度等情況下,系統(tǒng)對(duì)水體的處理效果還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。
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