丹參酮ⅡA磺酸鈉對缺血性腦卒中大鼠受損組織的防護(hù)作用研究*

杜維平 ，鄧禮娟 ，賈毅敏 ，賴翔宇

（1．重慶三峽中心醫(yī)院，重慶 404000； 2．重慶大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院·重慶市腫瘤研究所·重慶市腫瘤醫(yī)院，重慶 400030）

缺血性腦卒中是臨床常見的腦血管疾病，如何有效保護(hù)腦細(xì)胞、減輕神經(jīng)功能缺損程度一直是治療的研究熱點(diǎn)[1]。丹參是活血化瘀類中藥的代表，臨床應(yīng)用歷史悠久，其活血祛瘀、涼血消癰、除煩安神等功效已有多年臨床驗(yàn)證。近年來，對丹參的有效成分、藥理作用的現(xiàn)代研究不斷深入。丹參單體物質(zhì)丹參酮ⅡA脂溶性較強(qiáng)，經(jīng)磺化后水溶性較強(qiáng)，更易被人體吸收。丹參酮ⅡA可改善側(cè)支循環(huán)、解除微血管痙攣、改善局部組織缺血缺氧所致的代謝障礙，在心腦血管疾病的治療中應(yīng)用前景良好[2]。本研究中通過動物實(shí)驗(yàn)探討了丹參酮ⅡA磺酸鈉治療缺血性腦卒中的療效及不良反應(yīng)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1．1 動物、儀器與試藥

動物：SD大鼠，周齡10～12周，動物合格證編號為201602065。飼養(yǎng)條件保持整潔、干燥，室溫21～25℃，相對濕度50% ～60%；動物房內(nèi)安置白熾燈，維持正常晝夜規(guī)律，喂養(yǎng)飼料為標(biāo)準(zhǔn)飼料，大鼠和飼料均購自重慶醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心。

儀器：OLS4100型倒置顯微鏡（日本奧林巴斯公司）；BSM－620．3型電子精密天平(上海卓精電子科技有限公司)；BPZ－6000LC型恒溫干燥箱(上海和呈儀器有限公司)；LC－20A型高效液相色譜儀(日本島津公司)；SP－100E型酶標(biāo)儀(上海閃譜生物科技有限公司)。

試藥：水合氯醛（分析純，南京森貝伽生物科技有限公司，批號為140217）；林格注射液(杭州民生藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H33020035，批號為140514)；乳酸脫氫酶（LDH，批號為 20140424）、超氧化物歧化酶（SOD，批號為 20140924）、丙二醇（MDA，批號為 20140315），試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；丹參酮ⅡA磺酸鈉（上海第一生化藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H31022558，規(guī)格為每支 2 mL∶10 mg）。

1．2 方法

分組：采用隨機(jī)數(shù)字表法將80只大鼠均分為假手術(shù)組(A組)、缺血性腦卒中組(B組)、丹參ⅡA磺酸鈉預(yù)處理組(C組)和丹參ⅡA磺酸鈉實(shí)驗(yàn)組(D組)，各20只。4組大鼠的性別、周齡和體質(zhì)量均無明顯差異（P＞0．05），具有可比性。

建模與給藥：A組做切皮、分離血管手術(shù)，手術(shù)前腹腔注射無菌生理鹽水2 mL。B組實(shí)施改良的Pulsinelli′s四血管阻斷法建立模型，手術(shù)前腹腔注射無菌生理鹽水2 mL。C組實(shí)施改良的Pulsinelli′s四血管阻斷法建立模型，手術(shù)前腹腔注射丹參酮ⅡA磺酸鈉30 mg／kg。D組實(shí)施改良的Pulsinelli′s四血管阻斷法建立模型，術(shù)后2 h開放血流時(shí)腹腔注射丹參酮ⅡA磺酸鈉30 mg／kg。

1．3 評價(jià)指標(biāo)

不良反應(yīng)：給藥后觀察各組發(fā)熱、白細(xì)胞反應(yīng)、皮疹等不良反應(yīng)的發(fā)生情況。

腦部利用率：將大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉后固定，將腦探針植入左側(cè)皮質(zhì)，林格液以2 μL／min的流速灌流，平衡時(shí)間為2 h。連續(xù)收集3個(gè)空白透析液樣品后尾靜脈注射丹參酮ⅡA磺酸鈉和丹參酮ⅡA單體，并收集樣品。每隔15 min收集腦透析液。以林格液稀釋2倍后進(jìn)樣采用高效液相色譜化學(xué)發(fā)光檢測（HPLC－CL）法分析系統(tǒng)測定。

腦梗死面積：將大鼠處死后，取腦組織切薄片，進(jìn)行TTC染色，拍攝染色標(biāo)本照，使用計(jì)算機(jī)圖像分析軟件（HPIAS－1000）計(jì)算梗死區(qū)面積。

腦含水量：于再灌注后24 h，處死大鼠，取出完整大腦，留梗死半球。采用電子精密天平測量濕重，再將標(biāo)本置于恒溫干燥箱烘干至恒重后測干重。腦含水量＝（濕重－干重）／濕重。

其他：觀察在體腦微透析下丹參ⅡA單體和丹參ⅡA磺酸鈉的回收率。比較LDH，SOD，MDA水平。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用 SPSS 11．5統(tǒng)計(jì)軟件處理。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，運(yùn)用單因素方差分析和 t檢驗(yàn)。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 丹參ⅡA磺酸鈉的腦部利用率

通過在體腦微透析技術(shù)發(fā)現(xiàn)，丹參ⅡA磺酸鈉平均回收率為（7．37 ±8．26）%，較丹參酮ⅡA單體的（11．51 ±5．23）% 低（t＝9．268，P ＜ 0．05），說明丹參ⅡA磺酸鈉較丹參酮ⅡA單體更易吸收。

2．2 腦梗死面積和腦含水量

由表1可見，4組大鼠間腦梗死面積和腦含水量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01）。且B組大鼠的上述指標(biāo)高于 C組和 D組（P＜0．05），而 C組和 D組之間無明顯差異（P ＞0．05）。

表1 4組大鼠腦梗死面積及腦含水量比較（，%，n＝20）

表1 4組大鼠腦梗死面積及腦含水量比較（，%，n＝20）

注：與 A 組比較，*P ＜0．05；與 B 組比較，＃P ＜0．05。表 2同。

組別A組B組C組D組F值P腦梗死面積0 35．23 ± 5．69 26．12 ± 4．53*＃25．88 ± 4．85*＃7．952＜ 0．01腦含水量72．36 ± 6．24 88．43 ± 5．87 80．17 ± 6．22*＃79．85 ± 5．86*＃9．164＜ 0．01

2．3 LDH，SOD，MDA 水平

由表2可見，B組大鼠LDH和MDA水平均高于C組和D組，而SOD水平低于C組和D組(P＜0．05)，C組和D組之間無明顯差異(P＞0．05)。

2．4 不良反應(yīng)發(fā)生情況

由表3可見，4組大鼠發(fā)熱、白細(xì)胞反應(yīng)的發(fā)生率無明顯差異(P＞0．05)，而C組和D組大鼠皮疹發(fā)生率明顯高于其余兩組（P ＜0．05）。

表2 4組大鼠 LDH，SOD，MDA 水平比較（，n＝20）

表2 4組大鼠 LDH，SOD，MDA 水平比較（，n＝20）

組別A組B組C組D組F值P LDH（U ／L）2 435．56 ± 234．32 3 892．12 ± 346．84 3 223．46 ± 245．56*＃3 224．13 ± 263．41*＃13．297＜ 0．01 SOD（U ／mL）235．64 ± 11．37 226．12 ± 12．23 258．35 ± 13．28*＃259．10 ± 13．16*＃8．325＜ 0．01 MDA（nmol／mL）12．33 ± 1．56 14．98 ± 1．07 7．11 ± 0．83*＃6．97 ± 0．25*＃9．128＜ 0．01

表3 4組大鼠不良反應(yīng)發(fā)生情況比較（只，n＝20）

3 討論

缺血性腦卒中是由缺血引起的局灶性神經(jīng)功能缺失，常突然起病、進(jìn)展迅速，具有高發(fā)病率、高死亡率、高致殘率等特點(diǎn)[3]。腦組織在缺氧狀態(tài)下細(xì)胞供氧不足，造成ATP減少、細(xì)胞內(nèi)酸中毒、膜電位改變、細(xì)胞骨架紊亂等缺血性損傷[4]。迅速恢復(fù)缺血區(qū)的再灌注對改善患者預(yù)后具有重要作用，血流恢復(fù)后受炎性反應(yīng)影響，又會造成缺血－再灌注損傷，可進(jìn)一步加重腦組織損傷，甚至造成廣泛的神經(jīng)元壞死[5]。

丹參具有活血祛瘀、養(yǎng)血安神之功效，應(yīng)用歷史悠久、療效確切。古籍有“一味丹參散，功同四物湯”之說，足見其活血養(yǎng)血之效果[6]。近年來，丹參已有片劑、滴丸劑、注射劑等劑型，現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，丹參對免疫功能有雙向調(diào)節(jié)作用，可改善微循環(huán)、清除氧自由基，并具有抗炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、降壓等藥理作用[7]。丹參酮ⅡA是從丹參中分離出的脂溶性二萜醌類化合物，是丹參的主要活性成分[8－9]。丹參酮ⅡA有助于改善冠狀動脈側(cè)支循環(huán)，解除微血管痙攣，改善代謝障礙，清除氧自由基，減少炎性細(xì)胞浸潤，治療心血管疾病顯著效果[10]。其還可作為病毒性肝炎、肺纖維化、糖尿病等疾病的輔助用藥[11]。丹參酮ⅡA脂溶性強(qiáng)，到達(dá)腦組織的藥物較少，可采用基團(tuán)修飾方法改變其性質(zhì)[12－13]。丹參酮ⅡA磺酸鈉是將丹參酮ⅡA經(jīng)磺化而得到的衍生物，將丹參酮ⅡA的脂溶性改變成水溶性，使其具有更高的生物利用率[14－16]。

本研究結(jié)果顯示，丹參ⅡA磺酸鈉利用率較丹參酮ⅡA單體低，說明丹參ⅡA磺酸鈉較丹參酮ⅡA單體更易吸收；采用丹參ⅡA磺酸鈉預(yù)處理或造模后治療均可改善缺血性腦卒中大鼠的腦水腫，并縮小梗死灶面積，且兩者效果相當(dāng)。另外，結(jié)果還提示，丹參ⅡA磺酸鈉對缺血性腦卒中的治療作用可能是通過清除氧自由基、抗氧化等機(jī)制實(shí)現(xiàn)的。4組大鼠發(fā)熱、白細(xì)胞反應(yīng)的發(fā)生率無明顯差異，而C組和D組大鼠皮疹發(fā)生率明顯高于其余兩組，提示丹參酮ⅡA磺酸鈉可能引起皮疹等不良反應(yīng)，但其具體作用機(jī)制尚有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，丹參酮ⅡA磺酸鈉的利用率較丹參酮ⅡA單體高，可降低LDH和MDA水平，提高SOD水平，對缺血的腦組織起到保護(hù)作用，不良反應(yīng)較小，具有較高的臨床研究價(jià)值。

[1]馮雪華，嚴(yán) 敏．缺血性進(jìn)展性腦卒中的危險(xiǎn)因素[J]．山東醫(yī)藥，2014，54（6）：97 － 98．

[2]賀文彬，楚世峰，陳乃宏，等．丹參總酚酸對大鼠缺血性腦卒中后免疫抑制現(xiàn)象的改善作用[J]．中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2015，29（3）：391 － 397．

[3]中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會神經(jīng)康復(fù)學(xué)組，中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會腦血管病學(xué)組，衛(wèi)生部腦卒中篩查與防治工程委員會辦公室，等．中國腦卒中康復(fù)治療指南（2011完全版）[J]．中國康復(fù)理論與實(shí)踐，2012，18（4）：301 － 318．

[4]李 曼，劉 丙，營潘東．丹參多酚酸鹽聯(lián)合依達(dá)拉奉治療急性缺血性腦卒中臨床研究[J]．中國藥業(yè)，2017，26（1）：74 －76．

[5]李貴琴，王花茹，韓振萍，等．腦卒中并發(fā)抑郁特點(diǎn)及治療效果分析[J]．現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，3（23）：2558．

[6]Pulgarin－Rivera JD，Younes C，Vargas M．Evaluation of a first return stroke model considering the lightning channel tortuosity[J]．Electric Power Systems Research，2014，113（8）：25 － 29．

[7]梁素嬌，劉如良．丹參及其易混淆品的真?zhèn)畏治鯷J]．光明中醫(yī)，2014，2（10）：2215．

[8]楊志霞，林 謙，馬 利，等．丹參對心血管疾病藥理作用的文獻(xiàn)研究[J]．世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，7（2）：93 － 96．

[9]何文鳳，呂 湛，張全波，等．丹參酮在心血管保護(hù)中的藥理作用機(jī)制研究進(jìn)展[J]．中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10（29）：34 －38．

[10]張玉方，趙春景．丹參酮ⅡA及其鈉鹽的藥理研究進(jìn)展[J]．中國藥業(yè)，2008，17（1）:1 － 2．

[11]李海燕．爭議丹參化學(xué)成份及現(xiàn)代藥理應(yīng)用[J]．飲食保健，2015，2（9）：60 － 61．

[12]梅艷飛，張丹參．丹參酮ⅡA的藥理作用及治療應(yīng)用研究進(jìn)展[J]．神經(jīng)藥理學(xué)報(bào)，2014，4（5）：55 －64．

[13]李建恒，喬亞君，侯力峰，等．丹參脂溶性有效成分丹參酮研究進(jìn)展[J]．河北大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2015，35（2）：217－224．

[14]閆福曼．心肌微環(huán)境誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞通道蛋白表達(dá)及丹參酮的干預(yù)作用研究[D]．廣州:廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2009．

[15]Agunloye AM，Owolabi MO．Exploring carotid sonographic parameters associated with stroke risk among hypertensive stroke patients compared to hypertensive controls[J]．Journal of Ultrasound in Medicine：Official Journal of the American Institute of Ultrasound in Medicine，2014，33（6）：975 － 983．

[16]林珈好．丹參酮ⅡA、丹酚酸B與甘草次酸復(fù)方脂質(zhì)體構(gòu)建及體內(nèi)外評價(jià)研究[D]．北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2014．