復(fù)方冰甲乳膏急性毒性試驗(yàn)研究*

邱 洪，王 慧，張?zhí)扈b

（中國(guó)人民解放軍第44醫(yī)院，貴州 貴陽 550009）

復(fù)方冰甲乳膏來源于臨床經(jīng)驗(yàn)方，該方通過驗(yàn)方配比及工藝篩選出，由冰片、硫磺、硼砂、甲硝唑、制霉菌素等按最佳比例組成[1－2]，療效明顯，具有清熱燥濕、收斂生肌之功效，主要用于真菌感染引起的手足癬等。為了保證臨床用藥的安全性，以及為進(jìn)一步的作用機(jī)制研究提供客觀依據(jù)，本研究中對(duì)此方進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1．1 儀器與試藥

ALC－210．3型電子天平（上海良平儀器儀表有限公司）；Olympus BH －2型顯微鏡（日本）；SC－970型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（瑞士貝肯公司）；日立7170A型全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)柯達(dá)公司）；HPIAS－1000型高清晰度彩色圖文病理分析系統(tǒng)、光鏡。復(fù)方冰甲乳膏（貴陽中醫(yī)學(xué)院中藥制劑研究中心，批號(hào)為20150126）；血細(xì)胞分析試劑（邁瑞南京生物技術(shù)有限公司）；生化實(shí)驗(yàn)試劑盒（北京利德曼生化股份有限公司）。

1．2 動(dòng)物

取健康的10～16周齡日本大耳白色家兔，清潔級(jí)，體質(zhì)量（2．5 ± 0．5）kg，20 只，雌雄各半，健康合格，由貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)為SCXK（黔）2012－001。所有動(dòng)物均在恒溫、恒濕的動(dòng)物室飼養(yǎng)，且按性別分籠飼養(yǎng)，自由飲水、進(jìn)食1周后，選擇狀態(tài)良好、行為活動(dòng)無異常的動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1．3 方法[3－12]

動(dòng)物分組：取健康合格家兔，用硫化鋇脫毛劑給家兔兩側(cè)背部脫毛，每側(cè)脫毛區(qū)域大小為8 cm×8 cm。脫毛后第2天，選取脫毛未損傷皮膚的家兔隨機(jī)分為試驗(yàn)組和空白對(duì)照組，每組10只家兔，雌雄各半。

給藥方法：本試驗(yàn)擬訂臨床成人日用復(fù)方冰甲乳膏劑量為3 g，成人平均體質(zhì)量按60 kg計(jì)，則臨床擬訂成人日用量為0．05 g／kg。復(fù)方冰甲乳膏含藥量為51．51%（含45．00%中藥和6．51%西藥）。試驗(yàn)組家兔皮膚涂抹給予復(fù)方冰甲乳膏2 g／kg(按每1 kg體質(zhì)量含藥量為1．030 2 g／kg計(jì))。給藥方法為用棉簽均勻涂抹家兔兩側(cè)背部脫毛區(qū)域?？瞻讓?duì)照組同法皮膚涂抹給予家兔等劑量的賦形劑。給藥1次，連續(xù)觀察14 d。

觀察指標(biāo)：記錄動(dòng)物有無毒性反應(yīng)及實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量變化等。第15天將所有家兔心臟取血（取血前12 h禁食），先用10%水合氯醛以800 mg／kg腹腔注射麻醉家兔，然后快速打開胸腔暴露心臟，持10 mL注射器經(jīng)左心室插入抽取5～8 mL血液標(biāo)本），測(cè)定并分析血常規(guī)、血生化指標(biāo)，包括紅細(xì)胞（RBC）、白細(xì)胞（WBC）、血小板（PLT）、血紅蛋白（Hb）、單核細(xì)胞百分比（M）、淋巴細(xì)胞百分比（L）、中性粒細(xì)胞百分比（N）；天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLO）、總膽紅素（TBIL）、空腹血糖（FBG）、血清肌酸激酶 (CK)、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、堿性磷酸酶（AKP）、三酰甘油（TG）、膽固醇（TC）、K＋、Na＋、Cl－。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

皮膚涂抹給藥后，動(dòng)物發(fā)育健康，肌肉豐滿，被毛濃密而有光澤、無脫毛，眼睛明亮而靈活，口鼻、肛門無異常分泌物，肛周潔凈，攝食正常，四肢健壯，自發(fā)活動(dòng)正常，體質(zhì)量逐漸增加。期間未見動(dòng)物死亡及毒副反應(yīng)。14 d后處死全部存活家兔，經(jīng)解剖和尸檢未發(fā)現(xiàn)內(nèi)臟器官異常。兩組動(dòng)物體質(zhì)量增加無明顯差異（P＞0．05），詳見表1。心臟取血，比較兩組家兔血常規(guī)、血生化指標(biāo)，無顯著性差異（P ＞0．05），詳見表 2和表 3。

表1 兩組家兔體質(zhì)量比較（，kg，n＝10）

表1 兩組家兔體質(zhì)量比較（，kg，n＝10）

組別空白對(duì)照組劑量（g ／kg） 性別試驗(yàn)組2 2 2 2雌雄雌雄給藥前2．38 ± 0．19 2．49 ± 0．16 2．46 ± 0．25 2．47 ± 0．19給藥后7 d 2．41 ± 0．21 2．57 ± 0．08 2．50 ± 0．24 2．58 ± 0．12給藥后14 d 2．51 ± 0．14 2．64 ± 0．07 2．61 ± 0．23 2．64 ± 0．13

表2 兩組家兔血常規(guī)指標(biāo)比較(，n＝10)

表2 兩組家兔血常規(guī)指標(biāo)比較(，n＝10)

項(xiàng)目WBC(109／L)RBC(1012／L)Hb(g／L)PLT(109／L)N(%)L(%)M(%)空白對(duì)照組2．85 ± 0．50 5．83 ± 0．41 143．1 ± 7．30 466．7 ± 80．1 35．6 ± 7．00 51．89 ± 9．82 13．99 ± 5．72試驗(yàn)組2．10 ± 0．60 6．16 ± 0．43 153．2 ± 10．9 456．0 ± 74．72 37．8 ± 9．03 58．50 ± 5．82 9．23 ± 7．52

表3 兩組家兔血生化指標(biāo)比較(，n＝10)

表3 兩組家兔血生化指標(biāo)比較(，n＝10)

項(xiàng)目ALT(IU／L)TP(g／L)AST(IU／L)ALB(g／L)GLO(g／L)TBIL(μmol／L)BUN(mmol／L)Cr(μmol／L)AKP(U／L)K＋(mmol／L)Na＋(mmol／L)Cl－1(mmol／L)TC(mmol／L)TG(mmol／L)FBG(mmol／L)CK(U／L)空白對(duì)照組87．30 ± 58．13 45．89 ± 3．18 349．52 ± 89．59 27．18 ± 3．21 21．10 ± 2．45 0．45 ± 0．25 7．89 ± 0．74 19．98 ± 2．17 340．5 ± 76．24 7．22 ± 0．38 137．23 ± 2．98 98．68 ± 1．66 0．82 ± 0．18 0．66 ± 4．68 12．88 ± 1．80 3 429．3 ± 1 956．3試驗(yàn)組85．52 ± 15．32 47．90 ± 1．75 160．25 ± 61．35 28．1 ± 2．82 22．52 ± 2．46 0．81 ± 0．33 7．71 ± 0．47 20．13 ± 1．50 274．48 ± 79．11 6．65 ± 0．83 136．15 ± 1．56 96．40 ± 1．59 0．91 ± 0．15 0．45 ± 8．27 13．96 ± 1．52 1190．72 ± 462．4

3 討論

足癬是常見的傳染性皮膚病，容易復(fù)發(fā)。國(guó)內(nèi)足癬復(fù)發(fā)率為50% ～80%[13]，尤其部隊(duì)官兵多為集體生活，加上長(zhǎng)期在野外訓(xùn)練，更易引發(fā)真菌感染，造成手足癬的相互傳染。

復(fù)方冰甲乳膏為中西藥結(jié)合的復(fù)方制劑，主要用于真菌感染引起的手足癬等，前期臨床試驗(yàn)已表明其臨床療效與益康倍松乳膏相當(dāng)[14]。前期皮膚刺激性試驗(yàn)[15]及其急性毒性試驗(yàn)研究均顯示，復(fù)方冰甲乳膏具有良好的安全性。本試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方冰甲乳膏對(duì)家兔一般狀況無明顯影響。用藥后動(dòng)物均存活，家兔外觀、行為、呼吸狀態(tài)、體位及姿勢(shì)、對(duì)刺激的反應(yīng)、大體剖檢均未見明顯異常，復(fù)方冰甲乳膏對(duì)家兔的體質(zhì)量無明顯影響。在短期內(nèi)對(duì)家兔血液成分及肝功能、腎功能、電解質(zhì)、血糖、血脂、心肌酶無明顯影響，即無明顯急性毒性。

綜上所述，復(fù)方冰甲乳膏家兔皮膚給藥急性毒性試驗(yàn)中，家兔每日最大給藥量為2 g／kg，相當(dāng)于臨床擬訂成人日用量的120倍，未見明顯毒性反應(yīng)。因此，復(fù)方冰甲乳膏是一種安全性較高的外用制劑，值得臨床推廣。

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