金線草抗炎作用研究

★ 李曉春 王莉芳 樊寶娟 徐長根（陜西省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院 西安 71 00 65）

金線草，為蓼科植物金線草Antenoron fi liforme（Thunb.）Roberty et Vantier的全草，別名重陽柳、毛蓼、人字草、一串紅等。多年生草本，生于山地林緣、路旁陰濕處。分布于山東、河南、山西、陜西等地。夏秋采收，鮮用或曬干。味辛，性溫。具祛風(fēng)除濕，理氣止痛之功效。內(nèi)服外用皆可。常用于風(fēng)濕骨痛、咳血、便血、跌打損傷等的治療［1］。本研究以二甲苯致小鼠耳腫脹、醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高、角叉菜膠致大鼠足腫脹和紙片致小鼠肉芽增生等經(jīng)典的炎癥模型，考察金線草的抗炎作用，以期為金線草的進一步開發(fā)和應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 動物 昆明種小鼠，雌雄兼用，體重18～22g；SD大鼠，雌雄兼用，體重180～220g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物中心提供，實驗動物質(zhì)量合格證號：SCXK（陜）2012-003。飼養(yǎng)環(huán)境：溫度22℃～26℃，相對濕度40%～70%，實驗動物使用許可證號：SYXK（陜）2013-001。

1.2 試藥 藥材由陜西省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院樊寶娟副主任藥師鑒定為金線草Antenoron fi liforme的干燥全草。阿司匹林腸溶片（批號：BJ32774，拜耳醫(yī)藥保健有限公司）；吲哚美辛腸溶片（批號：G160402，山西云鵬制藥有限公司）；醋酸地塞米松片（批號：150408，浙江仙琚制藥股份有限公司）；伊文思藍(lán)（批號：QR12404，MP公司）；角叉菜膠（Sigma公司）；二甲苯（分析純，批號：20120208，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；醋酸（分析純，批號：20120831，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）。

1.3 儀器 YLS-25A電動耳腫打耳器（濟南益延科技發(fā)展有限公司）；YLS-7C足趾容積測量儀（濟南益延科技發(fā)展有限公司）；UV-2550雙光束紫外分光光度計（日本島津公司）。

2 方法

2.1 金線草水提物的制備 取金線草全草，粉碎成粗粉，裝入紗布口袋，加10倍量水，浸泡1h，煎煮2次，每次2h，過濾，將濾液濃縮至高劑量含生藥量為0.8g/mL，中劑量含生藥量為0.4g/mL，低劑量含生藥量為0.2g/mL。

2.2 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響［2-4］取健康昆明種小鼠，50只，雌雄各半，按體重隨機分為金線草水提物組低、中、高劑量組及陽性對照組（阿司匹林0.5g/kg體重）、模型對照組（純凈水），灌胃給藥20mL/kg體重，每天給藥1次，連續(xù)7天。末次給藥1h后小鼠左耳廓兩面均勻涂抹致炎劑二甲苯20μL/只，右耳不做任何處理為正常耳。1h后小鼠脫頸椎處死，沿耳廓基線剪下雙耳用7mm直徑打孔器分別在雙耳同一部位打下圓形耳片并稱重，計算耳腫脹度和耳腫脹抑制率。耳腫脹度=左耳片質(zhì)量（mg）-右耳片質(zhì)量（mg）。耳腫脹抑制率（%）=（模型對照組耳腫脹度-給藥組耳腫脹度）/模型對照組耳腫脹度×100%。

2.3 對醋酸致毛細(xì)血管通透性增高的影響［2］取健康昆明種小鼠，50只，雌雄各半，按2.2方法分組及給藥。末次給藥1h后，尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)0.1mL/10g體重，然后腹腔注射0.6%醋酸溶液0.1mL/10g體重，30min后將小鼠脫頸椎處死，打開腹腔并用5mL生理鹽水進行沖洗，沖洗液3000 r/min離心5min，上清液于590nm處測其吸光度值（A），計算抑制率。抑制率=（模型組平均吸光度-給藥組平均吸光度）/模型組平均吸光度×100%。

2.4 對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響［2-4］取健康SD大鼠，50只，雌雄各半，按體重隨機分為金線草水提物低、中、高劑量組及陽性對照組（地塞米松10mg/kg體重）、模型對照組（純凈水），灌胃給藥20mL/kg體重，每天給藥1次，連續(xù)7天。末次給藥1h后，于右后足跖皮下注射1%角叉菜膠生理鹽水溶液0.1mL。用大鼠足趾容積測量儀對致炎前和致炎后1，2，3，4h的足趾容積進行測定，并計算足趾腫脹度及腫脹抑制率。足趾腫脹度=致炎后足趾容積（mL）-致炎前足趾容積（mL）。腫脹抑制率=（模型對照組足趾腫脹度－給藥組足趾腫脹度）/模型對照組足趾腫脹度×100%。

2.5 對紙片致小鼠肉芽增生的影響［2，4］取健康昆明種小鼠，50只，雌雄各半，按2.2方法分組及給藥，陽性藥為吲哚美辛（20mg/kg）。小鼠乙醚麻醉后，無菌條件下，將一個經(jīng)滅菌并稱重的濾紙片植入左側(cè)鼠蹊部，隨即縫合。于次日各組小鼠灌胃給予相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)7天。末次給藥后1h，脫頸椎處死小鼠，打開原切口剝離并取出紙片肉芽腫組織，60℃下烘干，稱重，減去原紙片重量即為肉芽腫凈重，計算肉芽腫抑制率。肉芽腫抑制率＝（模型對照組肉芽腫凈重－給藥組肉芽腫凈重）/模型對照組肉芽腫凈重×100%。

2.6 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組資料的比較采用完全隨機設(shè)計的單因素方差分析法，多組間兩兩比較采t檢驗，以P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 金線草水提物對小鼠耳腫脹的影響 陽性對照組和金線草水提物高劑量組小鼠耳腫脹度與模型對照組比較有顯著性差異（P<0.05或P<0.01），中、低劑量組小鼠耳腫脹度小于模型組，但無顯著性差異（P>0.05）。結(jié)果見表1。

表1 金線草水提物對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響（，n=10）

表1 金線草水提物對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響（，n=10）

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

組別 劑量/g·kg-1 耳腫脹度/mg 耳腫脹抑制率/%模型對照組 - 11.29±1.22 -陽性對照組 0.5 9.89±0.94** 12.40低劑量組 4 10.58±0.90 6.29中劑量組 8 10.51±0.67 6.91高劑量組 16 10.12±0.59* 10.36

3.2 金線草水提物對醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響 陽性對照組和金線草水提物中、高劑量組均可抑制醋酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加，與模型對照組比較有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）。結(jié)果見表2。

表2 金線草水提物對醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響（，n=10）

表2 金線草水提物對醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響（，n=10）

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

組別 劑量/g·kg-1 A值 抑制率/%模型對照組 - 0.52±0.087 -陽性對照組 0.5 0.26±0.058** 50.0低劑量組 4 0.47±0.073 9.62中劑量組 8 0.43±0.062* 17.3高劑量組 16 0.43±0.062* 17.3

3.3 金線草水提物對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響 致炎前，各組大鼠的足趾體積均無顯著性差異（P>0.05）。陽性對照組在致炎后1h、2h、3h、4h對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹有抑制作用，與模型對照組比較有顯著性差異（P<0.01）；

金線草水提物中劑量組在致炎后2h對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹有抑制作用，與模型對照組比較有顯著性差異（P<0.05）；金線草水提物高劑量組在致炎后1h、2h能減輕大鼠足趾腫脹，與模型對照組比較有顯著性差異（P<0.05），但在致炎后3h、4h足趾腫脹度與模型對照組比較無顯著性差異（P>0.05）。結(jié)果見表3。

表3 金線草水提物對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響（，n=10）

表3 金線草水提物對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響（，n=10）

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

組別 劑量/g·kg-1腫脹度（抑制率）/mL（%）致炎前足趾體積 1h 2h 3h 4h模型對照組 - 0.86±0.04 1.11±0.13 1.23±0.14 1.28±0.11 1.03±0.15陽性對照組 0.01 0.87±0.06 0.58±0.11** 0.57±0.07** 0.61±0.07** 0.65±0.09**（47.75） （53.66） （52.34） （36.89）低劑量組 4 0.87±0.06 1.02±0.17 1.03±0.17 1.12±0.25 0.91±0.13（8.11） （16.26） （12.5） （11.65）中劑量組 8 0.86±0.05 0.92±0.22 0.96±0.27* 1.07±0.32 0.90±0.19（17.12） （21.95） （16.41） （12.62）高劑量組 16 0.87±0.05 0.88±0.19* 0.97±0.27* 1.01±0.39 0.91±0.20（20.72） （21.14） （21.09） （11.65）

3.4 金線草水提物對小鼠肉芽增生的影響 陽性對照組肉芽腫凈重與模型對照組比較有顯著性差異（P<0.05），金線草水提物低、中、高劑量組可以減輕肉芽腫凈重，但與模型對照組比較無顯著性差異（P>0.05）。結(jié)果見表4。

表4 金線草水提物對紙片致小鼠肉芽增生的影響（，n=10）

表4 金線草水提物對紙片致小鼠肉芽增生的影響（，n=10）

注：與模型對照組比較，*P<0.05

組別 劑量/g·kg-1肉芽腫凈重/mg 肉芽腫抑制率/%模型對照組 - 1.58±0.13 -陽性對照組 0.02 1.39±0.22* 12.03低劑量組 4 1.51±0.07 4.43中劑量組 8 1.44±0.12 8.86高劑量組 16 1.43±0.13 9.49

4 討論

炎癥是機體對有害刺激和損傷所產(chǎn)生的一種防御性應(yīng)答，是一種常見的病理過程。常用的抗炎實驗方法根據(jù)致炎性質(zhì)不同分為二大類：一類是非特異性炎癥模型，使用的致炎因子有異性蛋白（如雞蛋清）、顆粒性異物（角叉菜膠、棉球、紙片等）以及某些化學(xué)物質(zhì)（二甲苯等）。另一類是免疫性炎癥模型，包括細(xì)胞介導(dǎo)的超敏反應(yīng)性炎癥和免疫復(fù)合物介導(dǎo)的炎癥模型。其中，非特異性炎癥模型包括以血管通透性、白細(xì)胞游走為主要改變的各種急性炎癥模型和以肉芽組織增生為指標(biāo)的各種慢性炎癥模型［4］。本研究所采用的炎癥動物模型均屬于非特異性炎癥反應(yīng)范疇，如二甲苯致小鼠耳腫脹模型、醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高模型、角叉菜膠致大鼠足腫脹模型都屬于急性炎癥模型，以局部組織腫脹、毛細(xì)血管通透性增加、白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤為特點；紙片致小鼠肉芽增生屬于慢性炎癥模型，由于紙片的刺激作用而引起結(jié)締組織增生，生成肉芽組織，模擬某些炎癥后期的病理改變。

本研究在前期研究基礎(chǔ)上系統(tǒng)評價了金線草的抗炎功效。結(jié)果顯示，金線草水提物（16g生藥/kg體重）可顯著抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹，耳腫脹抑制率達(dá)到10.36%；金線草水提物（8、16g生藥/kg體重）可降低醋酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性，減少急性、早期炎癥的滲出，抑制率達(dá)到17.3%；金線草水提物（16g生藥/kg體重）可減輕角叉菜膠致炎后1、2h的大鼠足趾腫脹，2h的抑制率達(dá)到21.14%；金線草水提物可減輕肉芽組織增生，但缺乏統(tǒng)計學(xué)意義。

以上結(jié)果提示，金線草水提物對于急性炎癥有一定的抑制作用，但是對于慢性炎癥無抑制作用。考慮到角叉菜膠引起足趾腫脹的特點是致炎局部前列腺素合成增加，并與血管活性物質(zhì)和激肽類一起誘發(fā)水腫［3］，這將成為作者研究金線草抗炎作用機制的重點方向，同時對于金線草抗炎作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，也將在后續(xù)的研究中進行探討。

［1］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].第1版.上海:上海人民出版社,1977.

［2］陳奇. 中藥藥理研究方法學(xué)[M]. 第1版. 北京:人民衛(wèi)生出版社,1994:271-273, 305-307.

［3］張均田. 現(xiàn)代藥理實驗方法[M]. 第1版. 北京:北京醫(yī)科大學(xué)/中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社, 1998:1382-1384.

［4］徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學(xué)[M]. 第2版. 北京:人民衛(wèi)生出版社, 1991:713-719, 722-723.