天然乳膠橡膠避孕套微生物限度方法適用性檢查的研究

張明君 朱毅忠 任艷艷 新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗所 （新疆 烏魯木齊 830004）

天然膠乳橡膠避孕套以其使用方法簡單、副作用小等特點，在世界各國得到廣泛應(yīng)用，是公認為最有效的避孕、阻隔某些性病和艾滋病傳播的醫(yī)用器具[1]。這也表示天然膠乳橡膠避孕套在發(fā)揮其避孕作用的同時，還要起到阻隔病毒、預(yù)防傳播性疾病作用[2]。隨著生活品質(zhì)的提高，人民對避孕套質(zhì)量的要求也隨之提高，同時，作為醫(yī)用器具，其安全性也是必要前提。目前國家標(biāo)準(zhǔn)對避孕套具體的衛(wèi)生技術(shù)要求尚未作明確的規(guī)定，因此有必要對避孕套的微生物限度進行考查。本實驗按照《中國藥典》2015版四部和GB15979-2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》的相關(guān)規(guī)定，對其進行微生物限度方法適用性檢查的研究。

1.資料與方法

1.1 一般資料

儀器：LDZX-50KBS立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠），EL500S電子天平（常州市天之平設(shè)備有限公司），WDP-9272電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海安亭科學(xué)儀器有限公司），QS-PY150智能型生化培養(yǎng)箱（上海奇珊電子科技有限公司），移液管等。

樣品：天然乳膠橡膠避孕套，生產(chǎn)廠家A（批號：20160617231），B（批號：1606532），C（批號：1606182），D（批號：16051），E（批號：1000050375），F(xiàn)（批號：160703），G（批號：15128），H（批號：201512093）。

菌株：大腸埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44 102]，金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26 003]，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B)63 501]、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC(B)10 104]、白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F)98 001]和黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC(F)98 003]。以上菌株均由中國藥品生物制品檢定所提供。

培養(yǎng)基與稀釋液：胰酪大豆胨瓊脂（批號:20170811）、胰酪大豆胨液體（批號:20160719）、沙氏葡萄糖液體（批號:20160722）、乳糖膽鹽發(fā)酵（批號:20161218）、SCDLP液體（批號:20150812）、伊紅美蘭瓊脂（批號:20160722）、十六烷三甲基溴化銨瓊脂（批號:20160520）、葡萄糖肉湯（批號:20170615）、血瓊脂平板（批號:20171205）等均由青島高科園海博生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。0.9%氯化鈉自制。上述培養(yǎng)基經(jīng)121?C高壓蒸汽滅菌后，冷卻至45?C左右，備用。

1.2 方法

1.2.1 菌液的制備

取經(jīng)33?C培養(yǎng)18～24h的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成含菌數(shù)不大于10000cfu/mL的菌懸液；取經(jīng)25?C培養(yǎng)2～3d的白色念珠菌沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成含菌數(shù)不大于10000cfu/mL的菌懸液；取經(jīng)25?C培養(yǎng)5～7d的黑曲霉斜面培養(yǎng)物，用含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成含孢子數(shù)不大于10000cfu/mL的孢子懸液。

1.2.2 供試液制備

取供試品10g，剪碎，加入0.9%無菌氯化鈉溶液至100mL，混勻制成1:10供試液，備用。另取供試品10g，剪碎，加入含2%聚山梨酯-80的0.9%無菌氯化鈉溶液至200mL，混勻制成1:20供試液，備用。

1.2.3 需氧菌總數(shù)方法適用性檢查

平皿法：分別取1:10供試液和1:20供試液各10mL，加入0.1mL制備好的菌液，混勻。取含菌供試液1mL，置直徑90mm的無菌平皿中，注入相應(yīng)的瓊脂培養(yǎng)基，置規(guī)定溫度培養(yǎng)48～72h觀察結(jié)果。見表1和表2。

從表1結(jié)果可以看出，采用平皿法1:10供試液檢驗避孕套，人工污染5株代表菌株，該供試品對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收比值均在0.5～2，而枯草芽孢桿菌的回收比值均低于0.5，因此采用平皿法1:10供試液方法不可取。

表1.需氧菌總數(shù)采用1:10供試液的回收比值

表2.需氧菌總數(shù)采用1:20(含2%聚山梨酯-80)供試液的回收比值

從表2結(jié)果可以看出，采用平皿法1:20（含2%聚山梨酯-80）供試液檢驗避孕套，人工污染5株代表菌株，該供試品對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收比值均在0.5～2，因此需氧菌總數(shù)采用平皿法1:20（含2%聚山梨酯-80）供試液進行試驗。

1.2.4 控制菌檢查方法的驗證

大腸菌群檢查：取1:20（含2%聚山梨酯-80）供試液5mL，接種50mL乳糖膽鹽發(fā)酵管，置33?C培養(yǎng)24h；銅綠假單胞菌檢查：取1:20（含2%聚山梨酯-80）供試液5mL，接種50mL SCDLP培養(yǎng)液中，置33?C培養(yǎng)24h；金黃色葡萄球菌檢查：取1:20（含2%聚山梨酯-80）供試液5mL，接種50mL SCDLP培養(yǎng)液中，置33?C培養(yǎng)24h；溶血性鏈球菌：取1:20（含2%聚山梨酯-80）供試液5mL，接種50mL葡萄糖肉湯中，置33?C培養(yǎng)24h；符合GB15979-2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》的相關(guān)要求，大腸菌群、銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌均為陽性。

2.結(jié)果

天然乳膠橡膠避孕套微生物限度檢查方法：取供試品10g，剪碎，加入含2%聚山梨酯-80的0.9%無菌氯化鈉溶液至200mL，混勻制成1:20供試液，需氧菌總數(shù)采用1:20（含2%聚山梨酯-80）供試液平皿法檢驗，大腸菌群、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌控制菌檢查采用常規(guī)方法檢驗。

3.討論

本實驗對8個廠家的天然膠乳橡膠避孕套進行了微生物限度的方法適用性檢查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有8個廠家的枯草芽孢桿菌回收比值均低于0.5，在增加稀釋液體積和加入適量的中和劑后，而枯草芽孢桿菌回收比值達到0.5～2，符合《中國藥典》2015年版四部的相關(guān)要求。由于避孕套的表面包裹著一層潤滑劑，而各個廠家的潤滑劑的種類和用量又各不相同，雖然有效的增加了其使用的方便和安全，但是對微生物的檢查存在著很大的障礙[3]。本實驗初步考查了天然膠乳橡膠避孕套的微生物限度檢查，為今后制定避孕套的微生物限度檢測提供參考。

[1]寧麗峰,原思淵,郭穎志,等.天然乳膠橡膠避孕套安全性研究進展[J].中國計劃生育學(xué)雜志,2013,21(8):557-560.

[2]肖憶梅.對GB7544《天然膠乳橡膠避孕套技術(shù)要求和試驗方法》的幾點商榷和建議[J].中國醫(yī)療器械雜志,2010,34(6):448-449.

[3]鄧一志.天然膠乳橡膠避孕套衛(wèi)生技術(shù)要求探討[J].中國石油和化工標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量,2009,29(5):25-28.