難治性肺炎支原體肺炎患兒支氣管肺泡灌洗液中肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白的表達(dá)及其臨床意義

原瑞芳，王少青

(鶴壁市人民醫(yī)院兒科，河南 鶴壁 458030)

肺炎支原體肺炎(Mycoplasmapneumoniaepneumonia，MPP)是小兒常見(jiàn)的呼吸道疾病，約10%～40%的兒童社區(qū)獲得性肺炎是由肺炎支原體(Mycoplasmapneumoniae，MP)感染引起[1]。通常認(rèn)為，MPP是一種自限性疾病，但部分MPP患兒在應(yīng)用大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素治療后高熱持續(xù)不退(超過(guò)7 d)，咳嗽癥狀無(wú)明顯好轉(zhuǎn)，肺部影像學(xué)提示大片高密度均勻?qū)嵶儯夤茜R下可見(jiàn)黏液栓和(或)黏膜壞死，發(fā)展為難治性肺炎支原體肺炎(refractoryMycoplasmapneumoniaepneumonia，RMPP)[2-3]。肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白(surfactant associated protein，SP)是肺泡表面活性物質(zhì)的主要成分之一，與肺部感染密切相關(guān)[4]，目前共發(fā)現(xiàn)4種SP，即SP-A、SP-B、SP-C和SP-D。SP具有廣泛的生物學(xué)活性，如免疫調(diào)節(jié)、氣管保護(hù)、調(diào)節(jié)肺表面活性物質(zhì)代謝等。有研究表明，SP水平變化可反映肺損傷程度[5]。本課題對(duì)RMPP患兒急性期與恢復(fù)期支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BLAF)中SP水平進(jìn)行比較，以期為RMPP患兒病情評(píng)估及治療提供指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1一般資料選擇2015年1月至2016年12月鶴壁市人民醫(yī)院兒科收治的RMPP患兒30例，男18例，女12例，年齡7～12(7.5±2.4)歲。納入病例均無(wú)免疫缺陷或自身免疫性疾病、肺纖維化、肺結(jié)核、哮喘、肺部真菌感染、支氣管擴(kuò)張及其他肺部疾病。本研究通過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患兒監(jiān)護(hù)人均簽署知情同意書(shū)。

1.2RMPP診斷標(biāo)準(zhǔn)RMPP診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]：腋窩體溫>38.3 ℃，正規(guī)應(yīng)用大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素1周以上，患兒病情仍未見(jiàn)好轉(zhuǎn)。急性期：RMPP患兒入院第1～3 d，腋窩體溫高于38.3 ℃，咳嗽，影像學(xué)檢查提示肺部大片高密度均勻?qū)嵶?，支氣管鏡檢可見(jiàn)黏液栓或黏膜壞死?；謴?fù)期：RMPP患兒治療2～3周后，發(fā)熱得到控制，咳嗽明顯減輕，影像學(xué)檢查提示肺部炎癥明顯減輕，支氣管鏡檢查有輕度或無(wú)黏液栓[7]。

1.3主要試劑與儀器人SP-A、SP-B、SP-C和SP-D酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒(上海豐壽生物科技有限公司)，DG5031酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(上海巴玖實(shí)業(yè)有限公司)，RSGF1000小兒肺功能檢測(cè)儀(德國(guó)耶格公司)，BF-Q170電子纖維支氣管鏡(日本奧林巴斯公司)，CR-21G高速冷凍離心機(jī)(日本Hitachi有限公司)。

1.4方法

1.4.1標(biāo)本采集及處理患兒分別于急性期和恢復(fù)期在鎮(zhèn)靜及局部麻醉下行纖維支氣管鏡檢查?；純航?～6 h，檢查前30 min肌肉注射阿托品(重慶西南藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H50020044)0.01～0.03 mg·kg-1，苯巴比妥注射液(天津金耀藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H12020381)5 mg·kg-1，二者總劑量不超過(guò)100 mg?；純阂?0 g·L-1利多卡因(河北天成藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H13022314)鼻腔及咽喉部噴霧麻醉10～15 min，根據(jù)患兒年齡、體質(zhì)量選取合適型號(hào)的纖維支氣管鏡進(jìn)行檢查，于X線片提示的肺部嚴(yán)重炎癥或肺不張部位進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，取BALF[8]，4 ℃下3 000 r·min-1離心10 min，取上清液，-70 ℃保存待測(cè)。

1.4.2BALF中SP-A、SP-B、SP-C和SP-D水平檢測(cè)按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行操作，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算BALF中SP-A、SP-B、SP-C和SP-D水平。

1.4.3肺功能檢測(cè)患兒分別于急性期和恢復(fù)期進(jìn)行肺功能檢測(cè)，檢測(cè)前讓患兒及家屬熟悉操作流程及測(cè)試動(dòng)作，使用肺功能檢測(cè)儀檢測(cè)患兒肺功能，記錄第1秒用力呼氣量(forced expiratory volume in one second，F(xiàn)EV1)和用力肺活量(forced vital capacity，F(xiàn)VC)。

2 結(jié)果

2.1RMPP患兒急性期與恢復(fù)期肺功能比較結(jié)果見(jiàn)表1。RMPP患兒恢復(fù)期FEV1、FVC和FEV1/FVC顯著高于急性期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1RMPP患兒急性期與恢復(fù)期FEV1、FVC及FEV1/FVC比較

組別nFEV1/LFVC/LFEV1/FVC/%急性期301.34±0.231.75±0.2868.25±6.21恢復(fù)期301.71±0.351.98±0.3688.57±8.16t4.8393.07014.859P0.0160.0250.000

2.2RMPP患兒急性期與恢復(fù)期BALF中SP-A、SP-B、SP-C及SP-D水平比較結(jié)果見(jiàn)表2。RMPP患兒恢復(fù)期BALF中SP-A、SP-B、SP-C和SP-D水平顯著高于急性期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2RMPP患兒急性期與恢復(fù)期BALF中SP-A、SP-B、SP-C及SP-D水平比較

組別nSP-A/(μg·L-1)SP-B/(μg·L-1)SP-C/(μg·L-1)SP-D/(μg·L-1)急性期3050.19±10.0642.95±12.4236.81±8.1421.57±5.46恢復(fù)期30135.20±18.13108.42±20.33142.63±21.8772.69±8.54t22.45715.05224.83727.623P0.0000.0000.0000.000

3 討論

RMPP患兒多有頑固性高熱、咳嗽、呼吸困難及肺外器官并發(fā)癥，病情嚴(yán)重，進(jìn)展迅速，早期評(píng)估患兒病情并及時(shí)進(jìn)行合理治療可以有效改善患兒預(yù)后，降低病死率[9]。X線檢查只有在肺部出現(xiàn)嚴(yán)重水腫、滲出時(shí)才能顯示出來(lái)，其滯后性降低了其早期診斷RMPP的價(jià)值；另外，RMPP患兒的胸部X線影像表現(xiàn)與臨床癥狀并不完全吻合[10]。RMPP患兒急性期往往會(huì)出現(xiàn)呼吸困難，因此，測(cè)評(píng)患兒肺功能對(duì)于診斷和治療RMPP有重要指導(dǎo)作用，但是，單純檢查肺功能不足以評(píng)估RMPP患兒病情。纖維支氣管鏡下行支氣管肺泡灌洗并對(duì)BALF成分進(jìn)行分析是評(píng)估RMPP病情的有效手段。

SP-A、SP-B、SP-C和SP-D由Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞(alveolar epithelial cell type Ⅱ，AEC-Ⅱ)和呼吸道Clara細(xì)胞合成并分泌，這些表面蛋白在肺表面活性物質(zhì)(pulmonary surfactant，PS)的結(jié)構(gòu)、功能和代謝方面發(fā)揮重要作用[11]。4種肺表面活性蛋白中，以SP-A水平最高，其可以與細(xì)菌和病毒結(jié)合，增強(qiáng)肺泡巨噬細(xì)胞的趨化作用，提高肺的防御功能[12]。SP-B可以降低肺泡氣-液界面張力，防止肺泡萎陷，且具有抗炎作用[13]。另外，SP-B可以加速磷脂的吸附和擴(kuò)展，SP-C與SP-B相互作用可以促進(jìn)AEC-Ⅱ?qū)α字臄z取[14-15]；而SP-D則與呼吸系統(tǒng)特異性免疫有關(guān)[15]。

本研究結(jié)果顯示，RMPP患兒恢復(fù)期FEV1、FVC、FEV1/FVC顯著高于急性期，而恢復(fù)期BALF中SP-A、SP-B、SP-C和SP-D水平顯著高于急性期；提示SP-A、SP-B、SP-C和SP-D水平與RMPP患兒病情具有一定相關(guān)性，即RMPP患兒病情越嚴(yán)重，SP-A、SP-B、SP-C和SP-D水平越低，肺功能越差；隨著RMPP患兒病情好轉(zhuǎn)，SP-A、SP-B、SP-C和SP-D水平升高，肺功能逐漸改善。RMPP急性期患兒BALF中SP-A、SP-B、SP-C和SP-D水平降低可能與AEC-Ⅱ受損后分泌功能減弱有關(guān)；RMPP急性期患兒BALF中富含的彈性蛋白酶也可降解各種表面活性蛋白，使其水平進(jìn)一步降低；另外，肺局部炎癥反應(yīng)過(guò)程中SP-A、SP-B、SP-C和SP-D被大量消耗，也導(dǎo)致SP水平迅速下降。

綜上所述，檢測(cè)BALF中SP-A、SP-B、SP-C和SP-D水平對(duì)RMPP的診斷、病情評(píng)估、治療及預(yù)后判斷具有一定的指導(dǎo)意義。

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