食品中微生物霉菌和酵母的檢測能力驗證

戴健興 宋偉清 利文亮 鄭海源 馮燕飛

能力驗證：即利用實驗室間比對，按照預先制定的準則評價參加者的能力。測量審核：實驗室對被測物品（材料或制品）進行實際測試，將測試結果與參考值進行比較的活動。通過能力驗證和測量審核能夠評定實驗室從事特定檢測或測量的能力，識別實驗室存在的問題并啟動改進措施，提高實驗室的檢測能力等。因此，參加能力驗證活動對實驗室質量控制有著非常重要的意義。江門市量子高科（中國）生物股份有限公司分析檢測中心從2015年首次參加中國檢驗檢疫科學研究院測試評價中心測量審核項目，2016年開始參加該組織的檢測能力驗證計劃。在這三年中發(fā)現了檢測過程中存在不少問題，現將從中總結的經驗與同行分享，請同行多多指教。

材料

樣品來源：中國檢驗檢疫科學研究院測試評價中心提供的測量審核和檢測能力驗證計劃樣品，樣品為白色凍干粉末。樣品標示分別為：測量審核項目ACAS- 15- （MA- A854，MA15- A158，MA15- A469）；檢測能力驗證計劃：ACAS- PT201（2016）16- F444、16- G790和ACAS- PT336

（2017）17- G889、17- H202。

儀器

霉菌培養(yǎng)箱MJ - 250BSH- III：28℃±1℃、生化培養(yǎng)箱SPX- 250BS-Ⅱ：28℃±1℃、電子天平J J 2000：感量0.1g、數顯恒溫水浴鍋HH-8：46℃±1℃、生物顯微鏡 XSP- 2CA：10×～100×。

試劑

孟加拉紅培養(yǎng)基（虎紅瓊脂），生產商：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司

檢測方法

GB4789.15- 2010《食品微生物學檢驗 霉菌和酵母計數》、GB 4789.15- 2016《食品微生物學檢驗 霉菌和酵母計數》、相關的測量審核作業(yè)指導書和參試指導書。

操作步驟

（1）按照測量審核作業(yè)指導書和參試指導書的要求進行樣品水化。從冰箱取出待測樣品應使其達到室溫方可開啟使用。首先無菌開啟西林瓶，立即加入4 mL生理鹽水進行再水化，待溶解后，吸出放入無菌瓶中，再反復用余下的稀釋液清洗西林瓶內壁，回收清洗液放入上述無菌瓶中，合計40 mL。此溶液即是待測樣品原液。

（2）在凈化工作臺上以無菌操作取樣品25.0mL于225mL滅菌生理鹽水中，均質后充分振搖做成1：10的均勻稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取上述稀釋液1mL，加入9mL滅菌生理鹽水中，混合均勻，做成1：100的稀釋液，按上述方法操作，做10倍遞增稀釋，制備稀釋梯度為10- 1、10- 2、10- 3、10- 4，以此類推。選擇適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液，每個稀釋度吸取1mL于滅菌培養(yǎng)皿內，傾注溫度為46℃左右的孟加拉紅培養(yǎng)基20mL～25mL，轉動平皿使其混合均勻。置水平臺面待培養(yǎng)基完全凝固。待瓊脂凝固后，正置平板，置于28.0℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d后進行菌落計數。同時做空白對照。

結果

檢測結果及評價：（表1）實驗室參加三次測量審核和兩次檢測能力驗證計劃，一共檢測7個樣品，其中酵母一個，霉菌兩個，霉菌和酵母4個。結果7個中5個獲得滿意結果，1個可疑，1個不滿意。

分析

酵母：在2015年參加的測量審核中，檢測的酵母獲得了滿意結果。在2016、2017年檢測的酵母結果均與其他的實驗室的結果差別不大。主要原因是因為酵母在孟加拉紅培養(yǎng)基上生長的菌落清晰，容易分辨，不會出現菌落蔓延生長，在計數時檢驗員能準確的對酵母計數。從而得出滿意的結果。

霉菌：15年第一次檢測霉菌MA15- A158樣品時，由于霉菌的生長產生孢子和菌絲，導致在培養(yǎng)第5天時，原液稀釋度的平板上霉菌出現了片狀菌落，無法分清霉菌的數量，因而取了稀釋梯度為10- 1的數值。最后導致檢測結果偏差，結果為不滿意。在第二次檢測測量審核樣品時，在培養(yǎng)的過程中每天觀察，當平板上生長出菌落時，每天定時計算平板上的菌落和生長的位置，在培養(yǎng)結束時根據之前的觀察菌落生長的位置對平板上的菌落進行計數。在2016年的能力驗證項目中16- F444樣品稀釋度10- 2平板上生長較多霉菌，有霉菌重疊交錯生長。稀釋度10- 1為78，其中酵母50，霉菌28；稀釋度10- 2為10，酵母為6，霉菌為4。兩個稀釋度都在國標的菌落計數范圍內。在這種情況下應當須稀釋度高的結果。第一可以避免檢測人員在稀釋度低對霉菌計數時出現偏差對結果造成影響。第二，當兩個稀釋度都滿足計數的情況下，取較大的數值在數學統(tǒng)計上更靠近穩(wěn)健均值，使結果在Z值更接近滿意范圍。

討論

2016年ACAS- PT201乳粉中霉菌和酵母的檢測能力驗證中期報告，共有100家實驗室參加了檢測能力驗證計劃，其中有72家檢測了Ⅰ組樣品，本實驗室16- F444樣品為Ⅰ組樣品，其中62家結果滿意，5家結果可疑，5家結果不滿意，滿意率為86.1%。16- G790樣品為Ⅱ組樣品，共有100家檢測，其中95家結果滿意，2家結果可疑，3家結果不滿意，合格率為95%。2017年ACAS- PT336食品中霉菌和酵母計數能力驗證計劃中期報告，僅提供了獲得滿意的實驗室信息，共有77家獲得滿意結果。通過對第一年和第二年的檢測，發(fā)現了實驗室檢測人員對標準的理解有存在誤區(qū)。經過對這兩年的檢測的結果進行了分析，尋找原因，并在第三年的檢測時注意避免同問題的發(fā)生，使得17年的結果都獲得了滿意的結果，并且Z值都很低，接近穩(wěn)定均值?，F對這三年檢測霉菌和酵母的結果和檢測中發(fā)現和存在的問題做個總結。