拉莫三嗪抗抑郁作用及其機(jī)制研究*

林 娜 柳 洋 祁 暉 周鳳玲 辛 勤 王海英△

(1濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院， 濟(jì)寧 272067；2青島市第九人民醫(yī)院，青島 266000；3濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院，濟(jì)寧 272011)

雙向情感障礙是一種常見(jiàn)的精神疾病，全球約有1%～4%的人患有雙向情感障礙，在治療雙向情感障礙過(guò)程中最主要的問(wèn)題是抗抑郁藥的使用。谷氨酸是一種興奮性氨基酸，參與調(diào)控抑郁的發(fā)生及發(fā)展[1]。重度抑郁癥患者的尸檢結(jié)果表明，死者的額葉皮質(zhì)中谷氨酸水平增加[2]，額葉皮質(zhì)中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體表達(dá)也產(chǎn)生不同程度的改變[3]，并且NMDA受體NMDAR1亞基在海馬中的表達(dá)減少[4]。給予NMDA受體拮抗劑氯胺酮能夠明顯緩解抑郁癥患者的抑郁情緒[5]，說(shuō)明NMDA受體參與抑郁的產(chǎn)生，并且長(zhǎng)期抗抑郁治療能夠改變機(jī)體NMDA受體功能[1]。

拉莫三嗪具有明顯的抗抑郁作用[6-7]，但其機(jī)制尚未明確。本文將著重研究拉莫三嗪抗抑郁作用機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

雄性昆明抑郁模型小鼠，購(gòu)自山東省魯抗醫(yī)藥股份有限公司質(zhì)檢中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室，體重20～30g，飼養(yǎng)于21℃～23℃環(huán)境中，12h循環(huán)光照，飲食自由。所有實(shí)驗(yàn)在12:00至16:00之間完成。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組

實(shí)驗(yàn)分3部分進(jìn)行。

第一部分：觀察拉莫三嗪對(duì)抑郁模型小鼠的行為影響。隨機(jī)選取40只抑郁模型小鼠分為5組(n=8)，分別向小鼠腹腔注射拉莫三嗪(7,15,30ml/kg)[8]、生理鹽水(7ml/kg)以及氟西汀(20mg/kg)。

第二部分：觀察NMDA受體對(duì)拉莫三嗪抗抑郁作用的影響。隨機(jī)選取32只抑郁模型小鼠分為4組(n=8)，1)腹腔注射生理鹽水(7ml/kg)15min后再腹腔注射生理鹽水(7ml/kg)；2)腹腔注射生理鹽水(7ml/kg)15min后再腹腔注射拉莫三嗪(30mg/kg)；3)腹腔注射N(xiāo)MDA(75m/kg)[9]15min后再腹腔注射生理鹽水(7ml/kg)；4)腹腔注射N(xiāo)MDA(75m/kg)15min后再腹腔注射拉莫三嗪(30mg/kg)。

第三部分：觀察NMDA受體拮抗劑對(duì)拉莫三嗪抗抑郁作用的影響。隨機(jī)選取64只抑郁模型小鼠分為8組(n=8)，1)腹腔注射生理鹽水(7ml/kg)15min后再腹腔注射生理鹽水(7ml/kg)；2)腹腔注射生理鹽水(7ml/kg)15min后再腹腔注射拉莫三嗪(7mg/kg)；3)腹腔注射MK-801(0.05m/kg)[10]15min后再腹腔注射生理鹽水(7ml/kg)；4)腹腔注射MK-801(0.05m/kg)15min后再腹腔注射拉莫三嗪(5mg/kg)；5)腹腔注射氯胺酮(1mg/kg)[10]15min后再腹腔注射生理鹽水(7ml/kg)；6)腹腔注射氯胺酮(1mg/kg)15min后再腹腔注射拉莫三嗪(7mg/kg)；7)腹腔注射MgSO4(10mg/kg)[10]15min后再腹腔注射生理鹽水(7ml/kg)；8)腹腔注射MgSO4(10mg/kg)15min后再腹腔注射拉莫三嗪(7mg/kg)。

以上各組均于完成注射30min后開(kāi)始進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn)。

1.3 方法

1.3.1曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(OFT) OFT用于評(píng)估動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)行為[11]。曠場(chǎng)由白色不透明有機(jī)玻璃制成(50cm×50cm×30cm)，曠場(chǎng)底部均分為12等份。每次都將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放置于曠場(chǎng)中心位置，小鼠4只爪子進(jìn)入一格、2只前爪騰空或攀附墻壁記錄為運(yùn)動(dòng)1次。

1.3.2強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(FST) 將動(dòng)物放置于圓柱形燒瓶(直徑10cm，高25cm)中，向燒瓶中充以(24±1)℃的溫水，水深19cm。FST通過(guò)動(dòng)物靜止時(shí)間的改變?cè)u(píng)估藥物的抗抑郁作用[12]，F(xiàn)ST能夠反映受試動(dòng)物的無(wú)助狀態(tài)[12]。靜止是指動(dòng)物不掙扎，軀體漂浮不扭曲。記錄小鼠6 min內(nèi)靜止?jié)摲诩爸?min內(nèi)靜止持續(xù)時(shí)間。

1.3.3懸尾實(shí)驗(yàn)(TST) 小鼠尾尖部1/3處通過(guò)不粘膠固定于50cm高金屬桿一端，使用攝像系統(tǒng)記錄小鼠6min內(nèi)靜止?jié)摲诩爸?min內(nèi)靜止持續(xù)時(shí)間。靜止是指動(dòng)物不掙扎，軀體懸掛不扭曲[12]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 拉莫三嗪對(duì)抑郁型小鼠行為的影響

與生理鹽水組相比，拉莫三嗪(15、30mg/kg)組小鼠在FST(圖1A)和TST(圖1B)實(shí)驗(yàn)中靜止時(shí)間均減少且呈量效依賴(lài)關(guān)系(P<0.05)，表現(xiàn)出與20 mg/kg氟西汀組小鼠相似的靜止時(shí)間減少(圖1A、B)。但在OFT實(shí)驗(yàn)中，僅 30 mg/kg拉莫三嗪 組小鼠運(yùn)動(dòng)次數(shù)減少(P<0.05，圖1C)，其余各組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，圖1C)。

注:A，F(xiàn)ST；B，TST；C，OFT；
與7mg/Kg拉莫三嗪組相比，*P<0.05; 與15mg/Kg拉莫三嗪組相比，#P<0.05；
與30mg/Kg拉莫三嗪組相比，△P>0.05

圖1 拉莫三嗪對(duì)抑郁型小鼠行為的影響

2.2 NMDA受體對(duì)拉莫三嗪抗抑郁作用的影響

與生理鹽水/生理鹽水組相比，生理鹽水/拉莫三嗪組小鼠在FST(圖2A)和TST(圖2B)實(shí)驗(yàn)中靜止時(shí)間明顯減少(P<0.05)，但在OFT實(shí)驗(yàn)中，小鼠運(yùn)動(dòng)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，圖2C)。

與生理鹽水/拉莫三嗪組相比，NMDA/拉莫三嗪組小鼠在FST(圖2A)和TST(圖2B)實(shí)驗(yàn)中靜止時(shí)間明顯增高(P<0.05)，但在OFT實(shí)驗(yàn)中，小鼠運(yùn)動(dòng)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，圖2C)。

2.3 NMDA受體拮抗劑對(duì)拉莫三嗪抗抑郁作用的影響

與生理鹽水/拉莫三嗪組相比，MK/拉莫三嗪組、氯胺酮/拉莫三嗪組以及MgSO4/拉莫三嗪組小鼠在FST(圖3 A,D,G)和TST(圖3 B,E,H)實(shí)驗(yàn)中靜止時(shí)間明顯減少(P<0.05)，但在OFT實(shí)驗(yàn)中，小鼠運(yùn)動(dòng)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，圖3 C,F,I)。

注：A,D,G：FST；B,E,H：TST；C,F,I：OFT；與生理鹽水/拉莫三嗪組相比，*P<0.05

圖3 NMDA受體拮抗劑對(duì)拉莫三嗪抗抑郁作用的影響

3 討論

在治療雙向情感障礙過(guò)程中最主要的問(wèn)題是抗抑郁藥的使用，尤其是三環(huán)抗抑郁藥，這些抗抑郁藥能夠增加躁狂的發(fā)作[13]。因此，如何穩(wěn)定在治療雙向情感障礙中出現(xiàn)的情緒就成為研究的熱點(diǎn)。拉莫三嗪不但能夠治療多種類(lèi)型的癲癇還能夠有效緩解雙向情感障礙患者的重度抑郁，并且與其他一些抗抑郁藥物相比，使用拉莫三嗪的抑郁癥患者較少表現(xiàn)出躁狂[14]。但是到目前為止，拉莫三嗪抗抑郁的確切機(jī)制尚未明確。目前已經(jīng)有大量研究證實(shí)，NMDA受體參與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展。有研究發(fā)現(xiàn)，封閉NMDA受體后能夠產(chǎn)生抗抑郁樣反應(yīng)[1]，抗抑郁類(lèi)藥物能夠明顯抑制NMDA受體的活化，抑制NMDA受體功能并且抑制NMDA受體的結(jié)合能力以及表達(dá)[1]。為了探究拉莫三嗪抗抑郁作用是否與NMDA受體有關(guān)，故在本文中使用了NMDA受體激動(dòng)劑以及多種拮抗劑，用于探究NMDA受體在拉莫三嗪抗抑郁效果中的作用。

FST以及TST是常用的評(píng)估藥物抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)[11-12]，抗抑郁藥物能夠明顯減少動(dòng)物在FST以及TST中的靜止時(shí)間。本文結(jié)果顯示低劑量拉莫三嗪(7mg/kg)不能減少動(dòng)物在FST以及TST中的靜止時(shí)間，而中劑量(15mg/kg)以及高劑量拉莫三嗪(30mg/kg)能夠減少動(dòng)物的靜止時(shí)間，表明拉莫三嗪的抗抑郁效應(yīng)具有劑量依賴(lài)性。雖然在研究中發(fā)現(xiàn)大劑量的拉莫三嗪(30mg/kg)能夠明顯降低小鼠在FST以及TST中的靜止時(shí)間，但是有研究表明大劑量的拉莫三嗪能夠影響嚙齒類(lèi)動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)活性[6-7]，推測(cè)高劑量的拉莫三嗪產(chǎn)生的抗抑郁作用是通過(guò)鎮(zhèn)靜作用產(chǎn)生的。

NMDA受體是谷氨酸受體的一種亞型，研究表明NMDA受體有多個(gè)獨(dú)立受點(diǎn)，位于受體表面的甘氨酸受點(diǎn)以及鋅離子受點(diǎn)，還有位于離子通道內(nèi)的鎂離子受點(diǎn)以及苯環(huán)哌啶(PCP)受點(diǎn)，藥物可以直接作用于這些受點(diǎn)從而影響NMDA受體的功能[10]。MgSO4、氯胺酮以及MK-801均為非競(jìng)爭(zhēng)性NMDA受體拮抗劑[10]。鎂離子在低于正常細(xì)胞外液濃度時(shí)就能選擇性地阻斷NMDA受體，這種作用是電位依賴(lài)性的，當(dāng)膜處于更負(fù)電位時(shí)，其阻斷受體的作用最強(qiáng)，作用出現(xiàn)快，是非競(jìng)爭(zhēng)性的。氯胺酮能夠通過(guò)PCP受點(diǎn)非競(jìng)爭(zhēng)性阻斷NMDA受體，并且大劑量的NMDA以及谷氨酸均不能翻轉(zhuǎn)其作用。MK-801可以非競(jìng)爭(zhēng)性特異性拮抗NMDA受體作用，減少谷氨酸的毒性。雖然拉莫三嗪抗抑郁作用主要是通過(guò)阻斷神經(jīng)元表面的電壓依賴(lài)性鈉通道，但是拉莫三嗪的抗谷氨酸作用也能夠產(chǎn)生一定的抗抑郁效應(yīng)[15]。同樣，拉莫三嗪也能夠阻斷神經(jīng)元表面的電壓依賴(lài)性鈣通道[15]。拉莫三嗪除了能夠阻斷神經(jīng)元表面的電壓依賴(lài)性鈣通道以及鈉通道以外，還能夠抑制谷氨酸的釋放，進(jìn)一步增強(qiáng)拉莫三嗪對(duì)神經(jīng)元表面電壓依賴(lài)性鈣通道以及鈉通道的抑制作用[15]。本文發(fā)現(xiàn)NMDA受體興奮劑NMDA能夠扭轉(zhuǎn)高劑量(30mg/kg)拉莫三嗪的抗抑郁作用，而NMDA受體拮抗劑能夠增強(qiáng)拉莫三嗪的抗抑郁作用使原本無(wú)抗抑郁作用的低劑量(7mg/kg)拉莫三嗪產(chǎn)生抗抑郁效應(yīng)，表明拉莫三嗪可能通過(guò)NMDA受體發(fā)揮抗抑郁作用。這與先前關(guān)于NMDA受體拮抗劑參與藥物抗抑郁過(guò)程的研究相一致[1]。

綜上所述，本文證實(shí)拉莫三嗪能夠產(chǎn)生抗抑郁效應(yīng)，并且NMDA受體參與這一過(guò)程。這一發(fā)現(xiàn)不但能夠進(jìn)一步探究抗抑郁藥物的作用機(jī)制，還為抑郁癥的治療提供了新的策略。

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